Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Стерн К.И. 1 Малкова Т.Л. 1

---

1 ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздрава России

Статья посвящена проблеме неконтролируемого употребления сильнодействующих веществ (сибутрамина и его структурных аналогов, метаболитов десметилсибутрамина и дидесметилсибутрамина) в биологически активных добавках к пище. В научной литературе отсутствует какая-либо информация по контролю БАД на наличие сильнодействующих веществ, в то время как в практике судебно-химических исследований имеются факты обнаружения данных веществ в данных продуктах. В связи с этим возникла необходимость усовершенствования процедуры обнаружения сильнодействующих веществ методами качественного и количественного анализа. Разработана методика определения десметилсибутрамина методом газо-жидкостной хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием. Аналитическая область методики составила 10 – 1000 мкг/мл. Методика валидирована по показателям линейность, правильность, прецизионность и обладает хорошей воспроизводимостью. Данная методика может использоваться в соответствующих аналитических лабораториях.

Статья в формате PDF

242 KB

валидация

психоактивные вещества

десметилсибутрамин

количественный анализ

газо-жидкостная хроматография

1. Валидация методов контроля качества // Руководство по инструментальным методам исследований при разработке и экспертизе качества лекарственных препаратов / под ред. Быковского С. Н. и др. – М. : Перо, 2014. – Разд. 3.3. – С. 80-116.

2. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) : [Электронный ресурс] // Евразийская экономическая комиссия. – Режим доступа : http://www.tsouz.ru/KTS/KTS17/Pages/P2_299.aspx. – Загл. с экрана (дата обращения: 24.07.14).

3. Об утверждении списков сильнодействующих и ядовитых веществ для целей статьи 234 и других статей Уголовного кодекса Рос. Федерации, а также крупного размера сильнодействующих веществ для целей статьи 234 Уголовного кодекса Рос. Федерации [Электронный ресурс]: постановление Правительства Российской Федерации от 29 декабря 2007 года № 964 // Информационно-правовой портал Гарант. – Режим доступа : http://base.garant.ru/12158202/. – Загл. с экрана (дата обращения: 21.10.14).

4. Сыромятников, С. В. Криминалистическое исследование препаратов, содержащих сибутрамин / С. В. Сыромятников, И. И. Сарычев, Е. А. Гайдукова // Судебная экспертиза. – 2008. - № 4. – С. 61-67.

5. Brain serotonin transporter occupancy by oral sibutramine dosed to teady state: a pet study using 11C-DASB in healthy humans / P. S. Talbot еt al.// Neuropsychopharmacology. – 2009. – Р. 1-11.

6. BTS 54525, A Monoamine uptake inhibitor exhibiting potent actions in models predictive of potential antidepressant activity / W. R. Buckett et al. // British Journal of Pharmacology. – 1987. - № 90. – Р. 94.

7. Identification of N-desmethylsibutramine as a new ingredient in Chinese herbal dietary supplements / Blachut D. et al. // Problems of Forensic Sciences. – 2007. – LXX. – P. 225-235.

8. Simultaneous determination of sibutramine and N-di-desmethylsibutramine in dietary supplements for weight control by HPLC-ESI-MS / Ziqiang Huang et al. // Journal of Chromatographic Science. – 2008. - № 46. – P. 707-711.

Проблема злоупотребления психоактивными веществами в России из года в год становится все более актуальной. В последнее время участились случаи обнаружения сибутрамина и его активных метаболитов (М1 и М2) в биологически активных добавках для похудения (БАД). Федеральная Служба РФ по контролю за оборотом наркотиков в Методических рекомендациях по криминалистическому исследованию сибутрамина от 2006 г. сообщала, что, с учетом дофаминовой теории формирования наркологических заболеваний, сибутрамин может вызывать привыкание и зависимость, а клинические описания его действия позволяют предположить использование его потребителями психоактивных веществ в качестве психостимулятора [4]. С 2008 года сибутрамин, а также его структурные аналоги, обладающие схожим психоактивным действием, включены в список сильнодействующих веществ для целей статьи 234 и других статей Уголовного кодекса Российской Федерации [3].

Сибутрамин метаболизируется изоферментом CYP3А4 до деметилированных метаболитов M1 и М2 (моно- и дидесметилсибутрамин), которые обуславливают его терапевтический эффект и являются структурными аналогами сибутрамина [6, 7, 8]. Установлено, что десметилсибутрамин (ДМС) и дидесметилсибутрамин (ДДМС) примерно в 100 раз активнее исходного соединения [5, 8].

Согласно действующему законодательству РФ, сильнодействующие вещества и их аналоги запрещены к использованию в составе БАД [2]. Ввиду сложившейся ситуации вопрос об усовершенствовании процедуры обнаружения посторонних токсикологически важных веществ, не заявленных в составе БАД, стоит достаточно остро. Однако на сегодняшний день в литературных источниках отсутствует какая-либо информация по процедуре контроля БАД на наличие сильнодействующих веществ, в то время как в практике судебно-химических исследований имеются факты обнаружения данных веществ в биологически активных добавках к пище.

Цель исследования

Разработка методики количественного определения активного метаболита сибутрамина, ДМС, методом газо-жидкостной хроматографии (ГЖХ).

Материал и методы исследования

Субстанцию ДМС получали из содержимого капсул «Жуйдэмэн» (500 мг, № 60), содержащих данное вещество, при комнатной температуре следующим образом: содержимое капсул высыпали в чистую стеклянную склянку, залили спиртом этиловым 95% (1:10), встряхивали в течение 15 минут, затем надосадочную жидкость сливали в чистую стеклянную склянку. Оставшийся осадок вновь заливали спиртом этиловым 95% и операции повторяли. Надосадочные жидкости объединяли и выпаривали без нагревания до сухого остатка. Получившийся сухой остаток брался из расчета, что его состав соответствует экстракту содержимого одной капсулы. После перекристаллизации экстракт был проанализирован на газовом хроматографе Agilent 7890A с масс-спектрометром Agilent 5975C, в результате чего была идентифицирована и подтверждена его химическая структура: масс-спектр пика со временем удерживания 13,18 мин соответствовал библиотечному масс-спектру ДМС (рис. 1).

Рисунок 1. Хроматограмма перекристаллизованного экстракта (верхняя часть рисунка), масс-спектр пика с временем удерживания 13,18 мин (средняя часть рисунка) и библиотечный масс-спектр десметилсибутрамина (нижняя часть рисунка).

Готовили растворы ДМС в этиловом 96 % спирте в концентрациях 1 мг/мл, 500 мкг/мл, 200 мкг/мл, 100 мкг/мл, 50 мкг/мл и 10 мкг/мл. В качестве внутреннего стандарта использовали раствор метилстеарата в 96 % этиловом спирте в концентрации 1 мг/мл.

Исследование проводили на газовом хроматографе Хроматэк-Кристалл 5000 с пламенно-ионизационным детектором в следующих условиях: колонка HP-5MS, скорость потока газа-носителя (азот) 2,3 мл/мин, температура термостата колонки начальная 170 °С, конечная – 220 °С, температура детектора 250 °С, температура испарителя 230 °С, ввод пробы с делением потока 1/3, объем вводимой пробы 1 мкл, время хроматографирования 18 мин.

Результаты исследования и их обсуждение

Количественное определение ДМС осуществляли методом ГЖХ с расчетом концентрации по методу внутреннего стандарта, в качестве которого был выбран метилстеарат, преимуществами использования которого являются его хроматографические свойства, близкие к определяемому веществу, стабильность полученных результатов, и доступность для закупки на территории РФ.

Время удерживания ДМС и метилстеарата в заданных условиях хроматографирования составило 7,07 мин и 10,93 мин соответственно (рис. 2).

Рисунок 2. Хроматограмма раствора ДМС с внутренним стандартом (метилстеарат) в концентрации 1000 мкг/мл.

Валидацию разработанной методики осуществляли по показателям: линейность, правильность, прецизионность (на уровне intra-day и inter-day), аналитическая область [1].

Линейность

Для определения линейности проводили анализ 6 калибровочных спиртовых растворов ДМС с концентрациями от 10 мкг/мл до 1000 мкг/мл в присутствии внутреннего стандарта (1000 мкг/мл) (табл. 1).

Таблица 1

Значения концентраций калибровочных растворов и отношений площадей пиков ДМС к площадям пиков метилстеарата

*СДМС – концентрация десметилсибутрамина в растворе, СМС – концентрация метилстеарата в растворе,

SДМС – площадь пика ДМС, SМС – площадь пика метилстеарата.

По полученным значениям строили график линейной зависимости. Были рассчитаны коэффициенты регрессионной прямой у = 0,0006х методом наименьших квадратов, где у – среднее значение отношения площади пика ДМС к площади пика метилстеарата, рассчитанное по трем хроматограммам, х – концентрация ДМС, мкг/мл (Сфакт). (рис. 3).

Рисунок 3. Калибровочный график зависимости отношения площади пика ДМС к площади пика метилстеарата от концентрации ДМС в растворе

Квадрат линейного коэффициента корреляции (R2) характеризует степень соответствия между регрессионной моделью и исходными данными. В данном случае 99,68% изменений зависимой переменной описывается регрессионным уравнением. Коэффициент корреляции R = 0,9984, что свидетельствует о наличии прямой линейной зависимости между площадью пика ДМС и его концентрацией в растворе.

Правильность и прецизионность

Для оценки правильности и прецизионности методики проводили анализ 3 калибровочных спиртовых растворов ДМС с концентрациями 10 мкг/мл, 200 мкг/мл, и 1000 мкг/мл в течение первого дня (intra-day) и второго дня (inter-day). Каждый раствор хроматографировали в трех повторностях. Для полученных значений концентрации ДМС рассчитывали величину стандартного отклонения (SD), относительного стандартного отклонения (RSD, %) и отклонение от заданной величины (ε, %). Данные представлены в таблицах 2 и 3.

Таблица 2

Оценка правильности и прецизионности (intra-day)

*Сфакт – фактическая концентрация ДМС в растворе, Сизм – концентрация ДМС в растворе, рассчитанная по методике.

Таблица 3

Оценка правильности и прецизионности (inter-day)

*Сфакт – фактическая концентрация ДМС в растворе, Сизм – концентрация ДМС в растворе, рассчитанная по методике.

Полученные значения RSD и ε свидетельствуют о достаточной степени соответствия между истинным значением определяемого вещества и его значением, рассчитанным по данной методике.

Аналитическая область методики

Аналитическая область методики на основании результатов оценки линейности, правильности и прецизионности составила 10 – 1000 мкг/мл.

Заключение

Разработана методика количественного определения десметилсибутрамина методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационной детекцией, обладающая необходимой линейностью, правильностью и прецизионностью, что позволяет говорить о хороших валидационных характеристиках данной методики.

Рецензенты:

Вихарева Е.В., д.фарм.н., доцент, заведующий кафедрой аналитической химии ГБОУ ВПО ПГФА Минздрава России, г. Пермь;

Ярыгина Т.И., д.фарм.н., профессор кафедры фармацевтической химии факультета очного обучения ГБОУ ВПО ПГФА Минздрава России, г. Пермь.

Библиографическая ссылка