Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Жилякова Е.Т. 1 Зинченко А.А. 2 Придачина Д.В. 1 Новиков О.О. 1 Новикова М.Ю. 1

---

1 ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ»)

2 ГП "Украинский научный Фармакопейный центр качества лекарственных средств"

В статье представлены результаты разработанной методики анализа бензалкония хлорида методом ВЭЖХ. В рамках научно-исследовательской работы разработан многокомпонентный состав глазных капель для профилактики и лечения синдрома «сухого глаза» группы «искусственная слеза», с рабочим названием «АкваВит» с консервантом в составе. В качестве консерванта в глазные капли введен бензалкония хлорид в концентрации 0,01%. Разработанная методика качественного и количественного определения бензалкония хлорида в препарате, позволяет контролировать качество препарата. Проведена валидационная оценка методики количественного и качественного определения бензалкония хлорида, подтверждена линейность, прецизионность и правильность методики определения бензалкония хлорида методом ВЭЖХ в препарате в диапазоне применения от 80 % до 120 % от номинальных 100 % в препарате.

Статья в формате PDF

436 KB

бензалкония хлорид

высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

глазные капли

синдром «сухого глаза»

«Искусственная слеза»

1. Государственная фармакопея СССР. XIизд. Вып 1. М.: Медицина. 1987.

2. Технологияи стандартизация лекарств [Текст]:cб.науч.тр.:в 2т./Гос. науч. центр лекарств.средств(ГНЦЛС) Госкоммедбиопром ; ред.: В. П. Георгиевский,Ф.А.Конев.–Харьков:РИРЕГ,1996-2000.–Т.2.–Харьков, 2000. –784с.

3. United States Pharmacopeia 35th edition // United States Pharmacopeia Convention. Доступ по подписке. URL: http://www.uspnf.com/uspnf/login

4. De Saint Jean M., Brignole F., Bringuier A.F. et al. Effects of benzalkonium chloride on growth and survival of Chang conjunctival cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.– 1999.– Vol. 40, № 3.– P. 619-630.

5. Patarca R., Fletcher M.A. Effects of benzalkonium salts on eukaryotic and microbial G-protein-mediated processes and surface membranes // Crit. Rev. Oncog.– 1995.– Vol. 6.– P. 327-356.

В рамках научно-исследовательской работыразработан многокомпонентный состав глазных капель для профилактики и лечения синдрома «сухого глаза» группы «искусственная слеза», с рабочим названием «АкваВит». На рисунке 1 представленыактивные и вспомогательные вещества, входящие в состав глазных капель.

Рис.1. Состав глазных капель с рабочим названием «АкваВит»

Как показано на рисунке 1 в качестве активных веществ в состав разработанных глазных капель введены витамины группы В (пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламин), дифенгидрамина гидрохлорид, раствор гидроксиэтилцеллюлозы выполняетроль пролонгирующего агента. В качестве вспомогательных веществ в состав глазных капель введены: натрия хлорид для достижения оптимального значения осмолярности (239 - 376 мОсм/л),глазные капли готовили на фосфатном буфером растворе (рН=7,4) [1,3].

Для глазных капель с рабочим названием «АкваВит» разработана технологическая схема производства с учетом современных тенденций развития фармацевтической промышленности, ориентированной на выпуск глазных капель в одноразовых тюбик-капельницах по технологии «blow-fill-seal» («выдув-наполнение запайка»), которая позволяет исключить из состава консервант.

Разработана технологическая схема производства в «стеклянном» флаконе, с введением в качестве консерванта бензалкония хлорида в концентрации 0,01%.

Бензалкония хлорид является наиболее широко используемым консервантом в офтальмологических лекарственных препаратах, что связано с хорошей растворимостью в воде, широким спектром антимикробной активности[4]. Бензалкония хлорид является четвертичным аммониевым соединением [5]. Бензалкония хлорид является катионным поверхностно-активным веществом, способен снижать поверхностное натяжение раствора глазных капель, что является важным фактором при разработке офтальмологического препарата[2].

Целью данного исследования является разработка метода анализа консерванта в составе глазных капель.

Материалы и методы исследования

В основе разработанной методики идентификации и количественного определения бензалкония хлорида лежит использование метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Разработку анализа препарата проводили с использованием жидкостного хроматографа Shimadzu LC-20 Prominence, снабженного двумя насосами высокого давления LC-20AВ, автосамплером SIL-20A, УФ-спектрофотометрическим детектором SPD-20AV, системным контролером CBM-20ALITE.

Для хроматографирования использовали аналитическую колонку стальную размером 150 мм х 4,6 мм, заполненную сорбентом «Discovery® C18», размер частиц 5 мкм (кат № 105962-01, Supelco).

Результаты исследования и их обсуждение

Объем вводимой пробы составил 20 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения бензалкония хлорида (Fluka, Дания), детекцию проводили спектрофотометрически при длине волны 220 нм. (скорость подвижной фазы – 0,8 мл/мин.; температура колонки - + 30оС).

Приготовление испытуемого раствора, растворов сравнения, подвижной фазы проводили согласно следующим методикам.

Приготовление испытуемого раствора 5,0 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают.

Полученный раствор фильтруют через фторопластовый фильтр с размером пор 0,45 мкм, отбрасывая первые 1,5 мл фильтрата. (10 мкг/мл)

Приготовление раствора сравнения бензалкония хлорида. Около 60 мг (точная навеска) бензалкония хлорида помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл воды, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают. 2,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают.

Приготовление подвижной фазы. В мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, помещают 800 мл ацетонитрила, прибавляют 200 мл фосфатного буферного раствора рН 3,0 и перемешивают. Полученный раствор фильтруют под вакуумом через фторопластовый фильтр 0,45 мкм.

Количественное содержание бензалкония хлорида (Хbc), в миллиграммах в 1 мл, рассчитывают по формуле 1:

(1)

где (Sc12 + Sc14) – среднее значение суммы площадей пиков гомологов бензалкония С12 и С14 рассчитанное из хроматограмм испытуемого раствора; (SoC12 + SoC14) - среднее значение суммы площадей пиков гомологов бензалкония С12 и С14 рассчитанное из хроматограмм раствора сравнения бензалкония хлорида; mo – масса навески СО бензалкония хлорида, в миллиграммах; Р – содержание бензалкония хлорида, в СО бензалкония хлорида, в процентах (90,54%).

Содержание бензалкония хлорида в 1 мл препарата должно быть от 0,085 мг до 0,115 мг.

Результаты считают достоверными, если выполняются следующие условия: эффективность хроматографической системы, рассчитанная по пику бензалкония хлорида гомолога С14, должна быть не менее 1000 теоретических тарелок, коэффициент разделения пиков бензалкония гомологов С12 и С14 должен быть не менее 3,0.

Количественное содержание бензалкония хлорида в испытуемом растворе препарата рассчитывают по величине суммы площадей пиков гомологов бензалкония С12 и С14 с учетом полученных хроматограмм стандартного образца исследуемого вещества (формула 1). Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1. Результаты количественного определения бензалкония хлорида в испытуемых растворах препарата

На рисунке 2представлена хроматограмма раствора сравнения СО бензалкония хлорида, на рисунке 3представлена хроматограмма испытуемого раствора препарата. Время удерживания пиков бензалкония хлорида (4,02 минуты и 6,25 минуты пики гомологов С12 и С14 соответственно) на хроматограммах испытуемого раствора препарата совпадает со временем удерживания пиков на хроматограммах раствора сравнения (4,06 минуты и 6,30 минуты пики гомологов С12 и С14 соответственно).

Рис. 2. Хроматограмма раствора сравнения СО бензалкония хлорида

Рис. 3. Хроматограмма испытуемого раствора глазных капель

Выбранные условия хроматографирования позволяют отделить пики гомологов бензалкония хлорида (С12, С14) от системных пиков растворителя («бланка») и пиков вспомогательных веществ препарата и от пиков других действующих веществ. Полученные пики характеризуются достаточной интенсивностью и симметричностью, как показано на рисунке 2 и рисунке 3.

Заключение

Разработанная методика качественного и количественного определения бензалкония хлорида в препарате, позволяет контролировать качество препарата с содержанием в составе консерванта. Проведена валидационная оценка методики количественного и качественного определния бензалкония хлорида, подтверждена линейность, прецизионность и правильность методики определения бензалкония хлорида методом ВЭЖХ в препарате в диапазоне применения от 80 % до 120 % от номинальных 100 % в препарате.

Рецензенты:

Дейнека В.И., д.х.н., профессор кафедры общей химии Национального исследовательского университета ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет», г.Белгород.

Писарев Д.И., д.фарм.н., доцент кафедры фармацевтической химии и фармакогнозии фармацевтического факультета медицинского института Национального исследовательского университета ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет», г.Белгород.

Библиографическая ссылка