Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ АНТИГЕНОВ HLA – АЛЛЕЛЕЙ ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ И ДОНОРОВ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

Баратова М.А. 3 Баратова Д.А. 1, 4 Джапаркулова А.Д. 2, 1 Нурлыханов Е.Б. 1, 5
1 МОО «Национальный Регистр гемопоэтических стволовых клеток Киргизии в Санкт-Петербурге»
2 ГУ «Национальный Госпиталь при Министерстве здравоохранения Кыргызской Республики»
3 3АО «Республиканский научный центр неотложной медицинской помощи»
4 НМУ «Евразийский центр онкогематологии, иммунологии и терапии»
5 ГУ «Областная клиническая больница» Шымкент
В статье представлены результаты исследований иммуногенетических характеристик больных множественной миеломой и доноров костного мозга киргизской национальности. Типирование проводилось у здоровых доноров киргизской национальности впервые по системе HLA – аллелей I класса локусов (А и В) и HLA – аллелей II класса локуса DRB1*, в сопоставлении с данными больных множественной миеломой киргизской национальности, при этом имеются достаточно высоко достоверные значимые отличия. Выявлены комплексными лабораторными методами значимые HLA-маркеры у киргизской нации. Таким образом, выявленные различия в сопоставлении с контрольной популяционной группой позволят своевременно подобрать доноров костного мозга и применять высокотехнологичные методы лечения, что улучшит выживаемость при множественной миеломе и при других онкогематологических патологиях на раннем этапе заболевания.
гемопоэтические клетки
HLA
множественная миелома
доноры
киргизская нация
1. Баратова Д.А. Сравнительная характеристика распределения HLA-аллелей I и II классов у больных множественной миеломой и здоровых лиц киргизской национальности и жителей Северо-западного региона Российской Федерации. :Автореферат дисс.. канд. мед. наук. Санкт - Петербург; 2000. С.3.
2.Баратова Д.А., Баратова М.А. Иммуногенетические HLA- маркеры I и II классов у больных с множественной миеломой. [Электронный ресурс] //Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 3; URL:http://www.science-education.ru/117-13650 (дата обращения: 24.06.2014).
3. Баратова М.А., Баратова Д.А. Прогностически значимые маркеры у больных с множественной миеломой [Электронный ресурс] //Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 4; URL: http://www.science-education.ru/117-13759 (дата обращения: 02.07.2014).
4.Воробьёв А.И., Кременецкая А.М. Атлас опухоли лимфатической системы - М.: Ньюмедиамед, 2007. С. 98-102.
5. Miller C., Ehninger G.,Goldmann S.Gene and haplotyre frequency for the loci HLA-A, HLA-B, and HLA-DR based on over 13,000 German Blood Donors//Human Immunol. 2003.Vol. 64. № 1. Р.137.

Множественная миелома (ММ)- это β - клеточное лимфопролиферативное заболевание, основным морфологическим субстратом которого являются клональные плазматические клетки продуцирующие моноклональный иммуноглобулин Ig A,IgG,IgD,IgE и легкие (k,λ) цепи.

Общеизвестно, что ММ довольно часто встречается во всех странах у людей всех рас, возраст больных составляет у мужчин- 68 лет, у женщин -70 лет, считается как «болезнь пожилого возраста». В последние годы наблюдается тенденция к омоложению заболевания, чаще встречаются пациенты среднего возраста в популяции 3-4 случая на 100.000 населения в год [4].

Авторами в работе [3] описано, что поскольку заболевание распознается на поздних сроках, отсутствуют критерии изменения в системе крови, которые являются маркерами злокачественного заболевания особенно на ранних этапах её развития.

Проведение аллогенной трансплантации костного мозга в настоящее время проводятся, в основном, больным, имеющим HLA-идентичных сиблингов. Количество таких больных составляет не более 30-35%, которым показана трансплантация костного мозга, в связи с этим предпринимаются усилия по использованию таких категорий доноров, как родственники реципиентов, не полностью совпадающие по HLA-антигенам и неродственные доноры, полностью подобранные по HLA-фенотипу. Наиболее перспективной представляются неродственные доноры, полностью подобранные по HLA-фенотипу.

В тоже время, известно, что, не для всех этнических народов и национальностей можно найти совместимого донора, с этой целью иммуно-селективными методами крайне важно выявление доноров по антигенам комплекса HLA-аллелей I и II классов, при которых идентичность костного мозга донора и больного, свидетельствует об их полной совместимости.

Автором в работе [5] описано, что для каждого этнического народа необходима собственная «контрольная выборка», которая диктуется как популяционно-специфическим характером HLA среди здорового населения, так и возможностью межпопуляционных отличий HLA-маркеров генетической предрасположенностью к тому или иному заболеванию.

В последние годы, среди этнических народов и национальностей сложно найти совместимого донора гемопоэтических стволовых клеток в Европейских и Американских регистрах, что потребовало создания собственного регистра доноров костного мозга, например, Китая, Японии [1]. И на современном этапе для превращения трансплантации костного мозга в лечебный метод и изучения HLA -генетического разнообразия жителей разных регионов страны, необходимы национальные регистры, которые будут в тесном сотрудничестве осуществлять поиск доноров, а также расширению базы данных о потенциальных донорах гемопоэтических стволовых клеток с идентификацией антигенов гистосовместимости I и II классов.

Тем не менее, из-за мало изученности частоты встречаемости антигенов системы HLA, среди различных этнических народов на сегодняшний день - это вызывает принципиальные трудности.

Авторами в работе [2], проведены изучение иммуногенетических и популяционных характеристик в распределении антигенов по системе HLA -аллелей I и II классов у больных с множественной миеломой киргизской национальности.

Для сопоставления данных результатов больных множественной миеломой киргизской национальности, нами проведено собственное исследование антигенов главного комплекса гистосовместимости у потенциальных доноров киргизской национальности.

Целью нашего исследования является изучение иммуногенетических характеристик в распределении по системе HLA-аллелей I и II классов у больных множественной миеломой и доноров гемопоэтических стволовых клеток киргизской национальности.

Материалы и методы исследования

Для изучения иммунологических и популяционных характеристик по системе HLA-аллелей I класса локусов (А и В) были типированы 127 добровольных доноров киргизской национальности (54 женщин и 73 мужчин) из Национального Регистра гемопоэтических стволовых клеток Киргизии с 1998 по 2009 год, из них 78 доноров (16 женщин и 62 мужчин) типированы по II классу локус DRB1* в возрасте от 18 до 50 лет. Исследования проводились в лаборатории иммуногематологии Российского НИИ гематологии и трансфузиологии.

Данные сопоставлялись с контрольной группой - 22 больными множественной миеломой

киргизской национальности, наблюдавшиеся в Национальном госпитале при МЗ Киргизской Республики граждане Киргизской Республики, типированные по системе HLA-аллелей 1 и II классов с 1996 по 1998 г. в лаборатории иммунологии Санкт-Петербургской клинической больницы № 31 (Клинического центра Передовых Медицинских Технологий) [2]. Доставка и транспортировка анализов проводилось в минихолодильных контейнерах при -10 оС.

Типирование HLA-антигенов I-класса.

Определение HLA-А и В фенотипа обследуемых лиц проводили серологическим методом с использованием панели гистотипирующих антилейкоцитарных сывороток Российского НИИ гематологии и трансфузиологии, позволяющим определить 17 антигенов локуса А и 27 антигенов локуса В.

Типирование HLA-антигенов II-класса.

Молекулярное типирование HLA- генов локуса DRB1* проводилось методом полимеразной цепной реакцией, с использованием набора отечественных праймеров фирмы «ДНК-технология» (Москва), позволяющего выделять 13 групп аллелей HLA-DRB*1(базовое разрешение). Геномная ДНК выделялась из мононуклеарных клеток периферической крови (свежей или замороженной при -20 оС), стабилизированной ЭDТА или цитратом натрия (конечная концентрации антикоагулянта 0,5 %), с помощью набора реагентов «НПФ ДНК-Технология» Москва или иммуномагнитным методом с использованием набора фирмы «Dynal». Все этапы амплификации проводились на амплификаторе «ТЕРЦИК» «ДНК-Технология», Москва. Продукт, полученный в ходе амплификации, определяли методом горизонтального электрофореза в 3,2 % агарном геле с визуализацией в ультрафиолетовом свете L=320 nm. Специфичность продукта амплификации сравнивали со стандартным маркером длин ДНК PUC-09.

Статистическая обработка полученных результатов включала в себя анализ стандартных критериев. X2-квадрат использовался для оценки достоверности различий по встречаемости определенных признаков между контрольной группой и группой пациентов ММ. Определение величины "р", соответствующей найденному значению X2-квадрат, велось по компьютерной программе с учетом одной степени свободы.

Все математические расчеты и общий статистический анализ полученных исследований

проводили с помощью персонального компьютера с использованием пакета прикладных программ для Электронных Таблиц - Microsoft - ExcelM Версия 7,0 для Windows 95, для Windows-2010, Statistica-5.

Результаты и их обсуждение

Проведённые нами исследования среди киргизской нации, по системе HLA -1 -II классов, показало, что по частоте встречаемости имеются наиболее распространенные и весьма различающие ряды генов.

Иммуногенетические маркеры у больных множественной миеломой и здоровых доноров костного мозга киргизской национальности

При сравнительной характеристике результатов анализа по системе HLA-аллелей 1 класса локусов (А и В) больных множественной миеломой и здоровых доноров киргизской национальности, данные, которых представлены на рисунке, выявляются значимые иммуногенетические маркеры, характерные для больных множественной миеломой киргизской национальности, гены HLA-А24 в 10 % случаев, HLA-А25 в 20%, HLA-A26 в 10 %, HLA-A28 в 20 %, HLA-B7в 20 %, HLA-B13 в 30,0% и HLA-B14 в 10 % случаев.

Наиболее распространенные у здоровых доноров по частоте встречаемости гены HLA-А24 в 53,1%, HLA-А26 в 20,4%, HLA-B7 в 8,2%, HLA-B13 в 12,2% и несколько реже ген HLA-А25 в 6,1% случаев, практически в единичных случаях встречается ген HLA-A-B14 в 2,0 % и не встречается ген HLA-А28 в 0 % случаев.

По значимости, встречаемости между больными множественной миеломой киргизской национальности и контролем является ген HLA-А25, ген HLA-А28, ген HLA-В7, ген HLA-В13, где имеются статистически высоко достоверные различия Р< 0,001.

Сопоставление HLA-аллелей II класса локуса DRB1*больных множественной миеломой и здоровых потенциальных доноров костного мозга киргизской национальности

HLA-

локус DRB1*

доноры

киргизской национальности

п = 78

больные ММ

киргизской национальности

п = 22

0901

0,13%

20% р < 0,003

1001

0,05%

10% р < 0,04

1401

0,28%

20% р < 0,04

1601

0,005%

20% р < 0,005

При распределении антигенов HLA-аллелей II класса локуса DRB1* данные, которых представлены на таблице, показано, что чаще у больных множественной миеломой киргизской национальности, встречаются гены HLA -DRB1*0901,HLA-DRB1*1401,HLA-DRB1* 1601 и несколько реже выявляются HLA- DRB1*1001 по сравнению со здоровыми донорами киргизской национальности и имеются статистически высоко достоверные различия.

У здоровых доноров киргизской национальности встречаются гены HLA- DRB1* 0901 в 0,13 % случаев, HLA- DRB1*1401 в 0,28 % и практически в единичных случаях встречаются ген HLA- DRB1*1001 в 0,05% и ген НLA-DRB1* 1601 в 0,005%.

Заключение

Таким образом, в результате проведенных исследований в распределении HLA - аллелей 1 класса, установлено, что наиболее часто встречаются у доноров киргизской популяции гены в локусе А -HLA -А24, -А26, в локусе В- HLA-B7, -B13, несколько реже - А25, B14. По системе HLA - аллелей II класса локуса DRB1*наиболее часто встречаются гены HLA-DRB1*0901, HLA-DRB1* 1401.

Характерные для больных множественной миеломой киргизской национальности в распределении HLA - аллелей 1 класса в локусе А - гены HLA- А24,-А25, -А26 -A28, в локусе В

- HLA-B7, B13,-B14, а в распределении HLA - аллелей II класса локуса DRB1*, оказалось, что у больных множественной миеломой киргизской национальности, чаще выявляются гены HLA-DRB1*0901, HLA- DRB1*1001, HLA-DRB1*1401, HLA-DRB1*1601.

Выявленные различия в распределении HLA-аллелей следует учитывать при планировании близкородственной, неродственной трансплантации костного мозга, у больных ММ и при других злокачественных заболеваниях. При планировании неродственной трансплантации костного мозга необходим качественный подбор донора, с целью профилактики посттрансплантационных осложнений. По принципу «Не навредить ни больному и ни донору». Трансплантация костного мозга дает наилучшие результаты для увеличения показателей выживаемости при онкогематологических заболеваниях. Хотя частота встречаемости больных ММ чаще в пожилом возрасте и из-за многообразия сопутствующей патологии, не зависимо от возраста своевременный подбор ПХТ и при наличии HLA-идентичного донора рекомендуется трансплантация гемопоэтических стволовых клеток.

Рецензенты:

Молдобаева М.С., д.м.н., профессор, заведующая кафедрой пропедевтики внутренних болезней с курсом эндокринологии Кыргызской государственной медицинской академии, президент Кыргызской ассоциации специалистов по инфекционным болезням, вице-президент ассоциации гастроэнтерологов Кыргызской Республики, г. Бишкек;

Краева Л.А., д.м.н., ведущий научный сотрудник, ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. Санкт-Петербург.


Библиографическая ссылка

Баратова Д.А., Нурлыханов Е.Б., Джапаркулова А.Д., Баратова М.А., Баратова Д.А., Джапаркулова А.Д., Нурлыханов Е.Б. ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ АНТИГЕНОВ HLA – АЛЛЕЛЕЙ ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ И ДОНОРОВ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК // Современные проблемы науки и образования. – 2014. – № 5.;
URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=14892 (дата обращения: 15.09.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252