Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЕРАПАМИЛА В ГЕЛЕ МЕТОДОМ ПЛАНАРНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Мезенова Т.Д. 1 Ушакова Л.С. 1 Леонова В.Н. 1 Жидкова Ю.Ю. 2 Пеньевская Н.А. 2
1 Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет»
2 ГБОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия»
Разработана методика идентификации и количественного определения верапамила в геле. Использовали метод тонкослойной хроматографии с видеоденситометрической регистрацией аналитического сигнала. Для хроматографирования использовали пластинки марки «Sorbfil ПТСХ-АФ-В-УФ» размером 10х15 см. Подвижная фаза - система растворителей «ацетон - вода очищенная» (8:2). Детектирующий реагент – реактив Бушарда. На жёлтом фоне реактива появляются пятна коричневого цвета с Rf 0,55±0,01. Предел обнаружения реагента 0,4 мкг. Валидация методики количественного анализа проведена по следующим критериям: чувствительность, линейность, правильность и сходимость результатов. Градуировочный график описывается уравнением S = 1,69.104 m; коэффициент корреляции r = 0,995 в интервале концентраций 0,5–2 мкг/мкл. Правильность методики определяли методом «введено-найдено» на 5 уровнях концентраций стандартного образца (RSD = 3,73%). Предел обнаружения количественного определения - 1,2 мкг. Сходимость оценивали по результатам повторного определения содержания верапамила в разных растворах и на разных пластинках. Данным методом определено 0,93±0,057 г верапамила в 100 г геля (RSD = 5,9%). Полученные данные свидетельствуют, что методика специфична, имеет достаточно высокую чувствительность и эффективность. Методика количественного определения отвечает необходимым требованиям по показателям чувствительность, линейность, правильность и сходимость.
количественное определения
идентификация
видеоденситометрия
тонкослойная хроматография
верапамил
1. Государственная фармакопея РФ. – ХII изд. – М., 2007. – Ч. I. – 697 с.
2. Кормишин В.А. Денситометрический анализ верапамила в судебно-химической экспертизе / Кормишин В.А., Воронин А.В., Шаталаев И.Ф. // Вопросы науки и техники : материалы Международной заочной научно-практической конференции (16 января 2012 г.). – Новосибирск : ЭКОР-книга, 2012. – Ч. I. - С. 31–35.
3. Красиков В.Д. Основы планарной хроматографии. – СПб. : Химиздат, 2005. – 232 с.
4. Федотов В.К., Скальский С.В., Ковалевский А.А. Антирубцовый крем : патент 2290919 РФ № 2004121762/15; заявл. 15.07.2004; опубл. 2007. Бюл. № 1.
5. Руководство ICN «Валидация аналитических методик». Содержание и методология // Фармация. – 2008. – № 4. – С. 3-10.
Одним из способов лечения рубцов и шрамов является использование различных кремов, мазей и гелей, содержащих вещества антирубцового действия. Верапамил даёт положительный результат при лечении и профилактике образования келоидных и гипертрофированных рубцов [4]. Компоненты геля, содержащего верапамил, имеют близкие максимумы светопоглощения в УФ-области, поэтому непосредственно каждое лекарственное вещество методом УФ-спектрофотометрии идентифицировать и количественно определить не представлялось возможным. В связи с этим нами была разработана методика идентификации и количественного определения верапамила методом тонкослойной хроматографии с денситометрической регистрацией аналитического сигнала.

Цель работы. Разработать методику идентификации и количественного определения верапамила в геле, в 100 г которого содержится 1 г данного вещества.

Материал и методы исследования. В качестве растворителя геля был выбран ацетон. При растворении в ацетоне образуется прозрачный бесцветный раствор. Для хроматографирования использовали пластинки марки «Sorbfil ПТСХ-АФ-В-УФ» для высокоэффективной тонкослойной хроматографии размером 10х15 см. Подвижной фазой служила система растворителей «ацетон - вода очищенная» (8:2) [2]. Хроматографирование проводили в стеклянной камере, насыщенной парами растворителя. Для приготовления стандартного образца (СО) 0,0125 г верапамила (ФС 42-0224-07) (точная навеска) помещали в мерную колбу вместимостью 25,0 мл, растворяли в ацетоне и доводили ацетоном раствор до метки. Концентрация СО верапамила составила 0,5 мкг/мкл.

Приготовление раствора геля: около 1,25 г (точная навеска) геля помещали в мерную колбу вместимостью 25,0 мл, растворяли в ацетоне и доводили ацетоном раствор до метки.

На линию старта хроматографической пластинки длиной 15 см наносили раствор СО с содержанием верапамила 0,5; 0,75; 1,0; 1,25; 1,5; 1,75 мкг в пятне. На этой же пластинке обозначали линии контрольных треков, на которые наносили ацетоновый раствор геля объемом 3,0 мкл. Пробы наносили при помощи микрошприца МШ-10. Пластинки помещали в камеру для хроматографирования объемом 2000 см3, насыщенную парами растворителя. После подъема растворителя на необходимый уровень пластинки вынимали, высушивали в вытяжном шкафу при комнатной температуре до удаления паров растворителя. Длина пробега растворителя около 8 см. Детектирующий реагент - реактив Бушарда. На жёлтом фоне реактива появляются пятна коричневого цвета с Rf 0,58±0,01.

Необходимо учитывать, что пятна очень неустойчивы и после высыхания пластинки обесцвечиваются. Поэтому сразу после проявления в мокром виде пластинки сканировали при помощи планшетного сканера «HP Scanjet 3670» (разрешение 100 dpi) и далее осуществляли ее цифровую обработку с помощью компьютерной программы «Видеоденситометр Sorbfil» (г. Краснодар).

Количественное определение проводили методом абсолютной калибровки (внешнего стандарта), по градуировочному графику зависимости «масса вещества - площадь пика» (линейная аппроксимация). Статистическая обработка результатов проводилась в соответствии с ОФС «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний» [1].

Результаты исследования и их обсуждение

Определение хроматографических характеристик.

Чувствительность детектирующего реагента устанавливали по величине предела обнаружения (ПО), который рассчитывали с учётом стандартного отклонения сигнала и углового коэффициента градуировочного графика. ПО составляет 0,4 мкг. Специфичность определяли по величине Rf пятна контрольного трека, которая должно соответствовать Rf пятен стандартного образца (0,58±0,01). На треках контрольного образца визуально обнаруживалось пятно коричневого цвета с Rf, соответствующей стандартным образцам (рис. 1, 2).

Рис. 1. Хроматограмма СО верапамила.

Рис. 2. Хроматограмма ацетонового раствора геля (2 - верапамил).

Эффективность пластинки около 800 теоретических тарелок.

Валидация методики количественного анализа проведена по следующим критериям: чувствительность количественного определения, линейность, правильность и сходимость результатов [5].

Линейность устанавливали по градуировочным графикам, полученным при компьютерной обработке хроматограмм в координатах площадь пика (S) - масса (m, мкг). Под площадью пика в видеоденситометрии понимается интегральная характеристика, включающая собственно площадь пятна, его объём в пространстве и интенсивность его окраски [3]. По данным градуировочных графиков рассчитывали статистические характеристики и коэффициент корреляции. Методом наименьших квадратов определяли значимость свободного члена линейной зависимости (а), углового коэффициента (b) и чувствительность количественного определения. Расчеты проводили с помощью программы Microsoft Excel. В диапазоне концентраций 0,5-2,0 мкг в пятне наблюдается прямолинейная зависимость. Градуировочный график описывается уравнением S=1,69.104 m, коэффициент корреляции r = 0,995 (рис. 3).

Рис. 3. Градуировочный график верапамила.

Предел количественного определения (quantitation limit), рассчитанный по величине стандартного отклонения сигнала и углового коэффициента градуировочного графика, составляет 1,2 мкг.

Правильность методики определяли методом «введено-найдено». По уравнению градуировочного графика рассчитывали содержание верапамила на 5 уровнях концентраций СО и определяли метрологические характеристики (табл. 1).

Таблица 1

Оценка правильности определения верапамила

Уровень

Взято, мкг

Найдено, мкг

Открываемость, %

Метрологические

характеристики

1

1,0

1,03

103

 

Хср = 101

SD = 1,67

ΔX=3,77

RSD = 5,22%

Е% =3,73%

1

1,0

1,12

112

2

1,5

1.52

101

2

1,5

1,41

94

3

2,0

1,90

95

3

2,0

2,04

102

4

2,5

2,50

100

4

2,5

2,38

98

5

3,0

3,18

106

5

3,0

2,97

99

Сходимость методики оценивали по результатам повторного определения содержания верапамила в геле. Результаты и метрологические характеристики представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты определения верапамила в геле. Оценка сходимости

Содержание верапамила в геле, г/100 г

Метрологические характеристики

0,90

Хср = 0,925

DХ = 0,057

SD = 0,055

RSD% = 5,9%

Е% = 6,2%

 

1,01

0,94

0,85

0,9

0,95

Выводы. В результате проведённых исследований разработана методика идентификации и количественного определения верапамила в геле методом планарной хроматографии на пластинках марки ПТСХ-П-В-УФ. Полученные данные свидетельствуют, что методика специфична, имеет достаточно высокую чувствительность и эффективность. Методика количественного определения отвечает необходимым требованиям по показателям чувствительность, линейность, правильность и сходимость.

Рецензенты:

Коновалов Д.А., д.ф.н., профессор кафедры фармакогнозии Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО «Волг ГМУ», г. Пятигорск;

Компанцева Е.В., д.ф.н., профессор кафедры фармацевтической химии и токсикологии Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО «Волг ГМУ», г. Пятигорск.


Библиографическая ссылка

Мезенова Т.Д., Ушакова Л.С., Леонова В.Н., Жидкова Ю.Ю., Пеньевская Н.А. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЕРАПАМИЛА В ГЕЛЕ МЕТОДОМ ПЛАНАРНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ // Современные проблемы науки и образования. – 2014. – № 5.;
URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=15232 (дата обращения: 15.09.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252