Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Джиоев И.Г. 1 Козаев А.В. 1 Кабоева Б.Н. 1 Батагова Ф.Э. 2, 1 Багаев А.Б. 1

---

1 Северо-Осетинская государственная медицинская академия

2 Институт биомедицинских исследований Владикавказского научного центра РАН

Введение 30 крысам линии Вистар глицерина в дозе 0,8 мл/100 г с последующим проведением опытов на 7-й и 14-й дни характеризуется протеинурией, снижением спонтанного диуреза в результате торможения объемной скорости почечного кровотока и ослабления клубочковой фильтрации. Экспериментальная гипокальциемия, созданная на 20 крысах ежедневным в течение двух недель в/м введением кальцитонина в дозе 6,0 МЕ/кг дважды в сутки, вызывает протеинурию, повышение диуреза из-за ускорения почечного кровотока и клубочковой фильтрации. Одновременно отмечается торможение канальцевой реабсорбции воды вследствие уменьшения осмотического давления в интерстиций слоев ткани почек, обусловленного снижением содержания мочевины и натрия. Двухнедельное введение 20 крысам кальцитонина на фоне токсического поражения почек снимает вызванное введением глицерина торможение диуреза и угнетение скорости клубочковой фильтрации, но усиливает степень протеинурии.

Статья в формате PDF

138 KB

мочевина и натрий интерстиций почек

креатинин

протеинурия

кальцитонин

спонтанный диурез

гипокальциемия

токсическое поражение почек

1. Ахполова В.О. Особенности развития почечных проявлений свинцовой интоксикации у крыс в условиях измененного кальциевого гомеостазиса: Автореф. дис. канд. мед. наук. –Владикавказ, 2011. – 20 с.

2. Гайтон А.К., Холл Дж.Э. Медицинская физиология / Пер. с англ. – М.: Логосфера, 2008. – 1296 с.

3. Джиоев И.Г., Козаев А.В., Кабоева Б.Н., Батагова Ф.Э. Механизмы водовыделительной функции почек при экспериментальной острой почечной недостаточности на фоне гиперкальциемии // Фундаментальные исследования. –2014. – №10, ч. 10. – С. 1924–1928

4. Джиоев И.Г., Фидарова А.М. Некоторые особенности функции и морфологии почек в условиях различных моделей экспериментальной почечной недостаточности // Вестник новых медицинских технологий. – 2008. –Т. XV, № 1. – С. 38–39

5. Камышников В.С. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. – Минск: Интерпрессервис. – 2003. –Т. 2. – 463 с.

6. Макинтайр А., Перретти М., Манчини Л. Применение кальцитонина в качестве комбинированной терапии для лечения воспалительных болезненных состояний. Патент №2007139888/15, 30.03.2006.

7. Малая энциклопедия врача-эндокринолога / Под ред. А.С. Ефимова. – К.: Медкнига, 2007. – 360 с.

8. Фундаментальная и клиническая физиология / Под ред. А.А. Камкина, А.Г. Каменского. – М.: Академия, 2004. – 1073 с.

9. Храйчик Д., Седор С., Ганц М. Секреты нефрологии. – М.: Вином; СПб. – Невский диалект, 2001. – 302 с.

10. Carney J.A. Familial multiple endocrine neoplasia: the first 100 years // Amer. J. Surg. Pathol. – 2005. –Vol. 29, № 2, – P. 254–274.

Целью настоящей работы стало изучение мочеобразовательной функции почек при гипокальциемии, вызванной введением кальцитонина на фоне острой почечной недостаточности.

Материал и методы исследования. Для решения поставленной цели были сформулированы и решались следующие задачи.

1. Создание токсической почечной недостаточности по G. Greven (внутримышечное введение 50,0%-ного глицерина в дозе 0,8 мл/100 г 30 крысам линии Вистар после суточного лишения их пищи и воды). Нашей модификацией этой модели для снижения гибели животных являлось то, что дозу вводили не в одну, а в обе задние лапы [4].
2. Создание на 20 крысах линии Вистар модели гипокальциемии путем подкожного введения кальцитонина, в качестве которого использовали аптечный препарат миакальцик (Novartis Pharma, Швейцария) - синтетический аналог гормона лосося, обладающий более высоким сродством к рецепторам, действующий сильнее и продолжительнее, в дозе 6 МЕ/кг (1 МЕ соответствует 0,2 мкг кальцитонина), который вводили утром и вечером (12 МЕ/сут/кг) в течение 14 дней. Одни авторы [1] вводят миакальцик в дозе 0,6 МЕ/100 г один раз в день, другие [6] в большей дозе - 2,0 мкг/кг, что равно 10 МЕ/кг, а в инструкции по применению кальцитонина лосося указано, что крысам линии Sprague-Dawley и Fisher 344 его вводили в течение года в дозах от 20 до 80МЕ/кг/сут, что вызывало аденому гипофиза.Выбор нами двукратного в течение суток введения миакальцика был обусловлен более длительным поддержанием в крови его гипокальциемического эффекта, который наступает через 30 мин и длится до 1,5 ч (период полувыведения препарата). При однократном введении его способность снижать уровень кальция в крови будет не столь продолжительна, и, возможно, произойдет ослабление эффекта препарата или даже нормализация содержания кальция в крови.
3. Одновременное создание на 20 крысах линии Вистар токсического поражения почек и гипокальциемии.

Контрольную группу составляли 15 крыс линии Вистар, получавших инъекции физиологического раствора в количестве, эквивалентном вводимому миакальцику. На протяжении двух недель опытов все животные имели свободный доступ к пище и воде, которые перед началом экспериментов для предотвращения гидратации и наполнения желудка убирались из клеток за 30-40 мин. В дневное время суток виварий был затемнен, что является естественным для крыс, ведущих ночной образ жизни.

Во всех группах крыс (контрольных, после раздельного введения глицерина и миакальцика и при их совместном введении) эксперименты проводили на 7-й и 14-й дни, когда животных на 6 ч помещали в клетки для сбора мочи, в которой определяли содержание эндогенного креатинина по методу, основанному на реакции Яффе (изменение окраски пикриновой кислоты при взаимодействии с креатинином в щелочной среде) для последующего, после определения уровня креатинина в крови (мкмоль/л), расчета скорости клубочковой фильтрации (мл/час/100 г) и величины канальцевой реабсорбции воды (%). Объемную скорость почечного кровотока (мл/мин) определяли с помощью ультразвукового флуометра Transonic НТ313 (США). О степени протеинурии (мкг/мл) и содержании общего белка в плазме крови (г/л) судили по результатам, полученным методом Лоури и биуретовым методом [5]. Концентрацию кальция в плазме крови (ммоль/л) как доказательство состоявшейся гипокальциемии определяли с помощью эриохрома синего [5]. Содержание натрия в слоях ткани почек определяли методом плазменной фотометрии (ПФА 378, «Юнико-СИС», Россия), а мочевины - наборами Лахема (Чехия). Все биохимические исследования проводили спектрофотометрически (UNICO 800, США). Вывод части животных из эксперимента на 7-й и 14-й дни (по 5 крыс во всех исследуемых группах) происходил с соблюдением Приказа Минздравсоцразвития России № 708н от 23 августа 2010 г. «Об утверждении Правил лабораторной практики» в состоянии обезболивания и сна после внутрибрюшинного введения крысам анестетика общего действия «Золетил» (Франция) в дозе 0,1-0,15 мл/100 г.

Полученные результаты статистически обрабатывались с помощью программы «GraphPad Prizm 5.04», достоверность отличий оценивалась с помощью t-критерия Стьюдента для параметрического метода сравнения средних величин.

Результаты и их обсуждение. С учетом того, что мы ставили перед собой цель выяснения влияния гипокальциемии на водовыделительную функцию почек в условиях токсического поражения, то посчитали необходимым начать описательную часть с содержания кальция в плазме крови в дни опытов. Введение миакальцика вызвало снижение уровня кальция с контрольного уровня в 2,32±0,19 ммоль/л до 2,06±0,13 ммоль/л на 7-й день, а на 14-й день введения - до 1,87±0,15 ммоль/л (р˂0,02). Следовательно, все результаты состояния водовыделительной функции почек при токсическом поражении почек можно однозначно констатировать как происходящие при гипокальциемии.

Ранее нами было показано [3], что введение крысам глицерина вызвало статистически значимое (р˂0,002) снижение спонтанного диуреза в результате уменьшения скорости клубочковой фильтрации на 21,8% (р<0,05) и на 43,5% (р˂0,001) соответственно. Причиной этого было ослабление объемной скорости почечного кровотока с 10,24±0,68 мл/мин (контроль) до 8,08±0,73 мл/мин (р˂0,05) на 7-й день и до 6,94±0,52 мл/мин (р<0,002) на 14-й день после введения нефротоксиканта. При этом к концу 2-й недели уровень креатинина в плазме крови повысился до 84,25±3,23 мкмоль/л (р˂0,01), и одновременно, причем уже на 7-й день, появилась протеинурия, которая на 14-й день была значительно больше контроля (табл. 1).

Созданная введением миакальцика гипокальциемия вызвала повышение спонтанного шестичасового диуреза с контрольного уровня в 0,19±0,01 мл/час/100 г на 42,1% (р˂0,002) на 7-й день, и еще значительней - на 63,1% на 14-й день. Причинами полиурии были как ускорение клубочковой фильтрации, так и снижение канальцевой реабсорбции воды (табл. 1). Однако основным фактором повышения диуреза являлась гломерулярная фильтрация, которая после введения кальцитонина в течение 7 дней превышала контроль на 50,0% (р˂0,002), а после 14 дней - на 64,3% (р˂0,001). Изменение фильтрации было обусловлено соразмерным ускорением объемной скорости почечного кровотока (до 14,86±0,85 мл/мин и 16,25±1,12 мл/мин на 7-й и 14-й дни постановки экспериментов соответственно).

Таблица 1

Показатели функции почек у крыс при токсическом поражении почек при отдельном введении кальцитонина и на фоне токсического поражения почек

* - отсутствие статистически значимых отличий, Р_конт., Р_глиц., Р_гк. - сравнение с данными контроля токсического поражения почек глицерином и полученными при гипокальциемии

Содержание креатинина в плазме крови как после семикратного (75,64±3,08 мкмоль/л), так и двухнедельного (78,36±3,45 мкмоль/л) введения кальцитонина, несмотря на тенденцию к повышению, не имело статистически значимого отличия от контроля (72,64±2,28 мкмоль/л), в то время как уровень белка в моче достоверно (р˂0,001) превышал норму, особенно после двухнедельного введения - почти в 2 раза (табл. 1).

При создании гипокальциемии на фоне токсического поражения почек водовыделительная функция почек отличалась от данных и при глицериновом поражении почек, и при гипокальциемии. В этом варианте на 7-й день постановки экспериментов основные процессы мочеобразования не имели достоверного отличия от контроля, но по сравнению с результатами, полученными после рабдомиолизного поражения почек, диурез и скорость клубочковой фильтрации у крыс были на 50,0% и 51,3% больше (р˂0,001), а по сравнению с гипокальциемическим состоянием - наоборот, на 22,3% и 21,2% меньше (р˂0,01). Канальцевая реабсорбция не менялась (табл. 1). В опытах, поставленных на 14-й день, эта направленность изменений диуреза и клубочковой фильтрации сохранилась, и при этом еще появились статистически значимые отличия от контроля (табл. 1). Что касается содержания креатинина в плазме крови, то оно было больше, чем при отдельном глицериновом поражении почек и при гипокальциемии (85,64±3,85 мкмоль/л на 7-й день и 92,46±3,12 мкмоль/л на 14-й день). Аналогичное отличие наблюдалось и в степени протеинурии (табл. 1).

Так как при расчете канальцевой реабсорбции воды было выявлено ее статистически значимое снижение при гипокальциемии, то мы посчитали необходимым исследовать в слоях ткани почек содержание мочевины и натрия как основных осмотически активных веществ, создающих давление в интерстициальной почечной ткани и способных оказывать влияние на обратное всасывание воды в канальцах. Проведенные исследования показали снижение содержания мочевины во всех слоях ткани почек, а натрия - только в корковом и мозговом веществах (табл. 2).

Таблица 2

Содержание мочевины (мкмоль/г влажного веса) и натрия (мкмоль/г сухого веса) в слоях ткани почек крыс с гипокальциемией

* - отсутствие статистически значимых отличий

При этом уменьшение содержания этих веществ, несмотря на статистически значимые отличия, было не столь значительным - в среднем от 10% (на 7-й день) до 18% (на 14-й день). Поэтому и ослабление канальцевой реабсорбции воды было также не столь значительным (табл. 1).

Таким образом, токсическое глицериновое поражение почек в течение двух недель характеризуется протеинурией, снижением спонтанного диуреза и ослаблением клубочковой фильтрации. Экспериментальная гипокальциемия, созданная ежедневным в течение двух недель введением кальцитонина, также вызывает протеинурию, но повышает диурез вследствие ускорения клубочковой фильтрации и торможения канальцевой реабсорбции воды в результате уменьшения осмотического давления в интерстиций слоев ткани почек. Двухнедельное введение кальцитонина на фоне токсического поражения почек снимает вызванное введением глицерина торможение диуреза и угнетение скорости клубочковой фильтрации, но усиливает степень протеинурии.

Рецензенты:

Брин В.Б., д.м.н., профессор, ГБОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Владикавказ;

Болиева Л.З., д.м.н., профессор, ГБОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Владикавказ.

Библиографическая ссылка