Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Хужахметова Л.К. 1 Сентюрова Л.Г. 1

---

1 ГБОУ ВПО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России

В исследовании представлено изучение динамики свободнорадикальных процессов перекисного окисления липидов (показателей малонового диальдегида) в плазме крови в покое, при иммобилизационном стрессе и при фармакологической коррекции стресса (введение α-токоферола, циклоферона и их комбинации) у половозрелых и старых крыс. Результаты наших исследований отражают уровень свободнорадикальных процессов, интенсивность которых увеличивается при старении и стрессовых воздействиях и нивелируется фармакологическими препаратами – антиоксидантами, иммуномодуляторами. Иммобилизационный стресс старых крыс привел к значительному увеличению количества малонового диальдегида в плазме крови - на 95%, по сравнению с крысами, находящимися в покое, что на 31,7% превышает данный показатель у молодых крыс. Коррегирующая активность препаратов трех групп была отмечена у крыс всех изученных возрастов, но особенно у старых животных. Наиболее выраженный антиоксидантный эффект оказывал комплекс α-токоферол + циклоферон на стрессированных старых крыс.

Статья в формате PDF

119 KB

половозрелые и старые крысы.

стресс

перекисное окисление липидов

свободнорадикальные процессы

циклоферон

α-токоферол

1. Бажанова Е.Д. Участие интерферона-альфа в регуляции апоптоза клеток гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы старых мышей при оксидативном стрессе / Е.Д. Бажанова, Д.Л. Теплый // Морфология. – 2004. – Т. 125, № 1. – С. 23-26.

2. Зозуля Ю.Б. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита при патологии головного мозга / Зозуля Ю.Б., Барабой В.А., Стукова Д.А. – Знание, 2000. – 344 с.

3. Орехович В.Н. Современные методы в биохимии. - М. : Медицина, 1977. – 391 с.

4. Теплый Д.Л. Нейрофизиологические эффекты витамина Е. – Астрахань : ООО «ЛЕОН», 2008. – 310 с.

5. Хужахметова Л.К. Влияние α-токоферол-ацетата, циклоферона и их комбинирования на свободнорадикальные процессы у стрессированных крыс / Хужахметова Л.К., Теплый Д.Л. // Естественные науки. - 2010. - № 4. - С. 141-147.

6. Хужахметова Л.К., Сентюрова Л.Г. Динамика процессов перекисного окисления липидов у крыс при стрессе и после фармакологической коррекции // Современные проблемы науки и образования. – 2015. – № 4. – URL: www.science-education.ru/127-21144.

7. Halliwell В. Free radikals in the Brain // Aging, Neurologikal and Mental Dis-orders. – Berlin, 1992. - Р. 21-40.

8. Wolf R. Vitamin E: the radical protector / R. Wolf, D. Wolf, V. Rucco // Venerol. - 1998. – Vol. 10, № 2. – P. 103-117.

Исходя из вышеизложенного, изучение влияния иммунотропных препаратов, в частности циклоферона, который обуславливает стимуляцию выработки эндогенного интерферона, модулирует уровень программмированной клеточной гибели [1; 6],  в сочетании с антиоксидантом α-токоферол-ацетатом на проявление стрессорных реакций в онтогенезе является весьма актуальным.

Цель.  Целью исследования явилось изучение динамики свободнорадикальных процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме крови: конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида (МДА) при стрессогенном воздействии и при фармакологической коррекции (введение α-токоферол-ацетата, циклоферона) у половозрелых и старых  крыс.

Материалы и методы

В эксперименте было использовано 128 белых беспородных крыс-самцов -  половозрелых (10 мес.) и старых (30 мес.). Животных содержали в стандартных условиях вивария при естественном световом освещении и свободном доступе к воде и пище.

В опыте использованы следующие группы.

1.      Интактные крысы (контроль): 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).

2.      Крысы, получавшие масляный 10%-ный раствор α-токоферол-ацетата per os, в течение двух недель, в дозе 0,5 мг на 100 г массы тела; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).

3.      Крысы, получавшие циклоферон (Полисан СПб) per os, в течение двух недель, в дозе 0,77 мг на 100 г массы тела - 10-месячным и 1,19 мг на 100 г массы тела - 30-месячным; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).

4.      Крысы, получавшие совместно 10%-ный масляный раствор α-токоферол-ацетата (0,5 мг на 100 г) и циклоферон per os (0,77 мг на 100 г массы тела - 10-месячным и 1,19 мг на 100 г массы тела - 30-месячным) в течение двух недель; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).

5.      Крысы, подвергшиеся иммобилизационному стрессу в пластиковых цилиндрах по 1 часу в день в течение двух недель; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).

6.      Стрессированные крысы, получавшие предварительно 10%-ный масляный раствор α-токоферол-ацетата в тех же дозах в течение двух недель; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).

7.      Стрессированные крысы, получавшие предварительно циклоферон в тех же дозах в течение двух недель; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).

8.      Стрессированные крысы, получавшие предварительно раствор α-токоферол-ацетата и циклоферон тех же дозах в течение двух недель;10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).

Выведение животных из эксперимента проводили методом быстрой декапитации через сутки после окончания воздействия.

Определение уровня свободнорадикального окисления липидов  в плазме крови

Для оценки уровня ПОЛ у животных контрольной и опытных групп определяли исходную концентрацию вторичного продукта ПОЛ - МДА в плазме крови тиобарбитуровым методом [3]. При декапитации животных кровь собирали и центрифугировали при 3000 об/мин. в течение 15 минут, выделяли плазму. В дальнейшем определяли уровень конечного продукта ПОЛ - МДА с помощью набора реактивов для определения активных продуктов ТБК в плазме крови фирмы «Агат». Оптическую плотность опытной пробы измеряли против холостой пробы при двух длинах волн: 535 и 570 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, на цифровом спектрофотометре APEL PD-303 UV. Полученные данные рассчитывали по формуле: , где: С - содержание ТБК-активных продуктов в опытной пробе мкмоль/л; D535 - оптическая плотность опытной пробы при 535 нм; D570 - оптическая плотность опытной пробы при 570 нм; 0,156 - коэффициент молярной экстинции комплекса МДА - ТБК в л/мкмоль/см; 16 - коэффициент разведения сыворотки.

Высчитывали среднюю величину содержания ТБК - активных продуктов на одного животного и далее на группу.

Полученные экспериментальные данные обработаны с использованием пакета статистических программ Microsoft Excel. Сравнение средних показателей производили с помощью стандартных методов вариационной статистики. Различия в показателях считались статистически значимыми при уровне р < 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

      Исследование процессов ПОЛ в плазме крови выявило изменения содержания МДА у экспериментальных половозрелых и старых крыс (табл. 1, 2).  

Таблица 1

Показатели конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида (МДА) в плазме крови половозрелых крыс

Примечание. Статистическая значимость с группой «Контроль»: * - p  < 0,05; ** - p < 0,01; *** - p  < 0,001.

 Статистическая значимость с группой «Стресс»: 0-p  <  0,05; 00 -p  <  0,01; 000 -   p < 0,001.

Таблица 2

Показатели конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида (МДА) в плазме крови старых крыс

Примечание. Статистическая значимость с группой «Контроль»: * - p  < 0,05; ** - p < 0,01; *** - p  < 0,001.

 Статистическая значимость с группой «Стресс»: 0-p  <  0,05; 00 -p  <  0,01; 000 -   p < 0,001.

У половозрелых крыс, находящихся в покое, α-токоферол-ацетат снизил показатели МДА на 30,8%, а в сочетании с циклофероном на 38,3%. У старых же крыс фармакологическая коррекция в трех группах снизила МДА в среднем на 26%.

Выраженная активация ПОЛ наблюдалась у крыс, подвергнутых иммобилизационному стрессу: у половозрелых крыс количество МДА увеличилось на 65,1%, а у старых на 95,4%, что свидетельствует о снижении адаптационных процессов у животных данной группы, связанном с накоплением антиоксидантов (табл. 3).

Коррекция фармакологическими препаратами стрессированных животных показала значительное  изменение количества МДА по сравнению с группой «Стресс» (табл. 4).

  Таблица 3

Изменение содержания малонового диальдегида в плазме крови крыс по сравнению с группой «Контроль»

Таблица 4

Изменение содержания малонового диальдегида в плазме крови крыс по сравнению с группой «Стресс» и по сравнению с группой «Контроль»

У 30-мес. крыс выраженный стресс-коррегирующий эффект был отмечен при введении циклоферона, а также при комплексном введении α-токоферол-ацетата с циклофероном - до 58%. У молодых крыс введение  α-токоферол-ацетата оказало ожидаемое антиоксидантное действие и привело к достоверному снижению МДА на 50,5%  по сравнению со стрессированной группой, и  на 18% по сравнению с контролем.  Комбинация препаратов (α-токоферол-ацетата с циклофероном) снизила МДА соответственно на 45,5% и на 10% (табл. 3, 4).

Заключение

 Результаты наших исследований отражают уровень свободнорадикальных процессов, интенсивность которых увеличивается при старении и стрессовых воздействиях и коррегируется фармакологическими препаратами - антиоксидантами, иммуномодуляторами. Иммобилизационный стресс старых крыс привел к значительному увеличению количества МДА в плазме крови - на 95%, по сравнению с крысами, находящимися в покое, что на 31,7% превышает данный показатель у молодых крыс. Нивелирующая активность препаратов трех групп  была отмечена у крыс всех изученных возрастов, но особенно выражена у старых животных.

Таким образом, сравнение показателей перекисного окисления липидов позволяет рекомендовать для коррекции отрицательного влияния стресса применять комбинацию иммуномодулятора и антиоксиданта. 

Зурнаджан С.А., д.м.н.,  профессор, заведующий кафедрой оперативной хирургии и топографической анатомии ГБОУ ВПО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Астрахань;

Горст В.Р., д.б.н., профессор кафедры нормальной физиологии ГБОУ ВПО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Астрахань.

Библиографическая ссылка