Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Мартемьянов В.Ф. 1 Мозговая Е.Э. 1 Бедина С.А. 1 Григорьянц С.Р. 2 Королик О.Д. 2

---

1 ФГБНУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии»

2 ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

В лизатах эритроцитов 56 больных анкилозирующим спондилитом (АС) проведены исследования активности аденозиндезаминазы (АДА), АМФ-дезаминазы (АМФДА), адениндезаминазы (АД), гуаниндезаминазы (ГДА), гуанозиндезамназы (ГЗДА), пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) и гуанозинфосфорилазы (ГФ). По сравнению со здоровыми у больных АС в эритроцитахвыше активность АДА, АМФДА, ГДА, ПНФ, ГФ, ниже активность ГЗДА. Установлено, что чем больше степень активности патологического процесса, тем у больных АС выше активность АМФДА, ГДА и ГФ, ниже активность ГЗДА, АД. Между всеми степенями активности процесса, стадиями поражения, степенями ФНС, вариантами течения заболевания в лизатах эритроцитов выявлены статистически значимые энзимные различия. Определение активности АДА, АМФДА, АД, ГДА, ПНФ, ГЗДА и ГФ в лизатах эритроцитов способствует повышению качества диагностики АС.

Статья в формате PDF

152 KB

анкилозирующий спондилит

аденозиндезаминаза

АМФ-дезаминаза

адениндезаминаза

гуаниндезаминаза

гуанозиндезамназа

гуанозинфосфорилаза пуриннуклеозидфосфорилаза

пуриновый метаболизм

1. Бадокин В.В. Симптом-модифицирующая терапия идиопатического анкилозирующего спондилоартрита // Русский мед. журн. – 2004. – № 6. – С. 12-15.

2. Девятаева Н.М. Клинико-диагностическое значение исследования активности 5´-нуклеотидазы, АМФ-дезаминазы, адениндезаминазы, аденозиндезамины в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных системной красной волчанкой: дис. … канд. мед. наук. – Волгоград, 2005. – 226 с.

3. Евдокимова Е.В., Зборовский А.Б., Мозговая Е.Э., Стажаров М.Ю., Бедина С.А., Мартемьянов В.Ф. Активность энзимов пуринового метаболизма в плазме крови больных серонегативными спондилоартритами // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 6. – С. 626. URL: http://www.science-education.ru/113-11274.

4. Зборовский А.Б., Мозговая Е.Э., Мартемьянов В.Ф., Слюсарь О.П., Стажаров М.Ю., Бедина С.А. Клинико-диагностическое значение исследования активности ферментов гуаниловой ветви пуринового метаболизма у больных анкилозирующим спондилоартритом // Терапевтический архив. – 2010. – Т. 82. – № 4. – С. 48-52.

5. Кукушкина Е.В. Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимовгуаниловой ветви пуринового метаболизма в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом: дис. ... канд. мед. наук. – Волгоград, 2010. – 236 с.

6. Насонова В.А., Астапенко М.Г. Клиническая ревматология: Руководство для врачей. – М.: Медицина, 1989. – 592 с.

7. Calin A., Garrett S., Whitelock H. et al. A new approach to defining functional ability in ankylosing spondylitis: the development of the Bath Ankylosing Spondylitis Functional Index // J. Rheumatol. – 1994. – Vol. 21. – P. 2281-2285.

8. Garret S., Jenkinson T., Kennedy L.G. et al. A new approach to defining disease status in Ankylosing Spondylitis: the Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index // J. Rheumatol. – 1994. – Vol. 21. – P. 2286-2291.

9. Mac Kay K., Mack C., Brophy S., Calin A. The Bath Ankylosing Spondylitis Radiology Index (BASRI): A new validated approach to Disease Assessment // Arthritis Rheum. – 1998. – Vol. 41. – № 12. – P. 2263-2270.

10. Van der Linden S., Valkenburg H.A., Cats A. Evoluation of diagnostic criteria for ankylosing spondylitis. A proposal for modification of the New York criteria // Arthritis Rheum. – 1984. – Vol. 27. – P. 361-368.

Цель исследования

Выявить особенности активности АДА, АМФДА, АД, ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в эритроцитах больных АС в зависимости от клинических проявлений заболевания для повышения качества диагностики АС.

Материал и методы

Под наблюдением в условиях стационара находились 56 больных АС, из которых 50 (80,3 %) мужчин и 6 (10,7 %) женщин. Средний возраст больных (М±m) - 36,9±1,3 лет, длительность болезни - 6,55±0,41 лет. Диагноз АС устанавливался на основании всестороннего клинико-инструментального обследования с учетом модифицированных Нью-Йоркских диагностических критериев [10]. В соответствии с отечественной классификацией и рекомендациями Европейской лиги ревматологов и индекса БАСДАЙ [8]. I степень активности процесса определялась у 16 (28,6 %) больных, II степень - у 30 (53,6 %) и III степень - у 10 (17,9 %) больных. На основании рентгенологических данных и индекса БАСРИ [9] I стадия поражения суставов установлена у 6 (10,7 %), II стадия - у 24 (42,9 %), III стадия - у 20 (35,7 %) и IV стадия - 6 (10,7 %) больных. Для оценки функциональных возможностей суставов и позвоночника использовался индекс БАСФИ [7]. Функциональная недостаточность суставов (ФНС) 0 установлена у 4 (7,1 %) больных, ФНС-1 - у 15 (26,8 %), ФНС-2 - у 31 (55,4 %) и ФНС-3 - у 6 (10,7 %) больных. Быстропрогрессирующее течение (БПТ) заболевания определялось у 15 (26,8 %) медленнопрогессирующее течение (МПТ) - у 41 (73,2 %) больного. Клинические проявления энтезопатий выявлены у 31 (55,4 %) больного, поражения сердечно-сосудистой системы - у 16 (28,6 %), патология легких - у 12 (21,4 %), почек - у 11 (19,6 %), глаз - у 16 (28,6 %) больных. Комплексная терапия больных АС включала нестероидные противовоспалительные препараты, инфликсимаб, сульфасалазин, локальную терапию глюкокортикоидами, дыхательную гимнастику, лечебную физкультуру. Дозы и виды лечебных препаратов зависели от тяжести заболевания.

Эритроциты выделяли из венозной крови (с 3,8 % раствором цитрата натрия) с последующим центрифугированием (3000 об/мин) в течение 15 минут. Лизаты эритроцитов готовили путем трехкратного замораживания-оттаивания после подсчета эритроцитов в 1 мл. Активность АДА, АМФДА, АД, ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах эритроцитов определяли по оригинальным методикам, описанным в работах Девятаевой Н.М. [2] и Кукушкиной  Е.В. [5]. Активность ферментов выражали в нмоль/мин/мл., содержащим 1×10⁹ клеток (до лизиса). Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием программы «СТАТИСТИКА 6.0».

Результаты исследований и их обсуждение

Активность изученных ферментов в лизатах эритроцитов 35 здоровых людей не имела статистически значимых различий по полу и возрасту, и эти факторы не учитывались при анализе энзимной активности у больных АС.

При поступлении на лечение по сравнению со здоровыми в лизатах эритроцитов (табл. 1) выше активность АДА, АМФДА, ГДА, ПНФ, ГФ (все р˂0,001), ниже активность ГЗДА (р˂0,01) и незначительно ниже активность АД (р˃0,05).

Если же учитывать не стреднестатистические величины активности ферментов, а индивидуальные энзимные показатели, то за пределы условной нормы, рассчитанной по формуле М±2σ выходили: активность АДА - у 34 (60,7 %) больных, АМФДА - у 56 (100 %), АД - у 10 (17,9 %), ГДА - у 52 (92,9 %), ГЗДА - у 11 (19,6 %), ПНФ - у 37 (66,1 %) и ГФ - у 56 (100 %) больных. У этих же больных за границы нормы выходили показатели СОЭ у 40 (71,4 %), СРБ - у 35 (62,5 %), сиаловые кислоты - у 31 (55,4 %), альфа-2-глобулины - у 24 (42,9 %), гамма-глобулины - у 22 (39,3 %) больных. Через 7-8 дней лечения в эритроцитах снизилась активность АМФДА, ГДА, ГФ (все р˂0,001), ПНФ (р˂0,05), незначительно снизилась активность АДА, повысилась АД и не было различий по активности ГЗДА (все р˃0,05).

Таблица 1

Активность ферментов в лизатах эритроцитов здоровых и больных АС

По окончании курса стационарного лечения по сравнению с начальным этапом клиническое состояние больных улучшилось, наблюдалась существенная положительная динамика клинических и параклинических показателей. Уменьшились индексы БАСДАЙ и БАСФИ (р˂0,001), симптомы Отто (р˂0,001), Шобера (р˂0,001), Форестье  (р˂0,05), Томайера (р=0,063).

В эритроцитах снизилась активность АДА, АМФДА, ГДА, ПНФ, ГФ, повысилась ранее сниженная активность ГЗДА (все р˂0,001), и незначительно повысилась активность АД (р=0,1152).

Если же сравнивать энзимные показатели перед выпиской из стационара с аналогичными показателями здоровых лиц, то оказалось, что не имели отличий от здоровых лиц показатели активности АД и ГЗДА (р˃0,05), но остались повышенными активности АМФДА, ГДА, ПНФ, ГФ (все р˂0,001) и АД (р˂0,05).

Как показали наши предыдущие исследования, на энзимные показатели крови имеют определенное влияние различные клинические проявления болезни. Учитывая это, были проведены исследования активности энзимов в зависимости от клинических особенностей заболевания.

Так, у больных с БПТ по сравнению с больными с МПТ (табл. 1) в эритроцитах выше активность АМФДА, ГДА, ГФ (все р<0,001), АД (р=0,042), ниже активность ГЗДА (р=0,007), незначительно ниже активность АДА (р=0,0932) и ПНФ (р=0,224).

У больных АС с I стадией (табл. 1) по сравнению с больными с II стадией, в эритроцитах ниже активность АМФДА (р=0,005), ГДА (р=0,004), ГФ (р=0,0331), незначительно ниже активность ПНФ (р=0,1312), АД (р=0,142) и незначительно выше активность АДА (р=0,1244) и ГЗДА (р=0,056); по сравнению с III стадией выше активность ГЗДА (р=0,0007), ниже АМФДА (р=0,0002), ГФ (р=0,0004), ГДА (р<0,0001), незначительно ниже активность ПНФ (р=0,0722) и выше АДА (р=0,0683); по сравнению с IV стадией выше активность ГЗДА (р=0,0003), ниже активность АМФДА (р<0,0001), ГДА (р=0,0002), ГФ (р=0,0002), незначительно ниже активность АД (р=0,0542) и выше АДА (р=0,0523) и ПНФ (р=0,211).

У больных с II стадией (табл. 1) по сравнению с больными с III стадией выше активность ГЗДА (р=0,0492), ниже АМФДА (р=0,0004), ГДА (р=0,0002), ГФ (р=0,0002), незначительно ниже активность ПНФ (р=0,1352), АД (р=0,1334), выше АДА (р=0,8173); по сравнению с IV стадией выше активность ГЗДА (р=0,0004), ниже активность АМФДА (р=0,0002), АД (р=0,0081), ГДА (р=0,0004), ГФ (р=0,0003), незначительно выше активность АДА (р=0,0642) и ПНФ (р=0,0821).

У больных АС с III стадией (табл. 1) по сравнению с больными с IV стадией выше активность ГЗДА (р=0,0322), ниже активность АМФДА (р=0,0006), ГДА (р=0,0007), ГФ (р=0,0006), незначительно ниже активность АД (р=0,0523), выше АДА (р=0,0931) и ПНФ (р=0,0882).

Сравнительные исследования также показали, что у больных АС с ФНС-0 (табл. 1) по сравнению с больными с ФНС-1 в эритроцитах ниже активность ПНФ (р=0,0487), ГДА (р=0,0087), АМФДА (р=0,0413), незначительно выше активность АДА (р=0,1314), ГФ (р=0,0412), ГЗДА (р=0,1132) и ниже АД (р=0,3217); по сравнению с больными с ФНС-2 выше активность АДА (р=0,0086), ниже активность ГФ (р<0,0001), АМФДА (р=0,0005), ГДА (р=0,0002), незначительно ниже активность АД (р=0,0936), ПНФ (р=0,2436) и выше ГЗДА (р=0,0561); по сравнению с больными с ФНС-3 выше активность АДА (р=0,0008), ГЗДА (р=0,0006), ниже активность ГФ (р=0,005), АМФДА (р=0,0001), ГДА (р=0,0002), незначительно выше активность ПНФ (р=0,3574) и ниже АД (р=0,0542).

У больных АС с ФНС-1 (табл. 1) по сравнению с больными ФНС-2 выше активность АДА (р=0,0073), ГЗДА (р=0,0082), ниже активность АМФДА (р=0,0004), АД (р=0,0482), ГДА (р=0,0003), ГФ (р=0,0002), незначительно ниже активность ПНФ (р=0,8753); по сравнению с больными с ФНС-3 выше активность АДА (р=0,0462), ГЗДА (р=0,0007), ПНФ (р=0,047), ниже АД (р=0,0008), АМФДА (р<0,0001), ГДА (р=0,0005) и ГФ (р=0,0003).

У больных с ФНС-2 по сравнению с больными с ФНС-3 (табл. 1) выше активность ПНФ (р=0,0424), ниже активность АМФДА (р=0,0006), ГФ (р=0,0003), АД (р=0,0034), ГДА (р=0,0008), незначительно выше активность АДА (р=0,0831) и ГЗДА (р=0,0926).

То есть проведенные исследования выявили достаточно много энзимных различий в эритроцитах больных АС между различными вариантами течения болезни, стадиями поражения и ФНС, но при этом не учитывалась степень активности патологического процесса, которая может оказать существенное влияние на активность ферментов, что и показано нами ниже.

По сравнению со здоровыми у больных АС с I степенью (табл. 1) в эритроцитах выше активность АДА (р<0,001), АМФДА (р=0,0003), ГДА (р=0,0004), ГЗДА (р=0,0007), ПНФ (р=0,0004), ГФ (р=0,0002), ниже активность АД (р=0,0006); у больных АС с II степенью выше активность АДА, АМФДА, ГДА, ПНФ, ГФ, ниже АД и ГЗДА (все р<0,0001); у больных АС с III степенью выше активность АМФДА, АД, ГДА, ГФ (все р<0,0001), ниже активность АДА (р=0,0007), ГЗДА (р<0,0001) и ПНФ (р=0,0384).

Необходимо отметить, что диагностика обострения заболевания, протекающая с II-III степенью активности процесса, не представляет трудностей в клинической практике. Но разграничить фазы клинической ремиссии и минимального обострения заболевания иногда бывает сложно из-за минимума клинических проявлений и малой информативности общепринятых острофазовых показателей. Наши исследования показали, что если при I степени активности процесса за пределы нормы показатели СОЭ выходили в 37,5 % случаев, альфа-2-глобулины - в 18,8 %, СРБ - в 37,5 % и сиаловые кислоты - в 25 % случаев, то показатели активности АДА, АМФДА, ГФ - в 100 % случаев, ГДА - в 75 %, ПНФ - в 56,3 % и АД - в 6,25 % случаев. Это свидетельствует о значительно большей чувствительности некоторых энзимных показателей в отображении минимальных проявлений активации патологического процесса при АС.

Сравнительные исследования показали, что у больных АС с I степенью по сравнению с больными с II степенью в эритроцитах выше активность АДА (р<0,0001), ГЗДА (р<0,0001), ниже активность АМФДА (р=0,0005), АД (р=0,0003), ГДА (р=0,0003), ПНФ (р=0,0005), ГФ (р<0,0001); по сравнению с больными с III степенью выше активность АМФДА и АД (р<0,0001), ГДА (р=0,0002) и ГФ (р<0,0001). У больных АС с II степенью по сравнению с больными с III степенью вышеактивность АДА, ГЗДА, ПНФ (все р<0,0001), ниже активность АД и ГФ (р<0,0001), АМФДА (р=0,0005) и ГДА (р=0,0006).

Таким образом, результаты проведенных исследований позволили выявить некоторые закономерности изменений активности ферментов в зависимости от клинических особенностей заболевания. Так, чем острее было течение заболевания, тем в эритроцитах выше активность АД, АМФДА, ГДА, ГФ и ниже активность АДА, ГЗДА и ПНФ. Чем больше степень ФНС, тем выше активность АМФДА, ГДА, ГФ, ниже активность ГЗДА, АДА, а активность ПНФ, повышенная при ФНС-0, ФНС-1 и ФНС-2, снижается при ФНС-3. Активность АД снижается от ФНС-0 до ФНС-2 и значительно повышается при ФНС-3. Чем больше стадия поражения суставов, тем выше активность АМФДА, АД, ГДА, ГФ, ниже активность АДА, ГЗДА, а активность ПНФ, повышенная при I-III стадиях, значительно снижается при IV стадии. Чем выше степень активности процесса, тем ниже активность ГЗДА, АДА, выше активность АМФДА, ГДА, ГФ, а активность АД, сниженная при I-II степени, повышается при III степени, и, наоборот, повышенная активность при I-II степени значительно снижается при III степени.

Наибольшие энзимные различия в эритроцитах выявлены между стадиями поражения суставов, и возникает естественный вопрос - не может ли стадия затруднить определение степени активности процесса. С этой целью были проведены сравнительные исследования активности ферментов у больных АС с I степенью и III стадией и больных с II степенью и II стадией. Были выявлены те же энзимные различия, как и между больными с I и II степенями активности процесса без учета стадий поражения суставов, что свидетельствует о значительно большем влиянии активности процесса на энзимную активность, чем стадия поражения суставов.

Выводы

1. Активность АДА, АМФДА, АД, ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах эритроцитов больных АС значительно зависит от клинических проявлений болезни.
2. Наибольшее влияние на активность изученных ферментов оказывали степень активность патологического процесса: чем выше степень, тем в лизатах эритроцитов ниже активность ГЗДА, АД, выше активность АМФДА, ГДА и ГФ.
3. Между всеми степенями активности процесса, стадиями поражения, степенями ФНС, вариантами течения заболевания в лизатах эритроцитов выявлены статистически значимые энзимные различия, способствующие повышению качества диагностики АС.
4. Исследования активности ферментов в процессе лечения способствуют объективизации оценки эффективности проводимой терапии больных АС.
5. Наиболее четко отражают минимальные проявления обострения патологического процесса у больных АС изменения активности АДА, АМФДА и ГФ в лизатах эритроцитов, что способствует дифференциации фаз обострения и клинической ремиссии.

Рецензенты:

Заводовский Б.В., д.м.н., профессор, зав. лабораторией методов лечения и профилактики заболеваний суставов ФГБУ «НИИ КиЭР»  РАМН, г. Волгоград;

Александров А.В., д.м.н., зав. лабораторией функциональных методов исследования, ультразвуковой диагностики и восстановительной терапии ФГБУ «НИИ КиЭР»  РАМН, г. Волгоград.

Библиографическая ссылка