Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ ТИМАЛИНА И СУСПЕНЗИИ КРАСНОГО КОСТНОГО МОЗГА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ У МЫШЕЙ

Кульбеков Е.Ф. 1 Кульбекова Ю.Е. 1 Данилов Р.С. 1
1 ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Минздравсоцразвития России»
На модели токсического поражения печени мышей тетрахлорметаном (ТХМ) исследована гепатопротекторная активность тималина, суспензии красного костного мозга (ККМ) мышей, и комплекса тималин + ККМ. Гепатопротекторное действие оценивали по трем показателям: проценту выживаемости животных, содержанию общей воды и количеству сохраненных ядер гепатоцитов на гистологических препаратах печени мышей. При изучении выживаемости животных разделили на 2 группы: контрольная группа - мыши, отравленные тетрахлорметаном и опытная группа - мыши, отравленные тетрахлорметаном и получавшие комплекс «тималин+ККМ». При этом выявлено, что двукратное введение ТХМ в дозе 3,2 мл/кг 50% масляного раствора приводило к 100% гибели животных контрольной группы на четвертый день эксперимента. Выживаемость животных опытной группы на этот день составляла 100 %, но после третьего введения тетрахлорметана выживаемость животных опытной группы снизилась до 80%. В отдельной серии экспериментов в печени мышей с менее тяжелым экспериментальным токсическим гепатитом (ТХМ) изучали гистологические изменения и содержание общей воды (воспалительного экссудата). У мышей трех опытных групп, получавших, тималин, ККМ и комбинацию «тималин+ККМ» обнаружено пропорциональное снижение тяжести гистологической картины воспаления и количества общей воды в печени в сравнении с контрольной группой. Таким образом, показано наличие гепатопротекторной активности, как у тималина и ККМ отдельно, так и у комбинации «тималин+ККМ».
гистологическая картина
выживаемость
суспензия красного костного мозга
тималин
гепатопротекторная активность
: экспериментальный токсический гепатит у мышей
1. Гистология: Учебник. 2-е изд. Перераб. и доп. / Под. ред. Э. Г. Улумбекова, Ю. А. Челышева. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. - С. 395.
2. Гончарова, Ю. Е. Гепатопротекторное действие тималина и суспензии красного костного мозга, при экспериментальном токсическом гепатите / Ю.Е. Гончарова, Р. С. Данилов, Е. Ф. Кульбеков // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2008. - Вып. 63. - С. 398-399.
3. Дугин, С. Ф. Исследование роли нейро-гуморальных систем в патогенезе экспериментальной хронической сердечной недостаточности / С. Ф. Дугин [и др.] // Информационный бюллетень РФФИ. - 1994. - Т.2. - №4. - С.292.
4. Кульбеков, Е. Ф. Метод оценки гепатопротекторной активности тималина и суспензии красного костного мозга при остром токсическом поражении печени / Е. Ф. Кульбеков, Ю. Е. Кульбекова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2009. - Вып. 64. - С. 461-463.
5. Цибулевский, А. Ю. Метод контроля токсических поражений печени, основанный на изменении содержания общей воды и магнитно-релаксационных характеристик / А. Ю. Цибулевский, А. И. Сергеев, Т. К. Дубовая // Бюлл. эксперимент. биол. и мед. - 1995. - № 12. - С. 584-585.
6. http -support-doctor narod ru. - Liver9.htm. Режим доступа: http://support-doctor narod.ru./Liver9.htm. Современные подходы к лечению диффузных заболеваний печени.
 

Введение

Поиск новых эффективных гепатопротекторов для лечения и профилактики заболеваний печени является актуальным направлением современной медицины. Существуют исследования, показывающие возможность цитопротекторного действия тималина и стволовых клеток [2, 6].

Интегрирующим критерием наличия гепатопротекторного действия вещества или препарата является процент выживаемости животных после отравления высокими дозами тетрахлорметана.

Важным и доступным методом оценки тяжести гепатита является исследование содержания общей воды в печени. Оценка этого критерия не исключает выявление действия исследуемых веществ на процессы воспаления через нейрогуморальную регуляцию [3, 5].

Гистологическое изучение образцов органов и тканей позволяет оценить произошедшие под влиянием токсического агента морфологические изменения, определить их характер, локализацию и степень повреждения органа, предположить и выявить механизм гепатотропного эффекта [1].

Рабочей гипотезой исследования является предположение о наличии у комплекса тималин + суспензия красного костного мозга (ККМ) гепатопротекторного действия.

Целью исследования было изучение гепатотропного действия тималина и его комбинации с ККМ при тетрахлорметановом поражении печени мышей. Этот эффект должен был быть выявлен по трем критериям: проценту выживаемости мышей, содержанию общей воды в печени мышей и количеству сохраненных ядер гепатоцитов на гистологическом срезе печени мышей.

Материалы и методы исследования

Опыты проводили на белых мышах массой 25-30 г., содержавшихся в стандартных условиях вивария со свободным доступом к пище и воде.

В первой серии опытов при изучении выживаемости животных их разделили на 2 группы:

1 - контрольная группа - отравленные тетрахлорметаном мыши;

2 - опытная группа - отравленные тетрахлорметаном мыши и получавшие комплекс «тималин + суспензия ККМ».

Количество животных в каждой группе - 10.

Суспензию ККМ получали от мышей-доноров путем промывания полостей двух большеберцовых и двух бедренных костей одним 1 мл 5 % раствора натрия цитрата. Приготовленную суспензию ККМ вводили внутрибрюшинно в дозе - 0,5 мл на одно животное-реципиент.

Тетрахлорметан 50 % масляный раствор вводили в желудок через зонд в количестве 3,2 мл/кг.

Физиологический раствор вводили в количестве 0,05 мл на мышь внутримышечно.

Тималин вводили в дозе 0,05 мг на мышь внутримышечно.

Наблюдения за выживаемостью продолжали в течение двух недель от начала эксперимента.

План эксперимента представлен в таблице 1.

Таблица 1. План введения ТХМ и препаратов в первой серии опытов

 

группы животных

день

опыта

контроль

опыт

1

физ. р-р

тималин

2

физ. р-р

тималин + ККМ

3

физ. р-р + ТХМ

тималин + ТХМ

4

физ. р-р + ТХМ*

тималин + ТХМ

5

физ. р-р + ТХМ*

тималин + ТХМ

* план не выполнен - все животные контрольной группы на 4 день погибли.

Во второй отдельной серии экспериментов изучали уменьшение процента содержания воды (воспалительного экссудата) [3, 5] и гистологические изменения в печени животных.

В этой серии животных - разделили на 5 групп:

1 - интактная группа;

2 - контрольная группа - тетрахлорметановый гепатит;

3 - опытная группа «A» - тималин;

4 - опытная группа «Б» суспензия ККМ;

5 - опытная группа «В» тималин + суспензия ККМ.

Количество животных в каждой группе - 10.

В этой серии опытов 50 % масляный раствор тетрахлорметана вводили в желудок через зонд в количестве 2,7 мл/кг (меньше чем в опытах на выживаемость).

Тималин вводили в дозе 0,05 мг на мышь внутримышечно, как и в первой серии опытов.

Суспензию ККМ как и в первой серии опытов на выживаемость, но приготовленную суспензию ККМ вводили внутрибрюшинно в дозе - 0,1 мл на одно животное-реципиент.

Для определения общей воды как критерия интенсивности воспаления брали нативные образцы печени у животных, забитых на пятый день опыта. На аналитических весах взвешивали печень мышей до и после высушивания, которое проводили в течение пяти суток при температуре 60 oC.

Гистологическим критерием оценки качества пораженной печени служило число сохранившихся ядер гепатоцитов. Для их подсчета использовали цифровой снимок среза печени при увеличении в 800 раз. Число ядер подсчитывали на 10 снимках с экрана монитора с помощью сетки для изображения в приложениях программы Office 2007.

Для определения гистологических изменений образцы печени фиксировали в формалине, а затем готовили срезы и окрашивали раствором Гимза.

После стандартной статистической обработки (среднее арифметическое, ошибка репрезентативности) определяли достоверность различий между контрольными и опытными группами по критерию Стьюдента [4].

План эксперимента представлен в таблице 2.

Таблица 2. План введения препаратов во второй серии опытов

 

группы животных

день опыта

интактные

контроль

ТХМ

опытная «А»

опытная «Б»

опытная «В»

1

физ. р-р

физ. р-р

тималин

физ. р-р

тималин

2

физ. р-р

физ. р-р

тималин

физ. р-р + ККМ

тималин + ККМ

3

физ. р-р

физ. р-р + ТХМ

тималин + ТХМ

физ. р-р + ТХМ

тималин + ТХМ

4

физ. р-р

физ. р-р + ТХМ

тималин +

ТХМ

физ. р-р + ТХМ

тималин + ТХМ

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты исследования выживаемости мышей представлены в таблице 3.

Таблица 3. Выживаемость животных в 1-й серии опытов

 

процент выживших животных

день опыта

контроль

опыт

1

100

100

2

100

100

3

30

100

4

0

100

5

0

80

15

0

80

Из таблицы 3 видно, что двукратное введение ТХМ в дозе 3,2 мл/кг 50 % масляного раствора приводило к 100 % гибели животных контрольной группы на четвертый день эксперимента.

Выживаемость животных опытной группы на этот день составляла 100 %. После третьего введения тетрахлорметана выживаемость в опытной группе снизилась до 80 %.

Результаты исследования содержания общей воды в печени мышей представлены в таблице 4.

Таблица 4. Процент уменьшения содержания воды в печени мышей во 2-й серии опытов

группы животных

интактные

контроль ТХМ

опытная «А»

опытная «Б»

опытная «В»

М

m

M

m

M

m

M

m

M

m

1,07

0,09

1,55

0,08

1,38

0,02

1,16

0,08

1.16

0,07

t=4,07

-

t=2,13

t=3,31

t=3,75

М - среднее арифметическое, m - ошибка среднеквадратичного отклонения, t - критическое значение коэффициента Стьюдента (при n=10 составляет 2,2).

Из таблицы 4 видно, что введение ТХМ приводило к достоверному увеличению процента содержания воды (воспалительного экссудата) в печени в сравнении с интактной группой мышей.

Во всех трёх опытных группах наблюдали уменьшение процента содержания воды (воспалительного экссудата) в печени в сравнении с контрольной группой животных, получавших только тетрахлорметан.

Результаты исследования гистологических изменений в печени мышей представлены в таблице 5 и на рисунках 1-2.

Таблица 5.  Количество ядер гепатоцитов на микропрепаратах (х800) печени мышей с экспериментальным поражением печени

группы животных

интактные

контроль

ТХМ

опытная «А»

тималин

опытная «Б»

ККМ

опытная «В»

ККМ+тималин

М

m

M

m

M

m

M

m

М

m

30,1

1,29

13,4

0,5

20,6

1,1

36,0

2,2

31,8

2,5

t=11.9

-

t=6,0

t=9,6

t=7,2

М - среднее арифметическое, m - ошибка среднеквадратичного отклонения, t - критическое значение коэффициента Стьюдента (при n=10 составляет 2,2).

Из таблицы 5 видно, что введение ТХМ приводило к достоверному снижению количества ядер в контрольной группе по сравнению с интактной.

В опытной группе «В» - комплекс ККМ+тималин, наблюдалось достоверно большее число ядер по сравнению с группой контроля ТХМ. При этом гепатопротекторный эффект комплекса сопоставим с аналогичным эффектом опытных групп «А» - тималин и «Б» -суспензия ККМ.

                         х90                                                                   х800

     

Рисунок 1. Гистологические препараты печени мышей контрольной группы (ТХМ)

                         х90                                                               х800

  

Рисунок 2. Гистологические препараты печени мышей опытной группы «В» (ТХМ +ККМ + тималин)

Из рисунков 1 и 2 видно, что микроструктура печени мышей контрольной группы отравленных ТХМ хуже, чем у мышей опытной группы, получавших при отравлении комплекс «ККМ+тималин». Большее количество ядер гепатоцитов в опытной группе.

Выводы

  1. Комбинация ККМ + тималин повышает выживаемость мышей на 80-100 % при остром токсическом поражении печени.
  2. Суспензия ККМ мышей и комбинация ККМ + тималин достоверно снижают содержание воды в печени.
  3. В опытных группах «А», «Б», «В» на гистологических срезах наблюдалось достоверное увеличение числа ядер по сравнению с контролем.

Заключение

Комплекс «тималин + суспензия ККМ» обладает гепатопротекторной активностью при токсическом поражении печени мышей тетрахлорметаном и является перспективным объектом дальнейшего фармакологического изучения.

Рецензенты:

  • Ивашев Михаил Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой клинической фармакологии «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, г. Пятигорск.
  • Погорелый Василий Ефимович, доктор биологических наук, профессор кафедры фармакологии и патологии «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, г. Пятигорск.

Библиографическая ссылка

Кульбеков Е.Ф., Кульбекова Ю.Е., Данилов Р.С. ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ ТИМАЛИНА И СУСПЕНЗИИ КРАСНОГО КОСТНОГО МОЗГА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ У МЫШЕЙ // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 3.;
URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=6388 (дата обращения: 19.09.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074