Введение. Заболеваемость амилоидозом составляет 8 случаев на миллион населения в год (Comenzo R.L., 2007). Чаще всего поражаются сердце и почки, однако у многих пациентов выявляются нарушения функций двух и более органов, так как в большинстве своем амилоидоз носит системный характер поражения органов мишеней, и без лечения большинство пациентов погибают в течение года.

Известны несколько способов лечения этой патологии, таких как метод аутологичной трансплантации, применяемый в гематологии, использование которого в свою очередь ограничено плохим соматическим статусом большинства пациентов, и даже при соблюдении правил отбора больных для проведения вышепредложенного метода, смертность достигает 20% (Sanchorawala et.al., 2004). Использование таких препаратов, как талидомид, леналидомид и бортезолиб, в лечении амилоидоза не привело к значительному улучшению результатов терапии (Dispenzieri et. al., 2003, 2007; Sanchorawala et. al., 2007; Wechalekar et al., 2008). Это объясняется в первую очередь их высокой токсичностью, а снижение дозы вело к снижению эффективности. Известны также исследования с применением мелаксена [2; 3], минеральной воды и янтарной кислоты [1; 4].

Таким образом, несмотря на многообразие применяемых препаратов и методов, используемых для лечения амилоидоза, разработка наиболее эффективных и экономически выгодных методов лечения все еще остается одной из актуальнейших задач в медицине.

Цель исследования

Изучение влияния одномоментного введения смеси милдроната и ацизола на морфо-функциональные показатели почек у сирийских золотистых хомяков с моделью экспериментальной амилоидной нефропатии.

Материалы и методы исследования

Работа проводилась на золотистых сирийских хомяках массой 100-120 г. Для опыта были выбраны половозрелые самцы c экспериментальным амилоидозом.

Сравнительный анализ исследованных показателей был проведен в 2 группах животных:

• животные с экспериментальной амилоидной нефропатией,
• животные с моделью экспериментальной амилоидной нефропатии, подвергнутые введению ацизола внутрижелудочно в дозе 30 мг/кг вместе с введением милдроната подкожно из расчета 10%-5 мг/кг массы тела животного.

Животные в течение эксперимента находились на стандартном пищевом рационе и имели свободный доступ к воде и пище в течение суток. Световой режим - естественный.

Модель амилоидоза воспроизводилась однократным введением нативной овечьей плазмы и полного адъюванта Фрейнда из расчета 0,2 мл в 5 точек инъекций. Ацизол внутрижелудочно и милдронат подкожно вводили через 2 месяца создания амилоидоза. По истечении 30 и 60 дней экспериментальной терапии исследовались функциональные и морфологические характеристики почек. Для изучения функций почек в условиях спонтанного диуреза животные на 30 и 60-й день эксперимента помещались в обменные клетки, где в течение 6 часов у них собиралась моча. Определялись:

• объем диуреза;
• скорость клубочковой фильтрации по клиренсу эндогенного креатинина, и рассчитывалась канальцевая реабсорбция воды;
• содержание калия и натрия, методом пламенной фотометрии, с помощью пламенного фотометра ФПА-2;
• концентрация кальция на спектрометре СФ-26, с использованием набора «Кальций» ООО «Агат-Мед» (г. Москва, Россия).
• концентрация общего белка определялась спектрофотометрически (СФ-26), с помощью реактива Фоллина.

Показатели электролито- и водовыделительной функций почек. Таблица 1.

*) р ≤0,05 достоверное увеличение относительно фона;

**) р ≤0,05 достоверное увеличение относительно амилоидных животных.

Концентрация электролитов в крови. Таблица 2.

По истечении времени эксперимента (60 дней) животных забивали с использованием тиопентала натрия с целью исследования гистологического строения тканей. Для морфологических исследований образцы тканей почек фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине, после чего подвергали заливке в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 7-8 микрон. Срезы окрашивались гематоксилином, эозином, конго красным. Изучение срезов проводилось в проходящем свете при помощи микроскопа Микмед-1 под увеличением 80x200x800 (рис. 1, 2).

Рис. 1. Морфологические изменения в почках, через 60 дней после однократного введения равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы с полным адъювантом Фрейнда. Окраска конго красным, увеличение 80х200х400.

Конгофилия сосудистых клубочков (а) и базальных мембран канальцев (б).

Рис. 2. Влияние смеси милдронат и ацизола на морфологические изменения при амилоидозе почек на фоне однократного введения почек равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы с полным адъювантом Фрейнда. Окраска конго красным, увеличение 80х200х400. Снижение количества конгофильного белка в сосудистых клубочках (а) и базальных мембранах канальцев (б).

Результаты и их обсуждение. Анализ результатов исследования у золотистых сирийских хомяков с экспериментальным амилоидозом почек, моделированным однократным введением равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы и полного адъюванта Фрейнда, с последующим внутрижелудочным введеним ацизола и подкожным введением милдроната, показал достоверное корригирующее действие препаратов на показатели процессов мочеобразования, водо- и электровыделительную функцию почек. Так, у животных с моделью экспериментального амилоидоза относительно интактных животных отмечались: снижение объема диуреза, обусловленное уменьшением скорости клубочковой фильтрации, несмотря на снижение величины канальцевой реабсорбции; выраженная протеинурия; а также достоверное повышение калий- и кальцийуреза, что было обусловлено снижением реабсорбции этих катионов, несмотря на уменьшение их фильтрационного заряда. Отмечено значительное снижение экскреции натрия, и нарастание протеинурии, более чем в 2 раза. Как указано ранее, вышеперечисленные показатели свидетельствуют о развитии нефропатического типа экспериментального амилоидоза у животных. В качестве корригирующих средств нами были выбраны милдронат 10%-5мг/кг массы тела животного, вводимый подкожно, и ацизол 30 мг/кг массы животного, вводимый интрагастрально.

При этом на 30-й день введения вышеуказанных препаратов имело место увеличение объема диуреза относительно показателя амилоидных животных, обусловленное ускорением клубочковой фильтрации с одновременным повышением величины канальцевой реабсорбции, повышением кальций- и калийуреза, значительным нарастанием экскреции натрия, а также наблюдалось значительное снижение потери белка. В конце второго месяца, наблюдалось более выраженное восстановление объема диуреза, обусловленное повышением скорости клубочковой фильтрации более чем в 2,5 раза, несмотря на нарастание величины канальцевой реабсорбции. Снижение потерь белка было почти в 2 раза относительно показателя амилоидных животных. Имело место также достоверное повышение натрийуреза, снижение калий- и кальцийуреза, что было обусловлено снижением реабсорбции этих катионов, несмотря на уменьшение фильтрационного заряда калия, и увеличением фильтрационного заряда натрия и кальция. Перечисленные показатели приближались к показателям интактных животных. Таким образом, полученные данные свидетельствуют об эффективном корригирующем влиянии смеси милдроната и ацизола на показатели основных процессов мочеобразования и экскрецию электролитов у животных с имеющейся моделью амилоидной нефропатии.

При гистологическом исследовании почек животных группы № 2 была выявлена активная регенерация капилляров и эндотелия клубочков почек. Количество амилоида в клубочках и в базальных мембранах канальцев было существенно меньше.

В миокарде под влиянием милдроната и ацизола выявлены положительные гистоструктурные характеристики в виде уменьшения отложения амилоида в кардиомиоцитах, стенках кровеносных и лимфатических сосудов микроциркуляторного русла. Выявлено снижение дисциркуляторных процессов в виде уменьшения гиперемии, плазматического пропитывания, отека пространств межуточного вещества.

В печени - уменьшение конгофилии стенок центральных вен печеночных долек, уменьшение очагов паренхиматозной и жировой дистрофии гепатоцитов. Частичное восстановление органоспецифической цитоархитектоники в форме пролиферации гепатоцитов с крупными гиперхроматическими ядрами. Имеются участки активного формирования характерных печеночных балок с регенерацией внутридольковых печеночных протоков.

Таким образом, результаты проведенного эксперимента позволяют сделать вывод, что введение 10%-ного милдроната в дозе 5 мг/кг массы тела животного внутрижелудочно и ацизола из расчета 30 мг/кг подкожно, при амилоидозе, сформировавшемся спустя 2 месяца от момента однократного введения равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы и полного адъюванта Фрейнда из расчета 0,2 мл в 5 точек инъекций, является эффективным способом коррекции гистоструктурных и функциональных показателей почек.

Рецензенты:

Джиоев И.Г., д.м.н., профессор, заведующий Центральной научно-исследовательской лабораторией ГБОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Владикавказ.

Каде А.Х., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой общей и клинической патофизиологии Кубанского государственного медицинского университета, лауреат премии Правительства Российской Федерации, г. Краснодар.