Анемические состояния и их коррекция составляют серьезную проблему для ветеринарной медицины [4]. Первичные реакции организма на гемолитическую анемию зависят от ее этиологии, скорости разрушения эритроцитов и, как следствие, снижение гемоглобина, гематокрита и возможности развития анемической комы. Угроза последней возникает при нарушении функции сердечной мышцы, обусловленной повышенной нагрузкой на миокард вследствие уменьшения доставки кислорода к тканям организма. Это, в первую очередь, связано с потерей эритроцитов или дефицитом глобулярного объема [1, 8, 9]. Поэтому основным в лечении и профилактике анемической комы при гемолитической анемии является быстрое и качественное устранение гиперагрегации эритроцитов и тромбоцитов [3], нарушений микроциркуляции и реологических свойств крови [5], восстановление гемодинамики, а также повышение или восстановление кислородотранспортной функции крови [10].

Цель исследования: повышение эффективности лечения и реабилитации собак с гемолитической анемией, а также проведение сравнительной оценки антигипоксического действия цельной крови и препарата перфторан на патогенез данной патологии.

Материалы и методы

Материалом исследования были 60 собак в возрасте от 3 до 13 лет с различными заболеваниями, сопровождаемые гемолитической анемией в условиях ветеринарной клиники «Центр» г. Москвы. Количество особей с монозаболеванием, сопровождающимся гемолитической анемией, составило 55 %, а с сочетанными - 45 %. В соответствии с поставленным диагнозом основного заболевания всех пациентов разделили на 2 группы. Основная группа (n=30). В группу вошли животные, у которых в классическую схему терапии как метод борьбы с гемолитической анемией и ее последствиями был включен перфторан. Контрольная группа (n=30). В группу вошли животные, у которых методом борьбы с гемолитической анемией была выбрана гемотрансфузия цельной кровью. Исследования проводили посредством изменения гематологических показателей на фоне введения перфторана, его влияние на газотранспортную функцию и на кислотно-основное состояние крови [2, 6]. Перфторан вводили внутривенно струйно или капельно. Дозы рассчитывали индивидуально, в зависимости от показателей гемоглобина и гематокрита, от 2 до 15 мл/кг [7].

Для коррекции анемического состояния и поддержания кислородотранспортной функции крови в контрольной группе вводили цельную кровь в дозе не менее 10 мл/кг массы тела. Показанием к введению было снижение гемоглобина ниже 60 г/л и гематокрита ниже 20 %. Статистическая обработка результатов выполнена с помощью программы MedCalc для Windows.

Результаты исследований

Полученные при первичном обследовании данные свидетельствуют о том, что в обеих группах был низкий уровень гемоглобина при снижении количества эритроцитов. Восстановление газотранспортной функции крови перфтораном в исследуемой группе приводило, однако, и к гемодилюции. В связи с этим, в первые несколько часов после переливания перфторана, наблюдалось снижение содержания гемоглобина и эритроцитов в крови. Так, содержание гемоглобина крови (Hb) через час после переливания перфторана снижалось с 62,3±0,29 до 60,63±0,24 г/л (р<0,05) (табл.1).

Таблица 1

Гематологические показатели собак под воздействием перфторана и цельной крови

Показатели	Исходные значения
		Через 1 ч	Через сутки		Через 3-е суток
Гематологические показатели собак в основной группе
Эритроциты,×1012 /л	3,03±0,07	2,74±0,06		3,22±0,05		4,99±0,06
Гемоглобин, г/л	62,30±0,29	60,63±0,24		65,50±0,24		78,05±0,24
Гематокрит, %	18,19±0,17	17,76±0,16		20,08±0,09		23,93±0,10
Ретикулоциты, %	1,27±0,01	-		2,09±0,04		2,53±0,03
Гематологические показатели собак в контрольной группе
Эритроциты,×1012 /л	3,00±0,08	4,07±0,08		3,82±0,05		4,56±0,06
Гемоглобин, г/л	64,95±0,25	70,11±0,24		67,75±0,24		70,96±0,25
Гематокрит, %	18,48±0,14	19,16±0,16		18,90±0,16		20,67±0,17
Ретикулоциты, %	1,27±0,02	-		1,98±0,04		2,17±0,01

Примечание. (р<0,05)

Инфузия перфторана смогла улучшить снабжение тканей кислородом. В основной группе концентрация Hb имела тенденцию к увеличению и составила на 3-е сутки 78,05±0,24 г/л в основной группе против 70,96±0,25 г/л - в контрольной. Содержание эритроцитов в крови у больных животных, получавших перфторан, уменьшалось с 3,03±0,07 до 2,74±0,06×10¹² /л (р<0,05). На 3-и сутки количество эритроцитов в основной группе составило 4,99±0,06×10¹² /л и 4,56±0,06×10¹²/л - в контрольной. Также была отмечена тенденция к снижению гематокритного показателя (Ht) крови - с 18,19±0,17 до 17,76±0,16 %. С течением времени, через 3 дня в основной группе он был равен 23,93±0,1 %, в контрольной - 20,67±0,17 %.

Было отмечено, что ретикулоцитарный криз (компенсаторное увеличение концентрации ретикулоцитов при значительном снижении количества эритроцитов) в основной группе наблюдался на 3-е сутки и проявлялся увеличением числа ретикулоцитов в 1,9 раза относительно исходных значений (1,27±0,01 и 2,53±0,03 % соответственно), а в контрольной группе - в 1,7 раза (1,27±0,02 и 2,17±0,01 % соответственно). Различия в динамике концентрации ретикулоцитов в основной и контрольной группах определялись меньшими расстройствами микроциркуляции после применения перфторана, а также улучшением газотранспортной функции крови, способствующей активации обменных процессов в тканях организма, в том числе и в органах кроветворения.

С началом инфузий препарата, даже при низкой концентрации гемоглобина (62,3±0,29 г/л в основной группе), отмечено значительное повышение напряжения кислорода в артериальной крови, по сравнению с данными у контрольной группы, что свидетельствует о достаточном ее насыщении кислородом (Табл. 2). При этом выявлено, что процентное содержание кислорода во вдыхаемой смеси от 20 до 40 % при переливании перфторана повышает кислородную емкость крови в 1,5-2 раза. Через сутки после инфузии перфторана напряжение кислорода в артериальной крови оставалось на достаточно высоком уровне - 153,21±0,26 мм рт. ст. при вдыхании кислородной смеси на уровне 20 %. При переводе больных животных на самостоятельное дыхание парциальное давление кислорода в артериальной крови уменьшалось в 1,5 раза и равнялось 103,26±0,15 мм рт. ст. В этой связи, даже малое присутствие в кровеносном русле дополнительных носителей кислорода (частиц перфторуглерода) существенным образом увеличивает РаО₂, что обеспечивает лучшие условия оксигенации тканей. Через сутки после инфузии перфторана повышалось напряжение кислорода в венозной крови, что можно рассматривать как признак уменьшения гипоксии тканей. Кроме этого, следует отметить, что РвО₂ в основной группе не превышало значений физиологической нормы (35-49 мм рт. ст.), при которых осуществляется полноценный газообмен в тканях посредством гемоглобина.

Таблица 2

Динамика показателей газотранспортной функции крови под воздействием перфторана и цельной крови

Показатели	Норма	Исходные значения	Через 1 сутки	Через 3 суток
		M1 ± m1	M1 ± m1	M1 ± m1
Основная группа
PaO2	80-95	83,67±0,21	153,21±0,26	103,26±0,15
PвO2	35-49	29,9±0,20	48,80±0,11	47,60±0,15
PaСO2	35-45	24,49±0,19	34,45±0,09	33,95±0,10
PвСO2	41-51	26,1±0,2	40,25±0,09	38,83±0,12
Контрольная группа
PaO2	80-95	82,93±0,17	84,63±0,20	83,99±0,21
PвO2	35-49	30,10±0,19	31,60±0,14	33,30±0,16
PaСO2	35-45	24,18±0,24	25,98±0,13	25,9±0,1
PвСO2	41-51	26,50±0,19	33,44±0,17	32,35±0,13

Примечание. Р<0,05 - разница достоверна в сравнении с исходными значениями

PaCO₂ - парциальное давление углекислого газа; PaO₂ - парциальное давление кислорода, артерия, вена

Более полное извлечение тканями кислорода из эритроцитарного гемоглобина в присутствии частиц перфторана, при одинаковой потребности в условиях доставки, обеспечивалось, скорее всего, за счет его ускоренной диффузии. Другим фактором, определяющим более высокое извлечение кислорода из эритроцитарного гемоглобина в присутствии частиц используемой эмульсии, стало облегчение условий его дезоксигенации за счет снижения сродства Hb к кислороду в силу увеличения РвСО₂ крови. Результаты прямого измерения РвСО₂ и pH крови показали положительное действие перфторана в вымывании углекислоты из тканей и транспорте ее к легким. Основной механизм таких изменений заключается в том, что частицы эмульсии перфторана, принимая активное участие в транспорте газов крови, увеличивают скорости доставки кислорода к тканям и способствуют быстрой элиминации углекислоты. В результате доставки кислорода к тканям и ускорению его диффузии из эритроцитов, увеличивается его потребление.

В проведенных исследованиях pH крови у животных в среднем составлял 7,270±0,004 в обеих группах, дефицит оснований (ВЕ) - 6,78±0,08 ммоль/л в основной группе и - 6,89±0,07 ммоль/л - в контрольной, уровень бикарбоната плазмы - 19,27±0,16 и 19,2±0,11 ммоль/л в основной и контрольной группах соответственно. Значительное снижение уровня напряжения кислорода в венозной крови свидетельствовало о том, что функции внешнего дыхания и кровообращения приближаются к грани исчерпания компенсаторных возможностей. Через сутки после начала вливания перфторана отмечено достоверное увеличение pH крови с 7,270±0,004 до 7,370±0,005 (р<0,05), к концу третьих суток - 7,350±0,004. Дефицит буферных оснований продолжал снижаться значительно быстрее, чем у больных контрольной группы. Так, в основной группе дефицит оснований через сутки от начала инфузии перфторана составлял - 5,75±0,09 ммоль/л. В то же время у больных животных контрольной группы дефицит буферных оснований не имел тенденции к изменению и оставался в пределах - 6,83±0,06 ммоль/л. Уровень содержания бикарбоната плазмы достоверно повышался по сравнению с исходным уровнем, как в основной, так и в контрольных группах. Однако, если в основной группе эти показатели были стабильны на протяжении первых суток после начала интенсивной терапии, то в контрольной группе отмечена тенденция к их снижению. Показатели уровня лактата и NH₃ также свидетельствовали о более быстрой нормализации кислотно-щелочного гомеостаза организма в основной группе (табл. 3).

Таблица 3

Динамика показателей кислотно-основного состояния под воздействием перфторана и цельной крови

Показатели КОС	Норма		Исходные значения	Через сутки	Через 3 суток
Основная группа
pH	7,33-7,43	7,270±0,004		7,370±0,005	7,350±0,004
ВЕ	±2 ммоль/л	-6,78±0,08		-5,75±0,09	-2,55±0,06
НСО3	24-28 ммоль/л	19,27±0,16		22,34±0,15	23,19±0,16
NH3	0-95 мкмоль/л	97,70±0,27		92,60±0,25	89,31±0,02
Лактат	0,5-2,5ммоль/л	2,93±0,04		2,41±0,03	2,34±0,02
Контрольная группа
pH	7,33-7,43	7,270±0,004		7,310±0,003	7,300±0,003
ВЕ	±2 ммоль/л	-6,89±0,07		-6,83±0,06	-6,56±0,06
НСО3	24-28ммоль/л	19,20±0,11		22,26±0,18	22,40±0,19
NH3	0-95 мкмоль/л	97,40±0,25		97,54±0,19	96,72±0,08
Лактат	0,5-2,5 ммоль/л	3,01±0,05		2,88±0,05	2,86±0,01

Примечание. Р<0,05 - разница достоверна в сравнении с исходными значениями. BE - буферная емкость; HCO₃^- анион бикарбоната; NH₃ уровень аммиака.

Соматическая патология в виде анемии, хронических заболеваний мочевыводящих путей, желудочно-кишечного тракта, печени, обменно-эндокринных нарушений и другой патологии оказывает определенное влияние на нейро-эндокринный фон организма, что способствует нарушению сосудисто-тромбоцитарного и плазменного звеньев гемостаза и развитию кровотечений различного характера, а также тромбоэмболических осложнений. При исследовании анамнеза животных с гемолитической анемией мы выяснили, что основная и контрольная группы сопоставимы по основным патологическим показателям. Это дало нам возможность сравнения результатов применения различных лечебно-профилактических подходов. Проведенные нами клинические исследования показали высокую лечебную эффективность искусственного переносчика кислорода - перфторана. Ценным является то, что препарат, наряду со способностью улучшать газотранспортную функцию крови, обладает антиоксидантным свойством и повышает антикоагуляционную и фибринолитическую способность плазмы, а это, в свою очередь, повышает его клиническую значимость.

Наши исследования выявили, что инфузии перфторана приводят к уменьшению расстройств микроциркуляции, проявиляющемуся увеличением числа ретикулоцитов в опытной группе в 1,9 раза относительно исходных значений (1,27±0,01 и 2,53±0,03 % соответственно), а в контрольной группе - в 1,7 раза (1,27±0,02 и 2,17±0,01 % соответственно). Происходит также урежение частоты пульса, ликвидируется периферический сосудистый спазм. Перфторан предупреждает развитие гиперволемических осложнений (отека легкого), секвестрирования и депонирования крови, что позволяет быстрее и лучше восстановить кровообращение. Клинически нами отмечено увеличение наполнения пульса и подкожных вен, потепление кожных покровов и восстановление диуреза.

При введении перфторана у животных опытной группы частота сердечных сокращений (ЧСС) через 30 мин уменьшалась с 144,40±2,16 до 135,90±3,09 уд./мин, тогда как в контрольной группе оставалась без изменений (144,80±2,19 вначале гемотрансфузии и 144,80±2,18 через 30 мин). При дальнейшем введении переносчика кислорода она менялась незначительно и к концу инфузии составляла 135,2±2,12 уд./мин. В контрольной группе частота сердечных сокращений также была стабильной, однако составляла 144,4±2,2 уд./мин. Благоприятное действие перфторана на сердечную деятельность мы связываем с его положительным влиянием непосредственно на сократительную способность миокарда. Через сутки после инфузии перфторана повышалось напряжение кислорода в венозной крови, что можно рассматривать как признак уменьшения гипоксии тканей. Кроме этого, следует отметить, что РвО₂ в основной группе не превышало значений физиологической нормы (48,80±0,11 мм рт. ст.), при которых осуществляется полноценный газообмен посредством гемоглобина в тканях. Более полное извлечение тканями кислорода из эритроцитарного гемоглобина обеспечивалось за счет его ускоренной диффузии в присутствии частиц перфторана. Другим фактом подтверждающим более высокое извлечение кислорода из эритроцитарного гемоглобина стало облегчение условий его дезоксигенации за счет снижения сродства Hb к кислороду в силу увеличения РвСО₂ крови [10]. Благодаря непосредственному участию перфторана в доставке кислорода к тканям и ускорению его диффузии из эритроцитов, увеличивается потребление его тканями. В результате влияния перфторана на ускорение диффузии СО₂ из тканей и его элиминацию происходит увеличение напряжения СО₂ в крови, что приводит к росту суммарной СО₂ венозной крови. Вследствие такого участия перфторана в транспорте О₂ и СО₂ наблюдается оптимизация газообмена в условиях высокой кислородной задолженности организма. Кроме того, наступала коррекция кислотно-основного состояния организма. В группе животных, получавших перфторан, в течение первых суток отмечена тенденция к повышению и стабилизации pH артериальной крови до 7,370±0,005. В группе животных, которым производилось переливание крови подобной тенденции нами не выявлено.

Таким образом, на фоне введения перфторана наступает улучшение буферных свойств крови, о чем свидетельствует достоверное снижение дефицита буферных оснований крови и повышение истинного бикарбоната плазмы. Однако, если в основной группе эти показатели были стабильны на протяжении первых суток после начала интенсивной терапии, то в контрольной группе отмечена тенденция к их снижению. Использование перфторана у животных с гемолитической анемией приводит к нормализации кислотно-основного состояния и ликвидирует развившийся ацидоз.

Рецензенты:

Позябин С.В., д.вет.н., профессор кафедры ветеринарной хирургии ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины им. К.И. Скрятина», г. Москва;

Селезнёв С.Б., д.вет.н., профессор, зав. кафедрой клинической ветеринарии Российского университета дружбы народов, г. Москва.