Черепно-мозговая травма (ЧМТ) является одной из актуальных проблем современной медицины. ЧМТ относится к числу наиболее распространенных повреждений и составляет около 40% от всех видов травм. Согласно статистике Всемирной организации здравоохранения она имеет тенденцию к нарастанию в среднем на 2% в год. При этом преобладает контингент пострадавших в возрасте от 20 до 50 лет, то есть в период наибольшей трудоспособности [5].

Несмотря на многочисленные исследования в области патогенеза первичных и вторичных повреждений головного мозга, разработку современных методов диагностики, лечения и реабилитации таких больных, летальность в последние годы существенно не изменилась и остается на уровне 35-68%. Наряду с этим у большинства выживших (60-70%) в результате тяжелой черепно-мозговой травмы наблюдается снижение работоспособности или инвалидизация[1, 5, 10, 11, 12].

В настоящее время общепризнанна роль тромбофилий в возникновении осложнений и отягощении течения различных заболеваний. Установлено, что большая часть хирургической патологии протекает на фоне нарушений в системах гемостаза и иммунитета. Состояние последних оказывает значительное влияние на течение заболеваний, эффективность лечения и исход. К сожалению, Забайкальская популяция людей в этом отношении является далеко неизученной. Под руководством Ю.А. Витковского выполнены популяционные исследования частоты протромботических мутаций FV (ЛейденG1691A), мутация в гене протромбина II(G20210A), в гене МТГФР (C677T) среди здоровых и больных сосудистыми заболеваниями головного мозга, инфекционными заболеваниями у детей, опухолях легких в этническом и возрастном аспектах. Однако эти исследования не коснулись больных с ЧМТ. Травма является триггером ферментного каскада системы гемостаза, при этом у пациентов, страдающих тромбофилией, происходит срыв резервных возможностей организма, что неизбежно приводит к грубым патофизиологическим сдвигам [2].

            В связи с вышесказанным, изучение генетического полиморфизма молекул, принимающих участие в механизмах регуляции межклеточных взаимодействий у больных при ЧМТ, а также поиски генетических маркеров развития осложнений представляется перспективным как в теоретическом, так и практическом отношениях.

Цель исследования - изучить частоту встречаемости генотипов полиморфного маркера гена фактораV Лейден (FV Leiden G1691A), гена протромбина (FII G20210A) и гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR C677T) у больных с черепно-мозговой травмой в Забайкальском крае.

Материалы и методы

В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (WorldMedicalAssociationDeclarationofHelsinki 1964, 2011 - поправки) и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утверждёнными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003г. № 266. Проведено обследование 96 пациентов в возрасте от 20 до 40 лет с черепно-мозговой травмой. Полученные данные сравнивались с результатами исследований, проведенных у100 практически здоровых доноров в возрасте от 20 до 40 лет.В работе с ЧМТ использовалась общепринятая классификация. Диагноз выставлялся на основании жалоб, факта травмы, данных клинического и невро­логического обследования и подтвержден нейровизулизационными методами исследования (КТ головного мозга)[5, 12].

Из клинической группы исключались пациенты с какой-либо сопутствующей патологией.

            Материалом для молекулярно-генетического анализа служили образцы ДНК, выделенные из периферической венозной крови. Для исследования выбрана точковая мутация FVв позиции 1691(G>A), мутацияFII в позиции 20210 (G>A) и мутация MTHFR в позиции 677 (C>T). Амплификацию фрагмента исследуемыхгенов проводили в термоцикле (модель Ре «Бис» - М111 (ООО «Бис-Н», Новосибирск). В работе использовались стандартные наборы праймеров научно-производственной фирмы «Литех»-«SNP» (Москва). Визуализация продуктов амплификации выполнена с помощью электрофореза в 3% агарозном геле с добавлением бромистого этидия в проходящем в ультрафиолетовом свете [7].

            Полученные данные обработаны с помощью программы «STATISTICA 6.1». Статистический анализ полученных данных проведен с использованием критерия χ2. Различия считались статистически значимыми при p<0,05. Для оценки ассоциаций аллелей с генотипом рассчитывали относительный риск (ОR) [8].

Результаты исследования и их обсуждение

Распределение распространенности генотипов полиморфного локуса G1691А гена FV и локуса G20210AгенаFIIу больных с черепно-мозговой травмойи контрольной группы, соответствовало ожидаемому равновесию Харди-Вайнберга, тогда как распределение полиморфного локуса С677Т гена MTHFR, напротив,не подчинялось данному равновесию, в результате чего, для расчета полученных данных нами использована аддитивная модель - тест Кохрана-Армитаджа для линейных трендов (табл. 3).

Характеристика распределениячастоты аллелей и генотипов гена FV-1691G>Aу пациентов с ЧМТи группой здоровых лиц представлена в таблице 1.

Таблица1

Частота аллельных вариантов гена FV-1691G>Aи егогенотипов среди здоровых резидентов и пациентов с черепно-мозговой травмой (χ2, df=1)

               Аномалия Лейден выявлена в 1 (1,04%) случа­е только в клинической группе, а в гетерозиготном состоянии у 2 (2,08%) пациентов и 1 здорового резидента (1%). По данным литературы частота это­го полиморфизма составляет от 3 до 7% в попу­ляции [4, 6,14, 17]. Низкая распространенность мутантной гомозиготы в нашем исследовании объясняется малой выборкой (не популяционной), хотя и позволит в дальнейшем проводить сравнительный частотный анализ.

Распределение распространенностиаллелей и генотипов генаFII-20210G>A среди пациентов с ЧМТ и здоровых лиц представлено в таблице 2.

Таблица 2

Частота аллельных вариантов гена FII-20210G>Aи егогенотипов среди здоровых резидентов и пациентов с черепно-мозговой травмой (χ2, df=1)

    Аномалии в гене FII-20210G>A(-20210А/А)нами не выявлено, тогда как носительство генотипа - 20210G/А гена FII зарегистрировано у 2 лиц контрольной группы и 4 пациентов с ЧМТ.Встречаемость генотипа - 20210А/А гена FIIв общей по­пуляции регистрируется в среднем у 2,3% людей [6]. ПоданнымJunkerR. etall. [16], частотаэтоймутацииуевропейцевварьируетот 0,­4%. Отмечено, что эта мутация чаще встреча­ется у европейцев, и редко у азиат [14].

Распределение генотипов генаMTHFR-677C>Tу здоровых лиц и у пациентов с ЧМТ представлено в таблице 3.

Таблица 3

Частота генотипов гена MTHFR-677C>Tсреди здоровых резидентов и пациентов с черепно-мозговой травмой (xi=[0,1,2],df=1)

            Носительство генотипа - 677С/ТгенаMTHFRотмечено у 44 (44%) здоровых лиц и 49 (51%) пациентов с ЧМТ, а частота генотипа - 677Т/Т выявлена у 11 (11%) и 7 (7,3%) человек, соответственно, что согласуется с литературными данными, поскольку генотип-677С/ТгенаMTHFRвстречается в популяциив 50%, а го­мозиготное носительство данной мутации среди белого населения планеты составляет от 5 до 12% [13, 15].

            Попытка установить связь между развитием венозных тромбоэмболических осложнений при ЧМТ и наследственными изменениями в системе свертывания крови не увенчалась успехом ввиду отсутствия таковых осложнений, что, вероятно, связано с обязательным профилактическим применением антикоагулянтных препаратов у данной группы больных [3, 9].

    Таким образом,полученные результаты создают пред­посылки для продолжения исследования генетического полиморфизма молекул принимающих участие в механизмах регуляции межклеточных взаимодействий, что позво­лит более детально и достоверно оценить вклад генетических факторов не только изучаемых ал­лельных вариантов, но и их комбинаций в разви­тие наиболее грозных осложнений при ЧМТ и в дальнейшем поможет разработать программы по их профилактике на основе формирования групп по­вышенного риска.

    Вывод

          Распространенность генотипов полиморфных молекул гена FV-1691G>A, генаFII-20210G>A, гена MTHFR-677C>T и их аллельных вариантов у пациентов с черепно-мозговой травмой не отличается от здоровых лиц.

ЦыбиковН.Н., д.м.н.,профессор, заведующий кафедрой патологической физиологииГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Чита;

Намоконов Е.В., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой общей и специализированной хирургии с курсом топографической анатомии и оперативной хирургии ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Чита.