Установлено, что в настоящее время у 80% женщин возникают структурные изменения в подкожно-жировой клетчатке (целлюлит) (Nicole J. Achenbach, Len Kravitz), причиной которых является совокупность различных факторов: от гормональных нарушений и избыточного питания, богатого жирами и углеводами, до недостаточной физической активности [8]. Для предотвращения таких изменений используют наружные средства, усиливающие микроциркуляцию и улучшающие обменные процессы в коже. В качестве природных компонентов таких средств чаще всего используют: экстракты плюща, конского каштана, ромашки, арники, хвоща, лимона и др. В их состав входят: эфирные масла, оксикоричные кислоты, флавоноиды, макро- и микроэлементы [8]. Трава мелиссы также является перспективным источником эфирного масла (содержит цитраль, цитронеллаль и др.), аскорбиновой кислоты, фенилпропаноидов (содержит розмариновую, кофейную, хлорогеновую кислоты и др.), флавоноидов (содержит лютеолин, апигенин и др.), кумарина эскулетина, макроэлементов калия, кальция, магния; микроэлементов кремния, марганца, меди, цинка, серы, селена и др. [2].

Последние результаты исследований ученых из университета Бастира (Bastyr University в Kenmore, штат Вашингтон, США) доказывают, что экстракты из травы мелиссы при наружном применении улучшают микроциркуляцию в коже [4].

Целью настоящей работы явились изучение и разработка технологии косметического крема на основе водного стабилизированного извлечения из травы мелиссы лекарственной.

Материалы и методика

На первом этапе исследований было проведено определение подлинности и товароведческих показателей травы мелиссы лекарственной. Для исследования было собрано сырье мелиссы лекарственной (трава), культивируемое в ботаническом саду Пятигорского медико-фармацевтического института. Для определения подлинности и доброкачественности сырья нами был проведен фармакогностический анализ в соответствии с требованиями фармакопеи [1, 3].

В связи с тем, что для получения извлечений (настоев) использовалась вода очищенная, данный экстрагент применялся и при определении экстрактивных веществ. Определение количества экстрактивных веществ проводили по методике, описанной в ГФ XI, вып. 1 [1]. В сырье устанавливали наличие полифенольных соединений (флавоноидов и дубильных веществ), органических кислот, кислоты аскорбиновой, используя рекомендации ГФ XI, вып. 2 [1, 7]. В частности, идентификацию флавоноидов в водном извлечении из травы мелиссы проводили с помощью цветных химических реакций (цианидиновая проба, с раствором основного ацетата свинца, с раствором аммиака, с раствором алюминия хлорида) и методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) [7]. Для наилучшего разделения и обнаружения флавоноидов были изучены различные системы растворителей (спирт н-бутиловый — кислота уксусная — вода (БУВ) (4:1:2), этилацетат — кислота муравьиная — вода (10:2:3), различные реактивы для детектирования (УФ свет, раствор алюминия хлорида (III), пары раствора аммиака концентрированного).

Для количественного определения флавоноидов использовали метод дифференциальной спектрофотомерии, основанный на реакции комплексообразования флавоноидов с алюминия хлоридом [5]. Дифференциальные спектры настоя мелиссы оказались близки по положению максимума дифференциальному спектру лютеолина, поэтому сумму флавоноидов определяли в пересчете на лютеолин (λ max = 395±3 нм).

Для количественного анализа аскорбиновой кислоты в сырье использовали титриметрическую методику с раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия (0,001 моль/л) [1], для анализа органических кислот — титриметрическую методику с раствором натрия гидроксида. Определение содержания окисляемых веществ проводили с использованием метода перманганатометрии [1].

Затем было проведено изучение влияния режимов экстрагирования на концентрацию экстрактивных веществ в извлечениях из травы мелиссы. Критериями выбора оптимального времени экстрагирования явились: величина сухого остатка, содержание основных групп биологически активных веществ, сохранение их стабильности. Настои мелиссы 1:20 получали с использованием двухфазного режима [1]: 1-я фаза — настаивание на кипящей водяной бане в течение 15 (контроль, экстракция по методике ГФ XI издания [1], экстрагент — вода очищенная комнатной температуры), 20, 25, 30 мин (экстрагент — вода очищенная с температурой 95–98°С); 2-я фаза — настаивание при комнатной температуре до полного охлаждения и не менее 45 мин.

В настоях определяли концентрацию сухого остатка, содержание флавоноидов, дубильных веществ, органических кислот и витамина С, а также стабильность биологически активных веществ (БАВ) с использованием метода ТСХ. Для повышения стабильности БАВ мелиссы были использованы химические стабилизаторы (трилон Б и натрия метабисульфит) и консервант нипагин [5].

На основе стабилизированного водного извлечения из травы мелиссы был разработан состав косметического крема. В качестве компонентов для приготовления основы крема использовали: ланолин безводный, воск, масло кокосовое, скипидар, эмульгаторы: Т-2, палсгаард 6011, палсгаард 2007, твин 80. Компоненты основы подбирали таким образом, чтобы в них можно было ввести максимальное количество настоя мелиссы 1:20. Основы готовили путем сплавления компонентов. В первую очередь расплавляли самый тугоплавкий компонент, затем добавляли компоненты с меньшей температурой плавления (палсгаарды — температура плавления около 630С; эмульгатор № 1 — температура плавления не менее 50°C; — эмульгатор Т-2 — температура плавления не менее 48°C; ланолин безводный – температура плавления 38°C; масло кокосовое – температура плавления 28°C; скипидар – жидкий при комнатной температуре), затем добавляли настой мелиссы и перемешивали до однородного состояния. Составы кремов представлены в таблице 1.

Таблица 1

Составы кремов на основе водного извлечения мелиссы

Все полученные составы были изучены на агрегативную устойчивость [6].

Результаты

В результате проведения макроскопического анализа исследуемого сырья были установлены внешние признаки высушенной мелиссы травы, позволяющие констатировать подлинность лекарственного растительного сырья (ЛРС):

1) листья скрученные, тонкие, яйцевидной формы с клиновидным основанием, край городчатый, жилкование перистое; листья опушенные, зеленного цвета;

2) стебли четырехгранные, продольно желобчатые, серо-зеленные, с рыхлой серовато-белой сердцевиной;

3) цветки и бутоны в ложных мутовках, в пазухах верхних листьев, с черешками;

4) прицветники эллиптические, заостренные;

5) чашечка двугубая, колокольчатая, опушенная, с плоской верней губой, с 5 зубцами, зеленого цвета;

6) венчик двугубый, желтовато-белый;

7) запах слабый ароматный; вкус слегка горьковатый.

В результате микроскопического анализа установлены микродиагностические признаки ЛРС (рисунок):

1) клетки верхнего эпидермиса многоугольные с извилистыми стенками, клетки нижнего эпидермиса мельче с более извилистыми стенками;

2) устьица на обеих сторонах листа окружены двумя клетками эпидермиса, смежные стенки которых перпендикулярны устьичной щели (диацитный тип);

3) по жилкам и по краю листа встречаются 3–6-клеточные простые волоски (1) с толстыми стенками и бородавчатой кутикулой;

4) по всей поверхности листа имеются сосочковидные (2) и конусовидные (3) волоски с бородавчатой кутикулой; изредка встречаются железистые волоски на короткой одно-трех-клеточной ножке с овальной одноклеточной головкой (4);

5) на нижней стороне листа в небольших углублениях находятся эфиромасличные железки, состоящие из 8 радиально расположенных выделительных клеток и одноклеточной короткой ножки (5).

Микроскопия листа мелиссы лекарственной с поверхности (×40; обозначения в тексте)

При проведении товароведческого анализа сырья мелиссы установлено, что содержание влаги в образце травы мелиссы лекарственной составило 6,05 ± 0,19%, общей золы — 11,94±0,49%, золы, не растворимой в 10%-ной хлористоводородной кислоте, – 2,18±0,08%. При экстрагировании травы мелиссы водой очищенной по методике, описанной в ГФ XI, вып. 1 [2], извлекается около 12,52± 0,51% экстрактивных веществ.

Качественные реакции показали наличие в траве мелиссы веществ флавоноидной природы. Наиболее оптимальные результаты были получены в системе БУВ (4:1:2) при обработке 2%-ным раствором алюминия хлорида (III) [7], пластинки «Сорбфил» — УФП — ПТСХ. В сырье в присутствии свидетелей (рутина, лютеолина) обнаружены: рутин (Rf = 0,63±0,2), лютеолин (Rf = 0,92±0,2) и три неидентифицированных пятна, имеющих желтую окраску после детектирования.

Содержание биологически активных веществ в траве мелиссы лекарственной составило: суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин — 1,188±0,034%, органических кислот — 2,352±0,051%; кислоты аскорбиновой – 130 мг%; окисляемых веществ — 5,081±0,092%.

Результаты изучения режимов экстрагирования травы мелиссы представлены в таблице 2.

Таблица 2

Содержание сухих веществ, флавоноидов, аскорбиновой кислоты в настоях травы мелиссы, полученных разными способами

Таким образом, при изучении влияния времени экстрагирования на концентрацию экстрактивных веществ в извлечениях из травы мелиссы оказалось, что оптимальное время экстрагирования составляет: 1-я фаза — настаивание на кипящей водяной бане в течение 25 мин, 2-я фаза — настаивание при комнатной температуре до полного охлаждения и не менее 45 мин. При таком режиме экстракции содержание БАВ в траве мелиссы лекарственной составило: суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин — 0,049±0,002%, органических кислот — 0,096±0,004%; кислоты аскорбиновой – 5,27±0,21 мг%; окисляемых веществ — 0,211±0,008%.

Определено количество стабилизаторов для настоя мелиссы 1:20: нипагина 0,15%; трилона Б 0,5%, натрия метабисульфита 0,5%.

По итогам исследований агрегативной устойчивости составов кремов за основу была принята композиция № 1: кокосовое масло 10 частей, эмульгатор Т-2 5 частей, настой мелиссы до 100 частей.

Для того чтобы ввести скипидар (обладает пенетрирующими свойствами), часть кокосового масла заменили на ланолин безводный и масло какао, часть настоя мелиссы заменили на скипидар от 1,0–5,0 г. Наилучшими свойствами обладал состав № 12. Окончательный состав крема: кокосового масла 5,0; эмульгатора Т-2 5,0; ланолина безводного 5,0; масла какао 5,0; скипидара 5,0; настоя мелиссы до 100,0.

Технология крема состояла в следующем. Подготовленные ингредиенты расплавляли в следующем порядке: эмульгатор Т-2, ланолин б/в, масло какао, кокосовое масло перемешивали, охлаждали до температуры 35ºС. В основу добавляли теплый (35ºС) стабилизированный настой мелиссы 1:20, затем смешивали до получения однородной массы, охлаждали. В последнюю очередь добавляли скипидар, смешивали до получения однородной массы. Фасовку крема осуществляли в стеклянные широкогорлые баночки с навинчивающимися крышками, предохраняющими крем от внешних воздействий и обеспечивающими стабильность в течение установленного срока хранения.

Количественный анализ крема проводили после пробоподготовки образца. Содержание биологически активных веществ в косметическом креме составило: суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин — 0,036 ±0,001%, органических кислот — 0,072 ±0,003%; кислоты аскорбиновой – 1,311± 0,061 мг%; окисляемых веществ — 0,112±0,004%.

Выводы

1. Определены показатели подлинности ЛРС мелиссы лекарственной: влажность 6,05%, содержание: суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин — 1,188±0,034%, органических кислот — 2,352±0,051%; кислоты аскорбиновой – 130 мг%; окисляемых веществ — 5,081±0,092%.

2. Установлены оптимальные условия получения стабилизированного настоя мелиссы, обеспечивающие его качество: 1-я фаза — настаивание на кипящей водяной бане в течение 25 мин, экстрагент вода очищенная с температурой 95–98°С; 2-я фаза — настаивание при комнатной температуре до полного охлаждения извлечения, не менее 45 мин; количество стабилизаторов (нипагина 0,15%; трилона Б 0,5%; натрия метабисульфита 0,5%).

2. Научно обоснован и разработан состав крема: кокосового масла 5,0; эмульгатора Т-2 5,0; ланолина безводного 5,0; масла какао 5,0; скипидара 5,0; настоя мелиссы 1:20 до 100,0.

3. Проведен анализ основных БАВ извлечения травы мелиссы в составе крема. Содержание биологически активных веществ в косметическом креме составило: суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин — 0,036 ±0,001%, органических кислот — 0,072 ±0,003%; кислоты аскорбиновой – 1,311± 0,061 мг%; окисляемых веществ — 0,112±0,004%.

Рецензенты:

Попова О.И., д.фарм.н., профессор кафедры фармакогнозии Пятигорского медико-фармацевтического института филиала ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, г. Пятигорск;

Компанцев В.В., д.фарм.н., профессор кафедры неорганической, физической, коллоидной химии Пятигорского медико-фармацевтического института филиала ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, г. Пятигорск.