Результатами исследований по молекулярной генетике, выполненными как на людях, так и на экспериментальных животных, выявлена роль полиморфного локуса Taq 1A гена рецептора дофамина второго типа (DRD₂) в патогенезе многих психоневрологических заболеваний. При этом показано, что наличие аллеля А₁ (T>C) типично для пациентов с различными формами аддиктивных расстройств и проявлениями синдрома гиперактивности и дефицита внимания, в то время как аллель А₂ (C>T) чаще встречается у больных шизофренией и страдающих обcессивно-компульсивными расстройствами [10].

Исследование ориентировочно-исследовательского поведения гомозиготных крыс по локусу Taq 1ADRD₂ выявило ассоциацию генотипа А₁/А₁ с активной, а генотипа А₂/А₂ – пассивной стратегией поведения; а также наличие половых различий в группах гомозиготных крыс. Активность самок крыс обеих групп выше, чем самцов, но у крыс с генотипом А₁/А₁ эти различия более выражены и имеют место со стороны большего числа параметров [2]. Эти данные указали на роль фактора пола в формировании поведенческих реакций животных и на необходимость изучения влияния на поведение половых стероидов.

Целью работы явился сравнительный анализ исследовательской деятельности и груминга на разных стадиях эстрального цикла двух субпопуляций крыс линии WAG/Rij с различиями генотипа локуса Taq 1A DRD₂.

Материал и методы исследования

Исследования проведены на двух группах половозрелых крыс линии WAG/Rijс генотипами А₁/А₁ и А₂/А₂ по локусу Taq 1A DRD₂ с массой тела 250-320 г. Более подробно данные о крысах, условиях их содержания, генотипировании локуса и выполненном эксперименте приведены в работе [1]. К настоящему времени две группы крыс линии WAG/Rij, имеющих генотипы А₁/А₁ и А₂/А₂ по локусу Taq 1A DRD₂, прошли более 30 поколений. Поведение крыс (всего 20, 10 крыс с генотипом А₁/А₁ и 10 крыс с генотипом А₂/А₂) изучали в установке «квадратное открытое поле» по общепринятой методике. Исследовательскую деятельность оценивали по количеству вертикальных стоек в центре и периферии поля, сумма этих двух показателей определяла общую исследовательскую деятельность. Регистрировали количество эпизодов груминга и его общую продолжительность. Стадии эстрального цикла определяли по цитологии влагалищных мазков непосредственно перед регистрацией поведения крыс. Полученные результаты систематизировали по стадиям эстрального цикла и подвергали статистической обработке с помощью пакета программ “Statistica 6”.

Результаты исследования и их обсуждение

Количество стоек на разных стадиях эстрального цикла (ЭЦ): диэструс (Д), проэструс (П), эструс (Э) и метэструс (М), отражающее выраженность исследовательской деятельности крыс с генотипом А₁/А₁, приведено в табл. 1.

Таблица 1

Показатели исследовательской деятельности крыс с генотипом А₁/А₁ в открытом поле на разных стадиях эстрального цикла (M+m)

Данные табл. 1 показывают, что общее количество вертикальных стоек повышается на стадии проэструс по сравнению со стадией диэструс, несколько снижается на стадиях эструс и метэструс, и возвращается к исходному уровню на стадии диэструс. Все различия являются статистически незначимыми (p>0,05).

Изменения в характеристиках груминга у крыс с генотипом А₁/А₁ отражены в табл.2.

Таблица 2

Количество эпизодов и общая продолжительность груминга у крыс с генотипом А₁/А₁ в открытом поле на разных стадиях эстрального цикла (M+m)

Приведенные в табл. 2 данные свидетельствуют о том, что характеристики груминга (количество его эпизодов и общая длительность) изменяются параллельно друг другу, общая длительность увеличивается на стадии проэструс, снижается на стадии эструс и достигает наибольшей величины на стадии метэструс. Однако сравнение показателей не выявляет статистически значимых различий (p>0,05).

Результаты регистрации исследовательской деятельности крыс с генотипом А₂/А₂ приведены в табл. 3.

Таблица 3

Показатели исследовательской деятельности крыс с генотипом А₂/А₂ в открытом поле на разных стадиях эстрального цикла (M+m)

Данные табл. 3 показывают, что общее количество вертикальных стоек последовательно по стадиям цикла (проэструс, эструс и метэструс) увеличивается, достигая максимума на стадии метэструс. На стадии метэструс общее количество стоек значимо больше, чем на стадии диэструс (p<0,05). Стойки крысы совершают преимущественно на периферии поля (p<0,05).

Результаты регистрации характеристик груминга у крыс с генотипом А₂/А₂ приведены в табл. 4.

Таблица 4

Количество эпизодов и общая продолжительность груминга у крыс с генотипом А₂/А₂ в открытом поле на разных стадиях эстрального цикла (M+m)

Приведенные в табл. 4 показывают, что изменения в количестве эпизодов груминга не достоверны (p>0,05). Общая длительность груминга значимо снижается на стадии проэструс по сравнению со стадией диэструс (p<0,05), а затем значимо повышается на стадии эструс (p<0,05).

Выводы

Итак, сравнительный анализ показателей исследовательской деятельности крыс с генотипами А₁/А₁ и А₂/А₂ выявил следующие особенности:

1. У крыс с генотипом А₂/А₂ исследовательская деятельность изменяется в динамике ЭЦ - количество вертикальных стоек, максимальное на стадии метэструс значимо снижается на стадии диэструс. У крыс с генотипом А₁/А₁ достоверные различия в количестве стоек на разных стадиях цикла отсутствуют;
2. Характеристики груминга у крыс с генотипом А₁/А₁ в динамике ЭЦ не изменяются. У крыс с генотипом А₂/А₂ длительность груминга значимо снижается на стадии проэструс и увеличивается на стадии эструс.

Выявленные особенности могут быть объяснены различиями механизмов влияния половых стероидов на разные изоформы Д2 рецептора. У крыс с генотипом А₁/А₁ согласно данным молекулярной генетики снижена экспрессия короткой изоформы Д2 рецептора [9], выполняющей функции ауторецептора. Поскольку снижение экспрессии одной из изоформ рецептора сопровождается повышением экспрессии другой [7], есть основание полагать, что у крыс с генотипом А₁/А₁ повышена экспрессия длинной изоформы. Наоборот, у крыс с генотипом А₂/А₂, вероятно, повышена экспрессия короткой изоформы. Основанием для подобного предположения являются результаты авторов [4], изучавших поведение D2L-/- мышей, у которых с помощью генетических технологий (gene-targetingtechnology) было выполнено удаление участка гена, ответственного за экспрессию длинной изоформы рецептора. Авторы показали, что D2L-/- мыши (у которых сохранялась экспрессия только D2S, и она была повышена) демонстрировали пассивную стратегию поведения, которая выявлена и у крыс с генотипом А₂/А₂[2].

У самок крыс с генотипом А₂/А₂ динамика изменений поведенческих реакций на разных стадиях эстрального цикла отлична от крыс с генотипом А₁/А₁. У крыс с генотипом А₁/А₁ исследовательская деятельность повышается только на стадии проэструс (т.е. под влиянием эстрадиола и притом незначимо) и затем находится на одном уровне, не меняясь на других стадиях цикла. У крыс с генотипом А₂/А₂ исследовательская деятельность возрастает до стадии метэструс, на которой изменения достигают значимых величин по сравнению со стадией диэструс. Это указывает на то, что у крыс с генотипом А₂/А₂ большее влияние на изменение поведения оказывает прогестерон, содержание которого в плазме крови достигает пиковых значений на стадии метэструс [6]. Прогестерон повышает содержание катехоламинов в нервной ткани и экспрессию дофаминовых рецепторов [8], активируя на лютеиновой фазе цикла разные формы мотивационного поведения, включая пищевое, антиконфликтное, исследовательское и половое, снижает уровень тревожности.

Выявленные в работе особенности поведения крыс, гомозиготных по разным аллелям локуса Taq 1A DRD₂, могут быть детерминированы в периоде половой дифференциации мозга, в котором происходят сложные взаимовлияния половых стероидов и катехоламинов. Исследованиями последних лет уточнены механизмы вовлечения дофамина в процессы половой дифференциации мозга. Показано, что дофамин в периоде половой дифференциации мозга может регулировать экспрессию рецепторов половых стероидов лиганд-независимым путем [5], внося тем самым изменения в ход половой дифференциации мозга.

Эти данные показывают, что полиморфный локус Taq 1A DRD₂, оказывающий влияние на экспрессию изоформ Д2 рецептора и, следовательно, предопределяющий изменения в дофаминергической трансмиссии, может включаться в процессы половой дифференциации мозга. Генетически детерминированные различия в содержании дофамина у крыс вариантами полиморфного локуса Taq 1A DRD₂ способны предопределить особенности его влияния на экспрессию рецепторов половых стероидов и взаимодействия половых стероидов с изоформами Д2 рецептора.

Работа выполнена при финансовой поддержке базовой части Госзадания Министерства образования и науки РФ, тема 1442.