Предрасположенность к целому ряду болезней генетически детерминирована («плохая наследственность»), а сама детерминированность часто связана с HLA-системой. Для значительной части населения - носителей определенных HLA-специфичностей существует «запрограммированный генетический риск» заболеть той или иной болезнью. Наиболее демонстративна в этом отношении группа ревматоидных заболеваний, которая находится в высокой положительной ассоциации с антигеном HLA-В27; до 90% больных анкилозирующим спондилитом (болезнь Бехтерева), до 80% болезнью Рейтера являются носителем В27 [3].

Несмотря на то что изучение ассоциаций генетических маркеров системы HLA с заболеваниями продолжается уже более 20 лет, интерес к этой проблеме сохраняется. Это обусловлено, по меньшей мере, тремя обстоятельствами. Во-первых, еще далеко не исчерпан круг заболеваний, для которых можно предполагать существование ассоциаций с определенными HLA-антигенами на основании тех или иных теоретических и практических предпосылок. Во-вторых, лишь за немногим исключением остаются неясными механизмы уже найденных ассоциаций. В-третьих, многочисленные наблюдения свидетельствуют о том, что HLA-антигены могут быть ассоциированы не с заболеваниями как нозологической единицей, а лишь с его отдельными клиническими формами [7]. При некоторых заболеваниях найдено, что распределение HLA-антигенов у больных неодинаково в зависимости от сроков развития болезней, тяжести ее течения, наличия осложнений и т.п. [7].

Представления о строении системы HLA развивались и развиваются в течение всего периода ее изучения, однако за последние годы произошел качественный скачок в развитии этой проблемы. Раньше, когда основным объектом исследования могли служить только белки - антигены HLA, представления о комплексе генов HLA могли формироваться в основном на анализе косвенных данных, включающих изучение антигенов HLA в популяциях, в семейном анализе, реакциях, субстратах в которых были антигены HLA, и т.д. Теперь благодаря развитию молекулярной генетики и иммунохимии появилась возможность не только проводить тонкий анализ антигенов HLA, но и изучить сами гены HLA. Особенный прогресс в этом направлении произошел после открытия и внедрения в исследования в области изучения системы HLA метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющего анализировать необходимые для исследований участки ДНК, что в свою очередь открывало широкие возможности для быстрого и точного анализа молекулярного полиморфизма HLA [9].

Заболеваемость детей ЗН злокачественными новообразованиями в развитых странах медленно, но неуклонно растет, составляя 13-15 заболевших на 100 тысяч детского населения. Показатели смертности от злокачественных опухолей занимают 2-е место, уступая первенство смертности от травм и несчастных случаев [1].

В России ежегодно первично выявляется нефробластом около 600, нейробластом - 700, сарком мягких тканей и костей - по 770, ретинобластом и опухолей ЛОР органов - по 110, опухолей головного мозга - 1980, прочих опухолей - 220 [2].

В структуре детской онкологической патологии на долю солидных опухолей приходится до 35-40%. При этом около 2/3 детей и подростков поступают для первичного лечения с местно-распространенными и генерализованными процессами, т.е. в III-IV стадиях заболевания [5]. Это связано с рядом особенностей диагностики солидных опухолей у детей: прежде всего с невозможностью получить точные данные анамнеза заболевания и жалоб от маленького пациента, особенно это актуально для детей до 1 года. Второй причиной поздней диагностики является относительно малое количество визуально обнаруживаемых опухолей, к таковым следует отнести рабдомиосаркому влагалища и мягких тканей. Но даже в этих случаях клинические наблюдения [4] показывают, что при первичном поступлении диагноз установлен лишь в 6,6% случаев, что подтверждено и в других исследованиях [6].

Все это диктует необходимость разработки скринингового обследования детей для более раннего выявления злокачественных образований.

Целью данной работы было определение возможности использования генетического HLA-типирования детей и подростков с солидными злокачественными опухолями для прогнозирования риска развития патологического процесса и формирования на основе его результатов групп риска.

Материалы и методы исследования

Обследовано 74 пациента отделения детской онкологии РНИОИ: 12 пациентов с саркомой Юинга (9 мальчиков, 3 девочки); 11 пациентов с остеогенной саркомой (7 мальчиков, 4 девочки); 14 пациентов с нейробластомой (8 мальчиков, 6 девочек); 14 пациентов с нефробластомой (9 мальчиков, 5 девочек); 23 пациента с герминогенными опухолями (10 мальчиков, 13 девочек). Средний возраст больных составил: с саркомой Юинга - 11,8 года, остеогенной саркомой - 17,1 года, нейробластомой - 4,7 года, нефробластомой - 4,8 года, герминогенными опухолями - 14,2 года. Заболевание начиналось в среднем в возрасте: с саркомой Юинга - 11,6 года, остеогенной саркомой - 16,4 года, нейробластомой - 4,4 года, нефробластомой - 4,2 года, герминогенными опухолями - 10,6 года.

Контрольную группу составили 128 доноров ГУЗ «СПК» РО.

Молекулярное типирование HLA-гена DRB1 проводилось методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с помощью наборов реагентов «НПФ ДНК - Технология» (Москва), позволяющей выявлять 13 групп аллелей HLA-DRB1 (базовое разрешение). Геномная ДНК выделялась из мононуклеарных клеток периферической крови (свежей или замороженной при температуре -20 °С), стабилизированной ЭДТА, с помощью набора реагентов для выделения ДНК «НПФ ДНК - Технология» (Москва). Все этапы амплификации проводились на амплификаторе «ТЕРЦИК» («НПФ ДНК - Технология», Москва). Продукт, полученный в ходе амплификации, определяли методом горизонтального электрофореза в 3%-ном агарозном геле. Специфичность продукта амплификации на всех этапах исследования оценивали в соотношении со стандартным маркером ДНК (PUC - 19).

Статистический анализ результатов включал изучение частоты встречаемости HLA-специфичностей, показателей относительного риска развития заболевания (RR). Для оценки различий в группах сравнения использовали критерий χ2, [8] величина «р», соответствует вычисленному значению χ2.

Результаты исследования

Данные о частоте встречаемости генов HLA II класса (локус DRB I) среди больных детей с солидными злокачественными опухолями и группы популяционного контроля представлены в таблицах 1-5.

Таблица 1 - Сравнительная таблица распределения генов HLA II класса (локус DRB I) у детей с саркомой Юинга

HLA II класса (DRB1)	Здоровые лица (n = 128)	Больные (n = 12)	χ2
01	25,00	25,0	0,04
03	22,65	8,33	0,54
04	18,75	16,67	0,04
07	14,06	8,33	0,03
08	7,81	8,33	0,004
09	6,25	8,33	0,11
10	3,90	-	-
11	17,97	8,33	0,26
12	7,81	-	-
13	29,68	33,33	0,004
14	3,90	16,67	1,56
15	21,88	33,33	0,57
16	10,94	8,33	0,45

В таблице 1 - частота встречаемости антигена (в %).

При анализе результатов типирования с саркомой Юинга (таблица 1) отмечается повышение частоты специфичностей DRB1 14 (в группе составила 16,67%, в контроле - 3,9%), DRB1 15 (33,33 и 21,85% соответственно). Число гомозигот при саркоме Юинга - 2 наблюдения.

Таблица 2 - Сравнительная таблица распределения генов HLA II класса (локус DRB I) у детей с остеогенной саркомой

HLA II класса (DRB1)	Здоровые лица (n = 128)	Больные (n = 11)	χ2
01	25,00	18,18	0,02
03	22,65	45,45	1,75
04	18,75	18,18	0,1
07	14,06	-	-
08	7,81	-	-
09	6,25	27,27	3,6
10	3,90	-	-
11	17,97	9,09	0,09
12	7,81	9,09	0,07
13	29,68	18,18	0,21
14	3,90	-	-
15	21,88	18,18	0,21
16	10,94	-	-

В таблице 2 - частота встречаемости антигена (в %).

У больных с остеогенной саркомой (таблица 2) повышена частота DRB1 03 - 45,45% (контроль - 22,65%) и DRB1 09 - 27,27% (контроль - 6,25%). Число гомозигот при остеогенной саркоме - 5 наблюдений. Достоверного повышения частоты специфичностей DRB1 - гена у больных с саркомой Юинга и остеогенной саркомой не выявлено. В обеих группах отсутствует специфичность DRB1 - 10, вероятнее всего, вследствие небольшого числа пациентов в данных группах.

Таблица 3 - Сравнительная таблица распределения генов HLA II класса (локус DRB I) у детей с нейробластомой

HLA II класса (DRB1)	Здоровые лица (n = 128)	Больные (n = 14)	χ2
01	25,00	28,57	0,001
03	22,65	21,42	0,05
04	18,75	35,71	1,31
07	14,06	14,28	0,05
08	7,81	-	-
09	6,25	14,28	0,32
10	3,90	7,14	0,02
11	17,97	7,14	0,42
12	7,81	14,28	0,45
13	29,68	14,28	0,82
14	3,90	7,14	0,44
15	21,88	7,14	0,9
16	10,94	7,14	0,001

В таблице 3 - частота встречаемости антигена (в %).

При нейробластоме (таблица 3) частота HLA DRB1 04 - 35,71% (контроль - 18,75%), DRB1 09 - 14,28% (контроль - 6,25%), DRB1 12 - 14,28% (контроль - 7,81%), DRB1 14 - 7,14% (контроль - 3,9%). Число гомозигот при нейробластоме - 3 наблюдения.

 

Таблица 4 - Сравнительная таблица распределения генов HLA II класса (локус DRB I) у детей с нефробластомой

HLA II класса (DRB1)	Здоровые лица (n = 128)	Больные (n = 14)	χ2
01	25,00	7,14	1,37
03	22,65	28,57	0,03
04	18,75	35,71	1,31
07	14,06	7,14	0,09
08	7,81	7,14	0,38
09	6,25	-	-
10	3,90	-	-
11	17,97	7,14	0,42
12	7,81	14,28	0,10
13	29,68	57,14	4,45
14	3,90	-	-
15	21,88	7,14	0,90
16	10,94	7,14	0,0003

В таблице 4 - частота встречаемости антигена (в %).

 

При нефробластоме (таблица 4) отмечено повышение частоты DRB1 04 - 35,71% (контроль - 18,75%) и достоверно повышена частота DRB1 13 - 57,14% (χ2 - 4,45, р<0,05). Число гомозигот при нефробластоме - 3 наблюдения.

Таблица 5 - Сравнительная таблица распределения генов HLA II класса (локус DRB I) у детей с герминогенными опухолями

HLA II класса (DRB1)	Здоровые лица (n = 128)	Больные (n = 23)	χ2
01	25,00	10,0	1,01
03	22,65	20,0	0,29
04	18,75	20,0	0,09
07	14,06	10,0	0,57
08	7,81	20,0	0,46
11	17,97	10,0	0,04
12	7,81	10,0	0,01
13	29,68	40,0	0,09
15	21,88	30,0	0,03

В таблице 5 - частота встречаемости антигена в (%).

У больных с герминогенными опухолями (таблица 5) повышена частота DRB1 08 - 20,0% (контроль - 7,8%), DRB1 13 - 40,0% (контроль - 29,68%), DRB1 15 - 30,0% (контроль - 21,88%). Число гомозигот при герминогенных опухолях - 3 случая.

Выводы

1. Проведение молекулярного типирования генов HLA II класса выявило повышение частоты специфичностей: DRB1 14, DRB1 15 при саркоме Юинга, DRB1 03 и DRB1 09 при остеогенной саркоме, DRB1 04, DRB1 09, DRB1 12, DRB1 14 при нейробластоме, DRB1 04 и DRB1 13 при нефробластоме, DRB1 08, DRB1 13, DRB1 15 при герминогенных опухолях. Статистически достоверно по сравнению с контролем повышена только частота DRB1 13 при нефробластоме (χ2 - 4,45, р<0,05).
2. Достоверное увеличение частоты специфичности HLA DRB1 13 при нефробластоме позволяет отнести этих детей в группу риска развития данной патологии.

Рецензент-

Каймакчи О.Ю., д.м.н., ассистент кафедры онкологии Ростовского государственного медицинского университета, г. Ростов-на-Дону.