Введение
В ходе физиологического развития человека значимое место занимает становление функционального состояния системы тромбоцитарного гемостаза [6]. Становится ясно, что нормальное развитие функциональных возможностей организма и морфологического развития органов и систем во многом обуславливается оптимальной функциональной активностью тромбоцитов [2], обуславливающей реологические свойства крови, оптимальный ее приток к тканям, адекватность сердечной деятельности, высокий уровень резистентности к инфекционным заболеваниям и достаточную интенсивность обмена веществ [3].
При этом у здоровых людей, не имеющих вредных привычек и регулярно не тренирующихся, не до конца выяснено состояние перекисного окисления липидов (ПОЛ) тромбоцитов и активность их антиокислительных ферментов, во многом обуславливающих уровень функциональной способности тромбоцитарного гемостаза. Остаются невыясненными у данного контингента лиц особенности агрегационной функции тромбоцитов под влиянием различных индукторов и их сочетаний, имеющихся в реальных условиях кровотока. Также не оценена у них степень морфологической активности тромбоцитов в просвете сосудов. Исходя из этого, была сформулирована цель настоящего исследования: определить активность тромбоцитарных функций у здоровых людей юношеского возраста, не имеющих вредных привычек и регулярно не тренирующихся физически.
Материалы и методы
В группу исследования включены 128 здоровых людей юношеского возраста, не тренирующийся физически (25 человек 18 лет, 27 человек 19 лет, 25 человек 20 лет, 23 человека 21 года и 28 человек в возрасте 22 лет). У обследованных оценивали внутритромбоцитарное ПОЛ по концентрации базального уровня малонового диальдегида (МДА) в реакции восстановления тиобарбитуровой кислотой [4] и по уровню ацилгидроперекисей (АГП) [1]. Производили подсчет количества тромбоцитов в капиллярной крови в камере Горяева. Продукты лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов - активаторов свертывания (Ф3 - тромбоцитов) оценивали по [9] с вычислением индекса тромбоцитарной активности. Агрегация тромбоцитов (АТ) исследовалась визуальным микрометодом по Шитиковой А.С. (1999) [9] с использованием в качестве индукторов АДФ (0,5´10-4 М.), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл.), ристомицина (0,8 мг/мл.) (НПО „Ренам"), адреналина (5´10-6 М., завод Гедеон Рихтер), а также сочетания АДФ и адреналина, АДФ и коллагена, адреналина и коллагена для моделирования реальных условий кровотока. Внутрисосудистая активность тромбоцитов (ВАТ) определялась визуально с использованием фазовоконтрастного микроскопа [10] по Шитиковой А.С. и соавт. (1997). Статистическая обработка полученных результатов проведена с использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты исследования
Все взятые в исследование лица юношеского возраста находились под постоянным наблюдением. Перед каждым исследованием в течение всего периода наблюдения у них определяли основные физиологические параметры, проводили морфологический и биохимический анализы крови. Результаты этих исследований показали, что оцениваемые общие функциональные и биохимические величины (температура, ЧСС, частота дыхания, общие анализы крови и мочи, биохимические исследования крови) у обследуемых во все сроки наблюдения находились в пределах физиологической нормы.
Концентрация первичных продуктов ПОЛ-АГП в тромбоцитах здоровых 18 летних людей, не тренирующихся физически, находилась на уровне 2,02±0,13 Д233/109тр., достоверно не меняясь к 19 годам, увеличиваясь (р<0,05) к 22 годам до 2,24±0,07 Д233/109тр. При этом уровень базального МДА в тромбоцитах - конечного продукта ПОЛ в 18 лет у обследованных составил 0,52±0,12 нмоль/109тр., имея тенденцию к нарастанию к 19 годам жизни и затем нарастая достоверно к 22 годам жизни до 0,69±0,19 нмоль/109тр.
Уровень активности каталазы и СОД в кровяных пластинках, находившихся под наблюдением людей юношеского возраста, не имели достоверной динамики к 19 годам, составляя к этому возрасту 9280,0±200,8 МЕ/109тр. и 1646,0±16,0 МЕ/109тр., соответственно. В последующие сроки наблюдения у обследованных отмечено небольшое, но достоверное ослабление каталазы и СОД (в 20 лет 9100,0±126,0 МЕ/109тр., 1600,0±17,2 МЕ/109тр., 21 год - 9000,0±130,9 МЕ/109тр., 1540,0±11,5 МЕ/109тр., 22 года - 8910,0±166,4 МЕ/109тр., 1500,0±16,6 МЕ/109тр., соответственно).
Показатель ИТА составлял в 18 лет у обследованных 20,9±0,14 %, оставаясь на данном уровне к 19 годам. Это указывало на стабильность в течение данного возрастного периода в кровяных пластинках здоровых людей, не тренирующихся физически, уровня продуктов лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов - активаторов свертывания крови. Оценка ИТА у юношей, не испытывающих физических нагрузок, более старшего возраста показала не выраженное, но достоверное его нарастание - 20 лет 22,2±0,09 %, 21 год - 23,2±0,08 %, достигнув к 22 годам уровня 23,7±0,11 %.
У людей в 18 летнем возрасте время развития АТ под влиянием коллагена составляло 33,9±0,27 с., находясь на таком же уровне и в 19 летнем возрасте. Аналогичная активность АТ у здоровых 18 летних нетренированных людей отмечена под влиянием АДФ (44,6±0,06 с.) и ристомицина (48,9±0,20 с.). В более поздние сроки развивалась тромбиновая и адреналиновая АТ, составляя в 18 лет 56,7±0,14с. и 106,3±0,10 с., соответственно, достоверно не меняясь в течение следующего года жизни. Установлено также отсутствие динамики АТ у не тренирующихся физически людей к 19 годам при сочетанном применении индукторов: для АДФ+адреналин - 36,7±0,14 с., для АДФ+коллаген - 27,8±0,15 с., для адреналин+коллаген - 29,5±0,12 с. При этом уже с 20 лет отмечается достоверное ускорение АТ с изолированными индукторами и их сочетаниями, максимально выраженное в группе обследованных с 22 летнего возраста (табл.).
Таблица. Агрегационная активность тромбоцитов у здоровых юношей, не тренирующихся физически
|
Параметры |
Юноши, не тренирующиеся физически, n=128 M±m |
||||
|
18 лет, n=25 |
19 лет, n=27 |
20 лет, n=25 |
21 год, n=23 |
22 года, n=28 |
|
|
АДФ, с. |
44,6±0,06 |
44,7±0,15
|
44,2±0,12 р<0,05 |
43,6±0,19 р<0,05
|
43,0±0,05 р<0,05
|
|
Коллаген, с. |
33,9±0,27 |
33,8±0,26
|
33,3±0,12 р<0,05
|
32,7±0,17 р<0,05
|
32,0±0,04 р<0,05
|
|
Тромбин, с. |
56,7±0,14 |
55,4±0,19
|
54,8±0,16 р<0,05
|
54,1±0,11 р<0,05
|
53,6±0,16 р<0,05
|
|
Ристомицин, с. |
48,9±0,20 |
48,7±0,06
|
48,0±0,13 р<0,05
|
47,5±0,06 р<0,05
|
47,1±0,15 р<0,05
|
|
Н2О2, с. |
49,4±0,17 |
49,6±0,09
|
49,0±0,19 р<0,05
|
48,5±0,09 р<0,05
|
48,0±0,18 р<0,05
|
|
Адреналин, с. |
106,3±0,10
|
105,6±0,22
|
98,3±0,02 р<0,05
|
97,6±0,11 р<0,05
|
96,8±0,11 р<0,05
|
|
АДФ+адреналин, с. |
36,8±0,15 |
36,7±0,14
|
35,7±0,06 р<0,05
|
35,1±0,13 р<0,05
|
34,6±0,17 р<0,05
|
|
АДФ+коллаген, с. |
27,9±0,17 |
27,8±0,15
|
27,2±0,05 р<0,05
|
26,7±0,14 р<0,05
|
26,2±0,12 р<0,05
|
|
Адреналин+ коллаген, с. |
29,6±0,20 |
29,5±0,12
|
28,9±0,09 р<0,05
|
28,2±0,06 р<0,05
|
27,7±0,05 р<0,05
|
Условные обозначения: р - достоверность различий оцениваемых показателей в различные возрастные периоды.
Уровень дискоцитов в крови у здоровых нетренированных людей в 18 и 19 лет жизни составил 85,6±0,15 %, и 85,4±0,10 %, соответственно. Количество диско-эхиноцитов, сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов также оставалось стабильным в их кровотоке от 18 до 19 лет. Вследствие этого сумма активных форм тромбоцитов также не претерпела достоверных изменений, составляя к 19 годам 14,6±0,12 %. В крови обследованных юношей, не тренирующихся физически, уровни свободно циркулирующих малых и больших агрегатов тромбоцитов не имели достоверной динамики, составляя к 19 годам 3,0±0,11 и 0,07±0,009 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, достигнув к 22 годам 3,6±0,04 и 0,10±0,007 на 100 свободно лежащих тромбоцитов (р<0,05), соответственно. Количество тромбоцитов, вовлеченных в процесс агрегатообразования, у обследованных также не менялось между 18 до 19 годами, составляя к 19 годам 6,1±0,12 %. Однако уже к 20 годам у здоровых нетренированных людей отмечено небольшое достоверное усиление показателей ВАТ, постепенно повышающееся к 22 годам жизни (сумма активных форм 20,0±0,09 %).
Таким образом, у не тренирующихся физически юношей отмечается стабильность тромбоцитарной активности между 18 и 19 годами жизни с последующим ее усилением при условии сохраняющегося отсутствия физических нагрузок.
Обсуждение
Структуры и функции организма, обеспечивающие его местную и общую реактивность, во многом формируются под действием адекватного притока питательных веществ за счет необходимого уровня реологии крови, которая может изменяться в ходе онтогенеза под действием различных факторов среды, к которым, несомненно, относятся наличие или отсутствие регулярных адекватных физических тренировок [7].
Бесспорно, что большую роль в динамике состояния микроциркуляции играет уровень ПОЛ тромбоцитов и активность кровяных пластинок.
У здоровых людей 18 и 19 лет, не тренирующихся физически, отмечается стабильность антиоксидантной активности тромбоцитов и уровня в них ПОЛ, что обуславливает постоянство активности первичного гемостаза. Это во многом способствует стабильно низкой активности кровяных пластинок у юношей, не испытывающих физических нагрузок в этом возрасте.
В ходе исследований у более старших нетренированных молодых людей было выявлено постепенное повышение функциональной активности тромбоцитов. Так, уже у 20 летних людей АТ оказывается достоверно ускоренной, постепенно дополнительно усиливаясь по мере увеличения хронологического возраста. Очевидно, это связано с ростом чувствительности рецепторов тромбоцитов к экзогенным влияниям на тромбоциты, к которым относится и повышение концентрации в крови фактора Виллебранда - кофактора адгезии тромбоцитов с одновременным нарастанием числа специфических рецепторов к нему - (GPI в) на поверхности кровяных пластинок. Рецепторные перестройки на мембранах кровяных пластинок, обусловленные реакцией системы гемостаза на особенности функциональной активности организма в целом, являются следствием сложных приспособительных реакций в организме обследованных и мембранных изменений тромбоцитов, обусловливающих в конечном счете адаптацию тромбоцитарного гемостаза к сложившимся условиям функционирования.
Оценка АТ с целым рядом индукторов и их сочетаний у людей юношеского возраста, не тренирующихся физически, подтвердила усиление агрегативной функции кровяных пластинок. При этом ускорение АТ при связывании, в т.ч. сильных агонистов агрегации - коллагена и тромбина с рецепторами на мембране тромбоцитов может обуславливаться во многом активацией фосфолипазы С, стимулирующей фосфоинозитольный путь через диацилглицерол и протеинкиназу С с фосфолирированием белков сократительной системы. Образующийся при этом инозитолтрифосфат способствует более активному выходу Са2+ из внутритромбоцитарных депо [6]. Усиление этих механизмов обусловливает выраженную интенсификацию сокращения актомиозина. Возможно, что роль в ускорении АТ также играет постепенное усиление активности ферментных систем тромбоцитов, в т.ч. тромбоксанообразования, обуславливающих более раннюю реакцию кровяных пластинок на стимул.
Аналогичные реакции отмечены на слабые агонисты агрегации тромбоцитов - АДФ и адреналин, взаимодействующие с рецепторами их мембраны и вызывающими экспрессию фибриногеновых рецепторов (GPIIв-IIIа), стимулирующими фосфолипазу А2, регулирующую выход из фосфолипидов арахидоновой кислоты с усилением образования тромбоксана А2 [9].
Одновременная оценка АТ с применением нескольких индукторов показала их взаимопотенциирующее действие, подтвердив закономерности, выявленные при исследовании АТ с изолированными агонистами.
Отмеченное увеличение ВАТ у юношей, не тренирующихся физически, после 19 летнего возраста косвенно указывает на повышение в крови физиологического уровня индукторов агрегации (тромбина, АДФ, адреналина) с ростом базального уровня чувствительности к ним тромбоцитов [10]. При этом у здоровых людей, не тренирующихся физически, уже с 20 лет в кровотоке начинает развиваться достоверное снижение количества интактных дискоидной формы тромбоцитов, что указывает на рост активности их рецепторов. Повышение уровня диско-эхиноцитов и других активных форм тромбоцитов совпадает с ростом гемостатической активности тромбоцитов, связано в первую очередь с экспрессией на их мембране фибриногеновых рецепторов (GP IIв - IIIа). Вероятно, формирующееся усиление тромбоцитарной активности способно «наложиться» на возрастное ее повышение во втором зрелом возрасте [5,8], что значимо увеличивает риск тромбозов в популяции.
Таким образом, по мере взросления у юношей, не тренирующихся физически, повышается активность тромбоцитов, что увеличивает содержание их активных форм в кровяном русле и неизбежно приводит к росту количества циркулирующих агрегатов различных размеров. В последующем это во многом обуславливает повышение тромбогенной готовности в более зрелом возрасте на фоне нарастания средовых воздействий на организм.
Рецензенты:
Смахтин М.Ю., д.б.н., профессор, профессор кафедры биохимии Курского государственного медицинского университета, г. Курск.
Фурман Ю.В., д.б.н., профессор, зав. кафедрой истории, теории и технологии социальной работы Курского института социального образования (филиал) РГСУ, г. Курск.