Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,931

INFLUENCE OF MILDRONATA AND ACIZOLA ON BASIC PROCESSES OF UROPOIESIS AND EXCRETION OF ELECTROLYTES IN SYRIAN GOLDEN HAMSTERS WITH EXPERIMENTAL MODEL OF AMYLOID NEPHROPATHY

Kisieva Z.A. 1 Brin V.B. 1 Kozyrev K.M. 1
1 SEE HPE NOSMA of RF Ministry of Social Development
Установлено, что одновременное интрагастральное введение ацизола и подкожное введение милдроната опытным животным с имеющейся амилоидной нефропатией, воспроизведенной однократным введением нативной овечьей плазмы с полным адъювантом Фрейнда, способствует восстановлению диуреза за счет повышения скорости клубочковой фильтрации, несмотря на увеличение процессов канальцевой реабсорбции воды относительно показателей группы животных с моделью амилоидоза. Экспериментальная терапия способствовала повышению натрийуреза, снижению калий- и кальцийуреза, а также резкому уменьшению протеинурии. Таким образом, результаты проведенного эксперимента позволяют сделать вывод, что одномоментное введение смеси ацизола и милдроната способствует нормализации процессов мочеобразования и морфологических характеристик нефрона в виде снижения количества амилоида в клубочках и в базальных мембранах канальцев.
It was determined that simultaneous intragastral injection of acizol and subcutaneous injection of mildronate to experimental animals with existing amyloid nephropathy, caused by a single dose introduction of a native sheep plasma with a complete adjuvant of Freund, contribute to the restoration of diuresis caused by the increase of glomerular filtration rate, despite the increase of a tubular water reabsorption processes concerning the findings of animal with amyloidosis model. An experimental therapy contributed to the increase of natriuresis, decrease of potassium and potassium uresis and to the sharp decrease of proteinuria. Thus, the results of the experiment carried allow us to make a conclusion that simaltaneus injection of an acizol and mildronate mixture contribute to normal processes of a urine formation and morphological characteristics of a nephron during decrease of amyloid amount in glomerula and in basal membranes tubules.
proteinuria
renal functions
mildronat
acizol
amyloidosis

Введение. Заболеваемость амилоидозом составляет 8 случаев на миллион населения в год (Comenzo R.L., 2007). Чаще всего поражаются сердце и почки, однако у многих пациентов выявляются нарушения функций двух и более органов, так как в большинстве своем амилоидоз носит системный характер поражения органов мишеней, и без лечения большинство пациентов погибают в течение года.

Известны несколько способов лечения этой патологии, таких как метод аутологичной трансплантации, применяемый в гематологии, использование которого в свою очередь ограничено плохим соматическим статусом большинства пациентов, и даже при соблюдении правил отбора больных для проведения вышепредложенного метода, смертность достигает 20% (Sanchorawala et.al., 2004). Использование таких препаратов, как талидомид, леналидомид и бортезолиб, в лечении амилоидоза не привело к значительному улучшению результатов терапии (Dispenzieri et. al., 2003, 2007; Sanchorawala et. al., 2007; Wechalekar et al., 2008). Это объясняется в первую очередь их высокой токсичностью, а снижение дозы вело к снижению эффективности. Известны также исследования с применением мелаксена [2; 3], минеральной воды и янтарной кислоты [1; 4].

Таким образом, несмотря на многообразие применяемых препаратов и методов, используемых для лечения амилоидоза, разработка наиболее эффективных и экономически выгодных методов лечения все еще остается одной из актуальнейших задач в медицине.

Цель исследования

Изучение влияния одномоментного введения смеси милдроната и ацизола на морфо-функциональные показатели почек у сирийских золотистых хомяков с моделью экспериментальной амилоидной нефропатии.

Материалы и методы исследования

Работа проводилась на золотистых сирийских хомяках массой 100-120 г. Для опыта были выбраны половозрелые самцы c экспериментальным амилоидозом.

Сравнительный анализ исследованных показателей был проведен в 2 группах животных:

  • животные с экспериментальной амилоидной нефропатией,
  • животные с моделью экспериментальной амилоидной нефропатии, подвергнутые введению ацизола внутрижелудочно в дозе 30 мг/кг вместе с введением милдроната подкожно из расчета 10%-5 мг/кг массы тела животного.

Животные в течение эксперимента находились на стандартном пищевом рационе и имели свободный доступ к воде и пище в течение суток. Световой режим - естественный.

Модель амилоидоза воспроизводилась однократным введением нативной овечьей плазмы и полного адъюванта Фрейнда из расчета 0,2 мл в 5 точек инъекций. Ацизол внутрижелудочно и милдронат подкожно вводили через 2 месяца создания амилоидоза. По истечении 30 и 60 дней экспериментальной терапии исследовались функциональные и морфологические характеристики почек. Для изучения функций почек в условиях спонтанного диуреза животные на 30 и 60-й день эксперимента помещались в обменные клетки, где в течение 6 часов у них собиралась моча. Определялись:

  • объем диуреза;
  • скорость клубочковой фильтрации по клиренсу эндогенного креатинина, и рассчитывалась канальцевая реабсорбция воды;
  • содержание калия и натрия, методом пламенной фотометрии, с помощью пламенного фотометра ФПА-2;
  • концентрация кальция на спектрометре СФ-26, с использованием набора «Кальций» ООО «Агат-Мед» (г. Москва, Россия).
  • концентрация общего белка определялась спектрофотометрически (СФ-26), с помощью реактива Фоллина.

Показатели электролито- и водовыделительной функций почек. Таблица 1.

 

Стат. показатель

Диурез,

мл/час/ 100

СКФ,

м/час

100

Реаб-

Сорбция,

%

Ек

ENa

ЕСа

Фз Ca, мкмоль

/час/ 100

Фз Na, мкмоль

/час/ 100

Фз K,

мкмоль /час/ 100

R Ca

R Na

Белок,

мг/мл

Фон

М ± m

0,15

 

±0,005

21,02

 

±0,739

99,30

 

±0,024

6,37

 

±0,194

11,18

 

±0,585

0,49

 

±0,053

32,10

 

±1,251

2705,32

 

±99,12

91,19

 

±4,24

99,49

 

±0,140

99,58

 

±0,018

0,88

 

±0,02

Амилоидная

М ± m

0,11

 

± 0,004

11,66

 

± 1,400

99,05

 

± 0,030

7,33

 

± 0,324

5,85

 

± 0,417

0,73

 

± 0,078

14,15

 

± 0,841

1548,73

 

± 62,89

65,62

 

± 4,02

94,84

 

± 0,477

99,62

 

± 0,030

3,20

 

± 0,07

 

 

р

*)

*)

*)

*)

*)

*)

*)

*)

*)

*)

 

*)

30 дней лечения милдронат и ацизолом

М ± m

0,14

 

± 0,006

24,28

 

± 1,323

99,42

 

± 0,011

9,74

 

± 0,550

8,43

 

± 0,639

0,83

 

±0,094

39,83

 

± 2,119

3142,60

 

±173,211

122,55

 

± 7,404

97,93

 

±0,230

99,73

 

± 0,230

2,62

 

± 0,107

 

р

 

*) ; **)

*) ; **)

*) ; **)

*) ; **)

*) ; **)

 

*) ; **)

*) ; **)

*) ; **)

 

*) ; **)

60 дней лечения милдронат и ацизолом

М ± m

0,18

 

± 0,007

33,27

 

± 1,701

99,47

 

± 0,012

7,01

 

±0,471

15,51

 

± 0,773

0,48

 

±0,058

70,30

 

± 4,146

4147,53

 

±197,404

123,55

 

± 3,320

99,30

.

±0,091

99,62

 

 

± 0,011

1,61

 

 

± 0,071

 

р

*) ; **)

*) ; **)

*) ; **)

 

*) ; **)

 

*);**)

*) ; **)

*) ; **)

 

 

*) ; **)

*) р ≤0,05 достоверное увеличение относительно фона;

**) р ≤0,05 достоверное увеличение относительно амилоидных животных.

Концентрация электролитов в крови. Таблица 2.

 

Стат.

показатель

Концентрация Ca в плазме крови

Концентрация Na в плазме крови

Концентрация K в плазме крови

Фон

М ± m

2,29 ± 0,019

135,45 ± 0,450

4,55 ± 0,121

Амилоидная группа

М ± m

1,87 ± 0,080

139,76 ± 1,109

5,88 ± 0,161

р

*)

*)

*)

30 дней лечения

М ± m

2,55 ± 0,105

136,22 ± 1,516

5,32 ± 0,159

р

*) ; **)

 

*) ; **)

60 дней лечения

М ± m

3,26 ± 0,116

131,51 ± 1,587

5,95 ± 0,124

р

*) ; **)

 

*) ; **)

По истечении времени эксперимента (60 дней) животных забивали с использованием тиопентала натрия с целью исследования гистологического строения тканей. Для морфологических исследований образцы тканей почек фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине, после чего подвергали заливке в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 7-8 микрон. Срезы окрашивались гематоксилином, эозином, конго красным. Изучение срезов проводилось в проходящем свете при помощи микроскопа Микмед-1 под увеличением 80x200x800 (рис. 1, 2).

Рис. 1. Морфологические изменения в почках, через 60 дней после однократного введения равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы с полным адъювантом Фрейнда. Окраска конго красным, увеличение 80х200х400.

Конгофилия сосудистых клубочков (а) и базальных мембран канальцев (б).

Рис. 2. Влияние смеси милдронат и ацизола на морфологические изменения при амилоидозе почек на фоне однократного введения почек равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы с полным адъювантом Фрейнда. Окраска конго красным, увеличение 80х200х400. Снижение количества конгофильного белка в сосудистых клубочках (а) и базальных мембранах канальцев (б).

Результаты и их обсуждение. Анализ результатов исследования у золотистых сирийских хомяков с экспериментальным амилоидозом почек, моделированным однократным введением равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы и полного адъюванта Фрейнда, с последующим внутрижелудочным введеним ацизола и подкожным введением милдроната, показал достоверное корригирующее действие препаратов на показатели процессов мочеобразования, водо- и электровыделительную функцию почек. Так, у животных с моделью экспериментального амилоидоза относительно интактных животных отмечались: снижение объема диуреза, обусловленное уменьшением скорости клубочковой фильтрации, несмотря на снижение величины канальцевой реабсорбции; выраженная протеинурия; а также достоверное повышение калий- и кальцийуреза, что было обусловлено снижением реабсорбции этих катионов, несмотря на уменьшение их фильтрационного заряда. Отмечено значительное снижение экскреции натрия, и нарастание протеинурии, более чем в 2 раза. Как указано ранее, вышеперечисленные показатели свидетельствуют о развитии нефропатического типа экспериментального амилоидоза у животных. В качестве корригирующих средств нами были выбраны милдронат 10%-5мг/кг массы тела животного, вводимый подкожно, и ацизол 30 мг/кг массы животного, вводимый интрагастрально.

При этом на 30-й день введения вышеуказанных препаратов имело место увеличение объема диуреза относительно показателя амилоидных животных, обусловленное ускорением клубочковой фильтрации с одновременным повышением величины канальцевой реабсорбции, повышением кальций- и калийуреза, значительным нарастанием экскреции натрия, а также наблюдалось значительное снижение потери белка. В конце второго месяца, наблюдалось более выраженное восстановление объема диуреза, обусловленное повышением скорости клубочковой фильтрации более чем в 2,5 раза, несмотря на нарастание величины канальцевой реабсорбции. Снижение потерь белка было почти в 2 раза относительно показателя амилоидных животных. Имело место также достоверное повышение натрийуреза, снижение калий- и кальцийуреза, что было обусловлено снижением реабсорбции этих катионов, несмотря на уменьшение фильтрационного заряда калия, и увеличением фильтрационного заряда натрия и кальция. Перечисленные показатели приближались к показателям интактных животных. Таким образом, полученные данные свидетельствуют об эффективном корригирующем влиянии смеси милдроната и ацизола на показатели основных процессов мочеобразования и экскрецию электролитов у животных с имеющейся моделью амилоидной нефропатии.

При гистологическом исследовании почек животных группы № 2 была выявлена активная регенерация капилляров и эндотелия клубочков почек. Количество амилоида в клубочках и в базальных мембранах канальцев было существенно меньше.

В миокарде под влиянием милдроната и ацизола выявлены положительные гистоструктурные характеристики в виде уменьшения отложения амилоида в кардиомиоцитах, стенках кровеносных и лимфатических сосудов микроциркуляторного русла. Выявлено снижение дисциркуляторных процессов в виде уменьшения гиперемии, плазматического пропитывания, отека пространств межуточного вещества.

В печени - уменьшение конгофилии стенок центральных вен печеночных долек, уменьшение очагов паренхиматозной и жировой дистрофии гепатоцитов. Частичное восстановление органоспецифической цитоархитектоники в форме пролиферации гепатоцитов с крупными гиперхроматическими ядрами. Имеются участки активного формирования характерных печеночных балок с регенерацией внутридольковых печеночных протоков.

Таким образом, результаты проведенного эксперимента позволяют сделать вывод, что введение 10%-ного милдроната в дозе 5 мг/кг массы тела животного внутрижелудочно и ацизола из расчета 30 мг/кг подкожно, при амилоидозе, сформировавшемся спустя 2 месяца от момента однократного введения равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы и полного адъюванта Фрейнда из расчета 0,2 мл в 5 точек инъекций, является эффективным способом коррекции гистоструктурных и функциональных показателей почек.

Рецензенты:

Джиоев И.Г., д.м.н., профессор, заведующий Центральной научно-исследовательской лабораторией ГБОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Владикавказ.

Каде А.Х., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой общей и клинической патофизиологии Кубанского государственного медицинского университета, лауреат премии Правительства Российской Федерации, г. Краснодар.