В последнее время диагностике и лечению вирусных офтальмологических патологий как у нас в стране, так и за рубежом уделяется большое внимание. По данным статистики Министерства здравоохранения и социального развития РФ, болезнями глаз и глазного аппарата страдают около 4,7 млн человек в России [1]. На долю вирусных конъюнктивитов приходится около трети от всех офтальмологических патологий, при этом по результатам проведенного маркетингового анализа установлено, что одними из наиболее эффективных противомикробных и репаративных на российском рынке являются цианокобаламин и ципрофлоксацин [2].

Одним из проявлений глазной инфекции является полиморбидное течение, в ходе которого из-за первичной вирусной инфекции, сопровождающейся образованием фолликулов, происходит вторичное бактериальное или грибковое обсеменение слизистых оболочек, что требует включения в состав глазных капель репаративного и антиоксидантного агента. В качестве оптимального репаративного агента нами был выбран цианокобаламин, обладающий выраженной активностью и стимулирующий синтез пуриновых нуклеозидов, к которым относится ацикловир. Другим проявлением вторичных глазных инфекций является грибковое поражение поврежденной слизистой оболочки глаза, что обусловливает необходимость введение антибактериального агента, в роли которого, согласно проведенным микробиологическим исследованиям, выбран ципрофлоксацин.

Однако разработка современного комплексного препарата для лечения конъюнктивитов не может быть осуществлена без разработки современного метода анализа. В ходе изучения научной и патентной литературы данных было установлено, что основным методом анализа ацикловира в различных лекарственных формах в общемировой практике является высокоэффективная жидкостная хроматография.

ВЭЖХ, интенсивно развиваясь несколько последних десятилетий, зарекомендовала себя в качестве одного из самых универсальных методов разделения и фармакопейного анализа субстанций и лекарственных средств.

Рассматривая методы анализа ципрофлоксацина в современной литературе, было установлено, что во всех мировых фармакопеях используется метод ВЭЖХ. Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1. Сравнительная характеристика методов анализа ципрофлоксацина методом ВЭЖХ в различных фармакопеях мира

Фармакопеи, страна	Условия хроматографирования
	Подвижная фаза	Колонка	Скорость потока, объем пробы	Детектор, длина волны,	Количество примесей	Время хромато-графирования	Число теорети-ческих тарелок
ГФ XII[3]	Данные отсутствуют
БФ(белорусская фармакопея)[4]	ацетонитрил Р - раствор 2,45 г/л кислоты фосфорной Р, доведенный до рН 3,0 триэтиламином Р, (13:87, об/об)	0,25 м с внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем окта- децилсилильным с размером частиц 5 мкм;	1,5 мл/мин, 50 мкл	УФ, 278 нм	Общая сумма примесей не более 0,5%,	2х кратное время удерживания ципрофлоксацина	Не указано
BP (британская фармакопея 2013)[5]	Смесь из 13 объемов ацентонитрила и 87 объемов 2,45 г/л раствора фосфорнй кислоты до рН 3,0 с триэтиламином	Колонка 25 см *4,6 мм октадецильного силикагеля для хроматографии 5 мкм, температура колонки 40 градусов	1,5 мл/мин, 50 мкл.	УФ 278 нм	Не более 0,5% сумма примесей	Двойное время удерживания ципрофлоксацина	Не указано
USP 36 (американская фармакопея)[6]	Подвижная фаза ацетонитрил и 0,025 М фосфорная кислота, доведение триэтиламином до рН 3,0+- 0,1 (13:87(	4,6 мм*25 см, частицы L1,температура колонки 30 градусов цельсия	1,5 мл/мин 10 мкл	УФ, 278 ни	Не более 1,5%	Время удерживания 6,4-10,8 мин	Не менее 2500
EPh (европейская фармакопея)[7]	13 объемов ацетонитрила и 87 объемов 2,45 г/л раствором фосфорной кислоты, рН 3,0 с триэтиламином	Колонка длиной 25 см *4,6 мм, с октадецильным силикагелем для хроматографии 5 мкм, температура 40 градусов цельсия	1,5 мл/мин, 50 мкл	УФ 278 нм	Не более 0,5%	Двойное время удерживания ципрофлоксацина	Не указано

Как видно из таблицы 1, требования к анализу ципрофлоксацина в ведущих фармакопеях в целом одинаковы. В ГФ XII не приводится информация об анализе ципрофлоксацина методом ВЭЖХ. Только USP 36 в качестве одного из показателей пригодности хроматографической системы выдвигает «количество теоретических тарелок», характеризующее качество используемой колонки. Также несколько изменяется в USP 36 температура колонки до 30 градусов Цельсия, по сравнению с остальными фармакопеями, а также четко регламентируется временной интервал выхода пика ципрофлоксацина.

Для анализа репаративного агента, в роли которого был выбран цианокобаламин, используется в основных мировых фармакопеях как метод ВЭЖХ, сравнительный анализ которого представлен в таблице 2, так и титриметрический метод, а также ТСХ.

Таблица 2. Сравнительная характеристика методов анализа цианокобаламина методом ВЭЖХ в различных фармакопеях мира

Фармакопеи, страна	Условия хроматографирования
	Подвижная фаза	Колонка	Скорость потока, объем пробы		Детектор, длина волны,	Количество примесей	Время хромато-графирования	Число теоретических тарелок
ГФ XII	Данные отсутствуют
БФ(белорусская фармакопея)	смесь из 26,5 объемов метанола Р и 73,5 объемов раствора 10 г/ динатрия гидрофосфата Р, доведенного до рН 3,5 кислотой фосфорной Р (раствор годен в течение 2 дней);	0,25 м и внутренним диаметром 4 мм, заполненная силикагелем октилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;		0,8 мл/мин, 30 мкл	УФ, 361 нм.	Сумма примесей не более 3%	3х-кратное время удерживания цианокобаламина	Не указано
BP (британская фармакопея 2013)	Мобильная фаза из 26,5 объемов метанола и 73,5 объемов 10 г/л раствора калия гидрофосфата до рН 3,5 с фосфорной кислотой (срок годности двое суток)	Колонка 25 см * 4 мм с октадециольным силикагелем для хроматографии 5 мкм.		0,8 мл/мин,20 мкл	УФ, 361 нм	Сумма примесей не более 3%	тройное время удерживания цианокобаламина	Не указано
EPh (европейская фармакопея 2010)	26 объемов метанола и 75,5 объема натрия гидрофосфата до рН 3,5 с фосфорной кислотой (раствор годен 2 дня)	Колонка длиной 25 см , ширина 4 мм, стационарная фаса октадецильный силикагеля для хроматографиии 5 мкм	0,8 мл/мин, 20 мкл		361 нм, УФ	Сумма примесей не более 3%	3х-кратное время удерживания цианокобаламина	Не указано

Как видно из таблицы 2, в ведущих международных фармакопеях требования к анализу цианокобаламина идентичны, однако европейская фармакопея 2010 г. регламентируется несколько различное содержания объема метанола и натрия гидрофосфата в составе подвижной фазы, а британская фармакопея 2013 г. регламентирует включение в состав подвижной фазы калия гидрофосфата. Однако рН растворов в трех рассмотренных методиках остается неизменным. Также ни в одной из рассмотренных фармакопей не приводится количество теоретических тарелок для пика цианокобаламина.

Таким образом, можно сделать вывод, что в настоящее время ведущим методом исследования, который описан во многих фармакопеях мира, является ВЭЖХ. Для разработки метода количественного определения ципрофлоксацина и цианокобаламина является актуальной проблема создания чувствительного и высокоточного метода анализа.

Рецензент:

Степанова Э.Ф., д.ф.н., профессор кафедры «Технологии лекарств» Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск;

Голивец Т.П., д.м.н., профессор, заведующая кафедрой терапии ФПМО МИ НИУ «БелГУ», г. Белгород.