Рак молочной железы является одной из наиболее распространенных нозологических форм в структуре онкологических заболеваний у женщин во всем мире и в России. Интенсивному изучению подвергается молекулярный этиопатогенез злокачественных опухолей молочной железы. Уже установлено, что различного рода наследственные мутации, поддерживающие целостность генома (BRCA1, BRCA2, PTEN, TP53, CHEK2, MLH1, MSH2, LKB1/STK11, CDH1), вносят существенный вклад в развитие данного заболевания [1].
Разработка новых подходов в диагностике и лечении предраковых состояний связана с высокой актуальностью проблемы заболеваемости молочной железы.
Появление новых инструментальных методов обследования женского населения позволяют не только диагностировать, но и правильно интерпретировать полученные результаты. Наследственный рак молочной железы (РМЖ) является самой частой разновидностью семейных опухолевых заболеваний. Его вклад в общую встречаемость РМЖ составляет примерно 5-10% [3]. Большой резонанс в обществе и среди исследователей-онкологов вызвало открытие в 1994г. гена BRCA1 (от Breast cancer - рак молочной железы), который является в случае мутаций причиной около половины всех случаев наследственного РМЖ [8]. Годом позже был открыт второй ген (BRCA2), который также ассоциирован с наследственной предрасположенностью к раку молочной железы [7,9]. У женщин с мутациями в данных генах РМЖ развивается в 70-80% случаев, с мутацией в гене BRCA2 повышается риск развития рака яичников (РЯ) [4]. В настоящее время приоритетом современной медицины является ранняя преддиктивная диагностика заболеваний. От возможности выявить болезнь на начальном этапе зависит степень успешности лечения. В связи с этим весьма актуальна разработка и введение в медицинскую практику эффективных методов прогнозирования и ранней диагностики с применением молекулярно-генетических технологий. Данные технологии позволяют выявить мутации в генах, контролирующих клеточных цикл и репарацию повреждений ДНК, повышающих риск возникновения исследуемой патологии. В мире интенсивно изучается спектр мутаций в генах семейства BRCA. Этот спектр весьма специфичен в разных популяциях. С помощью ДНК-диагностики и знания спектра и частоты мутаций, характерных для страны или региона, можно выявлять группы риска людей с повышенной предрасположенностью к онкопатологиям. В России проводились исследования по изучению спектра мутаций гена BRCA1 и BRCA2 у больных с семейными формами заболевания Московской и Ленинградской областей, также исследованы популяции населения Башкирии и Читинской области [2,5]. Лидирующее положение по частоте встречаемости занимает мутация 5382insC. Полученные результаты имеют существенное значение для практической ДНК-диагностики наследственной предрасположенности к раку молочной железы и яичников в России, главным образом, у женщин русского этнического происхождения, башкир и бурят. Литературных данных о проведении аналогичных работ по Северному Кавказу не имеется.
Целью настоящего исследования является проведение индивидуального генотипирования здоровых и больных женщин в Кабардино-Балкарской Республике для определения групп риска с повышенной предрасположенностью развития наследственной формы рака молочной железы.
Материалы и методы
Материалом для исследования служили образцы ДНК здоровых и больных раком молочной железы женщин Кабардино-Балкарии. Образцы венозной крови были собраны на базе ГБУЗ «Онкологический диспансер» МЗ КБР и ФГОУ ВПО «Кабардино-Балкарский Государственный университет им. Х.М. Бербекова», начиная с 2009 года. Данные представлены по материалам ГБУЗ «ОД» КБР и основаны на анализе результатов комплексного обследования и лечения 150 больных раком молочной железы в возрасте от 25 до 78 лет. Во всех случаях диагноз рака молочной железы был верифицирован морфологически. По настоящее время продолжается работа по пополнению банка ДНК из числа больных РМЖ и здоровых лиц. С информированного согласия о цели исследований производился забор крови. Методом анкетирования получены популяционно-генетические данные обследованных здоровых (контрольная группа) и больных РМЖ пациенток.
Выделение ДНК из цельной крови осуществляли при помощи набора реагентов «QIAamp DNA Blood Mini Kit» (фирмы «Qiagen», Германия). Аллель-специфичную ПЦР-реакцию проводили с использованием набора реагентов для ПЦР для выявления мутаций 5382insC и 4154delA, 185delAG гена BRCA1 и 6174delT гена BRCA2 (фирма «Изоген», Россия; фирма «Литех», Россия). ПЦР-фрагменты разделяли в 2% агарозном геле.
Результаты и обсуждения
Поскольку существует специфичность в распределении мутаций и полиморфных вариантов разных генов у разных народов, в генетических исследованиях различных заболеваний следует учитывать этническое происхождение группы больных и контроля. В ходе исследования уточнялись данные об этнической принадлежности пациенток путем опроса и выяснения национальной принадлежности родителей до третьего поколения. В контрольной, и опытной группе можно выделить три доминирующие нации, проживающие на территории республики: кабардинцы, балкарцы и русские.
По возрастному составу контрольная и опытная группа несколько отличались. В контрольной группе возраст женщин колеблется от 20 до 69 лет (средний возраст 31,3 лет) (рис.1).
Рис.1. Возрастной состав контрольной группы
В группе больных РМЖ - от 25 до 78 лет (средний возраст 52 года) (рис.2).
Рис. 2. Возрастной состав обследованных больных РМЖ
При распределении больных по возрасту возникновения и развития РМЖ, пик манифестации заболевания отмечается в возрасте от 50 до 59 лет, что составило 40% от всей выборки больных.
Случаи онкопатологий в семьях у исследуемых лиц
При сборе и обработке клинического материала особое внимание уделялось выявлению случаев заболевания раком, в частности раком молочной железы, в семьях исследуемой выборки. Среди больных было отмечено наличие случаев различных онкопатологий в анамнезе у представителей разной степени родства (табл. 1).
Таблица 1
Процентное соотношение формы рака молочной железы и другой онкопатологии
в исследуемой выборке больных
|
Степень родства |
Случаи различных онкопатологий (%) |
Случаи семейного РМЖ (%) |
|
I степень родства |
13 |
6 |
|
II степень родства |
6 |
2 |
|
III степень родства |
2 |
1 |
|
Всего |
21 |
9 |
Распределение больных раком молочной железы по характеру менструально-овариальной функции
В результате множества научных исследований отмечено повышение риска возникновения и развития рака молочной железы в раннем возрасте менархе, поздней менопаузе, что риск развития данной патологии связан с нарушением гормональной функции яичников, надпочечников, щитовидной железы, гипофиза, гипоталамической системы [6]. Среди исследуемой группы пациенток с РМЖ средний возраст менархе 13,6 лет. Распределение больных по состоянию репродуктивной функции отражено в таблице 2.
Таблица 2
Распределение больных раком молочной железы по характеру
менструально-овариальной функции
|
Характер менструально-овариальной функции |
Число больных |
|
|
абс. |
% |
|
|
Менструации сохранены |
82 |
54,6 |
|
Менопауза |
68 |
45,4 |
|
Всего |
150 |
100 |
У 90% пациенток имеются дети, из них 86% кормили ребенка грудью. При проведении анкетирования нами было выявлено, что 98% из исследуемой опытной группы не курит, не принимает гормональные контрацептивы, у 82% работа не связана с вредным воздействием производства, и только у 18% работа ранее была связана с химическими реактивами и изотопами. Неоднократное раннее прерывание беременности выявлено у 80% женщин в опытной группе.
Среди контрольной группы средний возраст менархе 12,8 лет. У 61% имеются дети, из них 97% кормили ребенка грудью. Распределение женщин контрольной группы по состоянию репродуктивной сферы показан в таблице 3.
Таблица 3
Распределение контрольной группы по характеру
менструально-овариальной функции
|
Характер менструально-овариальной функции |
Число исследуемых |
|
|
абс. |
% |
|
|
Менструации сохранены |
107 |
71,3 |
|
Менопауза |
43 |
28,7 |
|
Всего |
150 |
100 |
Выявляется клинической особенностью рака молочной железы у больных, проживающих на территории Кабардино-Балкарии, в зависимости между возрастом возникновения заболевания и состоянием репродуктивной функции организма женщины.
Исследуется наличие мутаций 5382insC, 185delAG, 4154delA гена BRCA1 и 6174delТ гена BRCA2. У больных раком молочной железы выявлена высокая частота носительства (4%) мутации 5382insC гена BRCA1. Обнаружен более ранний возраст манифестации заболевания у носителей данной мутации. Обнаружены случаи носительства мутации 6174delТ гена BRCA2 (2,7%).
Заключение
Наличие мажорной мутации в гене BRCA1 (5382insC) позволяет проводить скрининговые исследования в группах повышенного риска и у женщин с неотягощенным семейным анамнезом с целью своевременной первичной профилактики возникновения и развития данной патологии.
Продолжается работа по генотипированию контрольной и опытной групп с целью выявления носительства других мутаций.
Сопоставление частот аллелей перечисленных генов предрасположенности к наследственной форме РМЖ в группах больных и здоровых женщин позволит выявить генетические причины роста онкозаболеваемости, а также определить группы повышенного риска.
Рецензенты:
Кетенчиев Х.А., д.б.н., профессор Кабардино-Балкарского Государственного университета им. Х.М. Бербекова, г. Нальчик.
Арсанукаев Д.Л., д.б.н., профессор Чеченского Государственного университета, г. Грозный.