Преэклампсия - осложнение беременности, в основе которого лежат расстройства общего кровообращения с развитием полиорганной недостаточности. Гестоз является мультифакториальным осложнением беременности. По данным последних лет, генетическая компонента, влияющая на развитие гестоза, может составлять до 50% всех факторов риска. Достижения генетики, молекулярной биологии позволяют сегодня с принципиально новых позиций оценивать причины осложнений беременности. Преэклампсия не является самостоятельным заболеванием, это синдром, обусловленный невозможностью адаптационных систем матери обеспечить потребности растущего плода, что проявляется перфузионно-диффузионной недостаточностью плаценты, выраженной в различной степени. На современном этапе развития науки становится очевидным, что ПЭ является мультифакторным заболеванием, в генезе которого важная роль принадлежит также и генетическому компоненту наравне с другими неблагоприятными факторами, провоцирующими гестоз [4]. Изучение генетической предрасположенности и определение генотипов ≪риска≫ позволит заблаговременно выявить пациенток с повышенным риском развития ПЭ, что делает возможным проведение профилактических мер по предупреждению развития тяжелых форм гестоза [1, 2].
Цель исследования - провести анализ роли комбинаций генетических вариантов ферментов фолатного цикла в формировании преэклампсии.
Материалы и методы
Клинико-лабораторное обследование женщин (основной 315 беременных с диагнозом преэклампсия) и контрольной группы (179 женщин с нормальным течением беременности) проводилось на сроке родоразрешения на базе Перинатального центра Белгородской областной клинической больницы им. Святителя Иоасафа. В настоящее исследование вошли лица русской национальности, не имеющие между собой родства, являющиеся уроженками Центрально-Черноземного региона России. Средний возраст женщин с ПЭ составил 27,19±6,4 лет (варьировал от 18 до 44 лет).
В контрольную группу вошли беременные без диагноза преэклампсия в возрасте от 19 до 41 года (средний возраст женщин составил - 26,71±6,36 лет) (р>0,05). Таким образом, контрольная группа беременных не отличалась от основной группы по полу, месту рождения, возрасту и национальности.
Материалом для исследования послужила венозная кровь, полученная в объеме 8-9 мл из локтевой вены пробанда. Забор венозной крови производили в пробирки с консервантом, содержащим 0,5М раствор ЭДТА (рН=8.0). Выделение геномной ДНК из периферической крови проведено методом фенольно-хлороформной экстракции. Анализ локусов MTHFR +677C>T, MTHFR +1298A>С, TYMS -1053C>T, TYMS IVS6-68C>T, TYMS -1122А>G, SHMT1 +1420C>T, MTR+1166А>G, MTRR +66А>G генов фолатного обмена осуществлялся с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).
В результате проведенного комплексного анализа носительства сочетаний аллелей и генотипов исследуемых локусов генов фолатного обмена выявлены различия между фактором развития ПЭ (p=0,003, pperm=0,04, OR=0,53, 95%CI 0,34-0,83) (таблица).
Таблица
Распространенность сочетаний некоторых аллелей/генотипов генов фолатного цикла у беременных с преэклампсией и в контрольной группе
|
Полиморфизмы |
Сочетание (аллели/ генотипы) |
Контрольная группа (n=179) |
Беременные с ПЭ (n=322) |
Р (Pperm) |
OR (95% CI) |
||
|
n/N |
% |
n/N |
% |
||||
|
SHMT1 +1420C>T, MTHFR+1298A>C, TYMS -1053C>T |
SHMT1 +1420C, MTHFR +1298A, TYMS -1053C |
121/159 |
76,10 |
163/267 |
61,05 |
0,0009 (0,009) |
0,49 (0,32-0,76) |
|
SHMT1+1420 C>T, MTHFR+1298A>C, TYMS IVS6-68C>T
|
SHMT1+1420C, MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C |
116/153 |
75,82 |
154/250 |
61,60 |
0,002 (0,01) |
0,51 (0,33-0,80) |
|
MTHFR+1298A>C, MTHFR +677C>T |
MTHFR +1298СC, MTHFR +677T |
2/169 |
1,18 |
20/278 |
7,19 |
0,002 (0,02) |
6,47 (1,49-28,05) |
|
SHMT1+1420 C>T, MTHFR+1298A>C, MTR +2756A>G |
SHMT1+1420C, MTHFR +1298A, MTR +2756A |
118/154 |
76,62 |
167/263 |
63,50 |
0,003 (0,04) |
0,53 (0,34-0,83) |
|
MTHFR+1298A>C, TYMS IVS6-68C>T, TYMS -1122A>G, MTR +2756A>G |
MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C, TYMS -1122A, MTR +2756A |
118/145 |
81,38 |
165/241 |
68,46 |
0,003 (0,04) |
0,50 (0,30-0,82) |
|
MTHFR+1298A>C, TYMS IVS6-68C>T, MTR +2756 A>G |
MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C, MTR +2756A |
122/149 |
81,88 |
176/253 |
69,56 |
0,004 (0,04) |
0,50 (0,31-0,83) |
|
SHMT1+1420C>T, MTHFR +1298A>C |
SHMT1+1420C, MTHFR +1298A |
130/164 |
79,27 |
186/276 |
67,39 |
0,005 (0,04) |
0,54 (0,34-0,85) |
Распространенность сочетаний некоторых аллелей/генотипов генов фолатного цикла у MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C, TYMS -1122A, MTR +2756A среди беременных с преэклампсией встречается в 68,46% тогда как в контроле этот показатель равен 81,38% (p=0,003, pperm=0,04, OR=0,50, 95%CI 0,30-0,82). Распространенность сочетания аллелей MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C, MTR +2756A в группе беременных с физиологическим течением гестации составляет 69,56% по сравнению с 81,88% у беременных с ПЭ (p=0,004, pperm=0,04, OR=0,50, 95%CI 0,31-0,83). Комбинация аллелей SHMT1+1420C, MTHFR +1298A среди пациенток с преэклампсией составила 67,39%, тогда как в контрольной группе этот показатель равен 79,27% (p=0,005, pperm=0,04, OR=0,54, 95%CI 0,34-0,85).
Исследование особенностей генетической "конституции" беременных с преэклампсией различной степени тяжести выявило следующее. У беременных с преэклампсией 1-ой степени тяжести в сравнении с беременными без преэклампсии отмечается снижение частот генотипов MTHFR +1298АС (23,58% и 41,52%, соответственно, χ2= 9,48; OR=0,44; 95%CI 0,25-0,75; p=0,003; pbonf=0,009); MTR +2756АG (15,32% и 37,95%, соответственно, χ2= 16,82; OR=0,30; 95%CI 0,16-0,55; p=0,01; pbonf=0,03); TYMS -1053СТ (23,33% и 42,77%, соответственно, χ2=10,96; OR=0,41; 95%CI 0,23-0,71; р=0,001; pbonf=0,003). Наоборот, среди беременных с преэклампсией 1-ой степени тяжести в сравнении с контрольной группой зарегистрирована наибольшая распространенность генетических вариантов MTR +2756А (85,89% и 78,61%, соответственно, χ2= 4,55; OR=1,66; 95%CI 1,04-2,64; p=0,03); MTR +2756АА (78,23% и 59,64%, соответственно, χ2= 10,36; OR=2,43; 95%CI 1,39-4,27; p=0,002, pbonf=0,006); MTRR +66G (54,33% и 43,86%, соответственно, χ2=5,27; OR=1,52; 95%CI 1,06-2,19; р=0,02); TYMS -1053С (80,83% и 72,83%, соответственно, χ2=4,56; OR=1,57; 95%CI 1,04-2,39; р=0,03); TYMS -1053CС (69,17% и 51,45%, соответственно, χ2=8,46; OR=2,12; 95%CI 1,26-3,56; р=0,004, pbonf=0,012); TYMS -1122А (89,77% и 84,01%, соответственно, χ2=3,77; OR=1,67; 95%CI 0,01-2,81; р=0,05). Выявленные различия в частотах полиморфизмов MTHFR +1298АА (57,72% и 45,03%, соответственно, χ2= 4,12; OR=1,67; 95%CI 1,02-2,74; p=0,04; pbonf=0,12); TYMS -1122АА (81,82% и 70,35%, соответственно, χ2=4,69; OR=1,90; 95%CI 1,06-3,42; р=0,03; pbonf=0,09); TYMS -1122AG (15,91% и 27,33%, соответственно, χ2=4,97; OR=0,50; 95%CI 0,27-0,93; р=0,03; pbonf=0,09); MTHFR +677СТ (33,06% и 45,76%, соответственно, χ2=4,30; OR=0,59; 95%CI 0,35-0,97; р=0,04; pbonf=0,12) между беременными с ПЭ 1-ой степени и женщинами контрольной группы при введении поправки Бонферрони были статистически не достоверными.
У беременных с преэклампсией 2-ой степени тяжести установлена более высокая распространенность аллеля MTRR +66G (56,38%) и генотипа MTRR +66GG (38,30%), чем среди беременных с физиологическим течением гестации (43,86%, χ2=7,13, р=0,008, OR=4,66, 95%CI 0,14-2,41 и 19,88%, χ2=9,66, р=0,003, pbonf=0,009, OR=2,50, 95%CI 1,38-4,55, соответственно).
Отличительной особенностью беременных с преэклампсией 3-ей степени тяжести является наибольшая частота в сравнении с контрольной группой аллеля MTRR +66G (58,49% и 43,86%, χ2=6,37, p=0,01, OR=1,80, 95%CI 1,13-2,87).
Следует отметить, что с увеличением степени тяжести ПЭ концентрация генетического варианта MTRR +66G возрастает с 43,86% у беременных контрольной группы, 54,33% у беременных с ПЭ 1-ой степени тяжести, 56,38% у индивидуумов с преэклампсией 2-ей степени тяжести и 58,49% у беременных с преэклампсией 3-ей степени тяжести.
Установлена ассоциация сочетания генотипа MTR +2756GG и аллеля MTHFR +1298С с формированием преэклампсии 1-ой степени тяжести. У 4,14% беременных с ПЭ встречается это сочетание, тогда как в контрольной группе данный показатель являлся 0% (p=0,01, pperm=0,04, ОR=8,49, 95% CI 1,69-42,7). Аналогично, более высокая распространенность среди беременных с ПЭ 1-ой степени тяжести по сравнению с контролем зарегистрирована и по комбинации TYMS IVS6-68TT и аллеля TYMS -1122A (7,80% и 1,87% соответственно, p=0,01, pperm=0,05, ОR=4,43, 95% CI 1,21-16,21). Сочетание генетических маркеров MTRR +66AA, MTR +2756AG, которое наблюдалось у 2,76% беременных с ПЭ и у 11,39% контрольной группы, является протективным фактором в отношении риска развития преэклампсии (p=0,003, pperm=0,01, ОR=0,22, 95% CI 0,07-0,67). Комбинация аллелей SHMT1 +1420C, TYMS -1053C, MTR +2756A зарегистрированная у 71,63% беременных с ПЭ 1-ой степени тяжести и у 84,08% беременных контрольной группы также является протективным фактором развития преэклампсии (p=0,007, pperm=0,02, ОR=0,48, 95% CI 0,27-0,84). Частота комбинации аллелей SHMT +1420C и TYMS -1053C среди беременных с преэклампсией 1-ой степени тяжести составила 76,03%, тогда как в контрольной группе этот показатель равнялся 86,83% (p=0,01, pperm=0,04, ОR=0,48, 95% CI 0,27-0,87). Распространенность сочетания аллелей SHMT +1420C, MTR +2756A в группе беременных с ПЭ составляет 78,08%, что меньше, чем у беременных контрольной группы (88,12%, p=0,01, pperm=0,05, ОR=0,48, 95% CI 0,26-0,89). Комбинация аллелей MTHFR +677С, MTR +2756G и генотипа MTRR +66AA среди пациенток с ПЭ равна 3,60%, тогда как в контрольной группе этот показатель составляет 10,90% (p=0,01, pperm=0,05, ОR=0,30, 95% CI 0,11-0,85). Распространенность сочетания аллелей TYMS IVS6-68C, MTR +2756A в группе беременных с ПЭ (85,00%) достоверно меньше по сравнению с беременными контрольной группы (93,51% , p=0,01, pperm=0,05, ОR=0,39, 95% CI 0,18-0,87).
Выявлен ряд протективных комбинаций изучаемых генетических вариантов фолатного цикла, ассоциированных с преэклампсией средней и тяжелой степеней. Установлено, что сочетание аллелей MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C, TYMS -1122A, MTR +2756A среди беременных с ПЭ средней и тяжелой степеней встречается в 64,60%, а у индивидуумов с физиологическим течением гестации этот показатель составляет 81,38% (p=0,002, pperm=0,01, ОR=0,42, 95% CI 0,24-0,74). Распространенность сочетания полиморфных вариантов SHMT +1420C, MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C, TYMS -1122A в группе пациенток с ПЭ 2-3 степеней тяжести составляет 58,41%, тогда как у беременных контрольной группы - 75,00% (p=0,003, pperm=0,02, ОR=0,47, 95% CI 0,28-0,79). Аналогичной направленности различия в распространенности выявлены и для сочетания генетических вариантов SHMT +1420C, MTHFR +1298A, TYMS -1053С, которое встречается у 60,94% индивидуумов с прэклампсией средней и тяжелой степеней и 76,10% беременных контрольной группы (p=0,004, pperm=0,02, ОR=0,49, 95% CI 0,29-0,81). Комбинация аллелей SHMT +1420C, MTHFR +1298A, MTR +2756A среди беременных с ПЭ 2-3 степеней тяжести наблюдается в 61,29%, тогда как у пациенток с физиологическим течением гестации - 76,62% (p=0,004, pperm=0,02, ОR=0,48, 95% CI 0,29-0,81). Распространенность сочетания аллелей SHMT +1420C, MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C в группе беременных с ПЭ средней и тяжелой степени составляет 69,17%, что ниже по сравнению с беременными контрольной группы (75,82%, p=0,004, pperm=0,02, ОR=0,48, 95% CI 0,28-0,81). Комбинация генетических вариантов MTHFR +1298A, MTRR +66A, MTR +2756A среди беременных с ПЭ 2-3 степеней тяжести составляет 44,09%, что достоверно ниже по сравнению с пациентками контрольной группы (60,53%, p=0,004, pperm=0,02, ОR=0,51, 95% CI 0,32-0,83). Сочетание аллелей MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C, MTR +2756A среди индивидуумов, беременность которых осложнилась преэклампсией средней и тяжелой степеней, встречается в 67,23%, тогда как, у лиц контрольной группы это сочетание наблюдается у 81,88% (p=0,004, pperm=0,02, ОR=0,45, 95% CI 0,26-0,80). Выявлено, что комбинация генетических вариантов MTHFR +1298A, MTR +2756A среди пациенток с ПЭ 2-3 степеней тяжестей составляет 72,52%, а в группе беременных без ПЭ этот показатель равен 85,00% (p=0,007, pperm=0,03, ОR=0,46, 95% CI 0,26-0,83). Сочетание аллелей MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C, TYMS -1122A, зарегистрированное у лиц с преэклампсией средней и тяжелой степеней тяжести в 69,75%, в контрольной группе женщин встречается у 83,12% (p=0,007, pperm=0,04, ОR=0,47, 95% CI 0,26-0,83). Установлено, что комбинация аллельных вариантов MTHFR +1298A, MTRR +66A, TYMS -1122A, TYMS -1053С среди пациенток, беременность которых осложнилась развитием ПЭ средней и тяжелой степеней наблюдается достоверно реже (41,46%) по сравнению с женщинами с физиологическим течением беременности (56,58%, p=0,009, pperm=0,04, ОR=0,54, 95% CI 0,33-0,88). Распространенность сочетания генотипов SHMT +1420C, +1298A в группе беременных с ПЭ 2-3 степеней тяжести составляет 66,41%, тогда как, у беременных контрольной группы - 79,27% (p=0,009, pperm=0,04, ОR=0,52, 95% CI 0,31-0,87). Кроме того, протективным фактором развития преэклапсии средней и тяжелой степени является комбинация аллелей MTHFR +1298A, MTHFR +677T, MTRR +66G (p=0,01, pperm=0,05, ОR=0,55, 95% CI 0,34-0,89).
Следует отметить, что сочетание аллелей SHMT +1420C, MTHFR +1298A, TYMS IVS6-68C, а также комбинация генетических вариантов SHMT +1420C, MTHFR +1298A, TYMS -1053C встречается значительно реже как среди беременных с ПЭ 1-ой степени тяжести (OR=0,49 и 0,53, соответственно), так и среди беременных с ПЭ 2-3-ей степени тяжести (OR=0,49 и 0,48, соответственно) по сравнению с контрольной группой и поэтому эти сочетания полиморфных вариантов не могут являться специфическими как для ПЭ 1-ой степени тяжести, так и для ПЭ 2-3-степеней тяжести.
Выводы
Таким образом, в результате проведенного исследования установлено, что комбинация генетических вариантов ферментов фолатного цикла TYMS IVS6-68TT (OR=3,65) и MTHFR +1298CC и MTHFR+677T (OR=6,47) повышают риск развития преэклампсии. Протективное значение установлено для шести различных комбинаций шести генетических вариантов ферментов фолатного цикла MTHFR +1298A, SHMT1 +1420C, MTR +2756A, TYMS -1053C, TYMS IVS6-68C, TYMS -1122A (OR=0,49-0,54).
С развитием ПЭ 1-ой степени тяжести ассоциированы генетические варианты MTR +2756A (OR=1,66), MTR +2756AА (OR=2,43), MTRR +66G (OR=1,52), TYMS -1053C (OR=1,57), TYMS -1053CC (OR=2,12), TYMS -1122A (OR=1,67), MTR +2756AG (OR=0,30), MTHFR +1298AС (OR=0,44), TYMS -1053CT (OR=0,41) и восемь комбинаций генетических полиморфизмов MTHFR +1298A>С, MTRR +66A>G, MTR +2756A>G, SHMT1 +1420C>T, TYMS -1053C>T, TYMS IVS6-68C>T, TYMS -1122A>G. Причем две комбинации генетических вариантов TYMS IVS6-68ТT, TYMS -1122A (OR=4,43) и MTHFR +1298С, MTR +2756GG, (OR=8,49) являются факторами риска развития ПЭ 1-ой степени тяжести , а шесть комбинаций оказывают протективное действие на формирование ПЭ 1-ой степени тяжести. Подверженность к развитию ПЭ тяжелой степени связана с десятью комбинациями семи из восьми изученных полиморфных маркеров (MTHFR +1298A>С, MTRR +66A>G, MTR +2756A>G, TYMS -1053C>T, TYMS -1122A>G, TYMS IVS6-68ТT, SHMT1 +1420C>T). Все эти комбинации имеют протективную направленность при развитии ПЭ 2-3-ей степеней тяжести.
Рецензенты:
Чурносов М.И., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой медико-биологических дисциплин, медицинский факультет фгаоу впо «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ»), г. Белгород;
Сорокина И.Н., д.м.н., доцент, профессор кафедры медико-биологических дисциплин, медицинский факультет фгаоу впо «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ»), г. Белгород.