Плоды шиповника широко используются как в народной, так и официальной медицине. По содержанию витаминов плоды шиповника делят на низковитаминные и высоковитаминные. Для данного исследования был выбран низковитаминный вид шиповника - шиповник собачий (Rosa Canina), т.к. его химический состав обуславливает желчегонное действие, что подходит для разработки препарата с гепатопротекторной и актопротекторной активностью [7].

Шиповник собачий (Rosa Canina), семейство розоцветные (Rosaceae) содержит витамины B₁, B₂, P и PP, K, каротин (провитамин А) и токоферолы (витамин Е), флавоноиды (кверцетин, изокверцетин, кемпферол, рубиксантин, ликопин и др.), липиды, органические кислоты (яблочная, лимонная, олеиновая, линолевая, линоленовая), дубильные вещества, эфирные масла, углеводы, пектины соли железа, марганца, фосфора, магния и кальция, амино- и фенолкарбоновые кислоты [4]. В качестве лекарственного средства используют плоды, как самостоятельно, так и в составе различных фитопрепаратов. Из шиповника собачьего на предприятиях фармацевтической промышленности изготавливают препарат «Холосас» (сироп 40 г/100 г: 140 г или 300 г в флаконах) [1].

Учитывая характер биологически активных соединений, представленных в плодах шиповника собачьего, в литературе имеются сведения о разнообразных методах экстракции, основная цель которых в максимальном истощении лекарственного сырья и увеличении выхода действующих веществ.

Исследованиями сотрудников ВИЛАР выявлено, что оптимальным температурным режимом экстракции для плодов семейства розоцветных, с учётом наличия термолабильных веществ - аскорбиновой кислоты, является диапазон 50-55 ⁰С при соотношении сырьё : экстрагент не превышающем 1:10 [3].

Актуальным также остается вопрос степени измельчения сырья, подвергаемого экстракции. В исследованиях Алтарева С. Н. использовались измельченные плоды (измельчение сырья производят с усилием, достаточным для разрушения плодов без разрушения их семян, а перед экстракцией отделяют семена шиповника от измельченного цветоложа. В исследованиях Мясникова Д.Н. использованы цельные плоды [2, 6]. Данное обстоятельство объясняется различными подходами к получению целевого продукта: доказано, что измельчение плодов шиповника, наряду с повышением выхода витаминов, увеличивает выход пектинов  и способствует образованию опалесцирующих извлечений [2]. Однако  повышение выхода пектинов и, соответственно, их присутствие в готовом продукте, не влияет существенно на его актопротекторную активность, что доказано исследовательскими работами в отношении суммарных фитокомплексов [5].

Среди многообразия схем экстрагирования биологически активных соединений из плодов шиповника взят за основу метод, предложенный Давыдовой В.Н [3]. Он заключается в экстрагировании плодов шиповника водой в соотношении 1:10 при постоянной температуре 50 ± 5⁰С, методом 3-х кратной мацерации, где время 1-ой экстракции - 2 часа, 2-й - 1,5 часа, 3-ей - 1 час 15 минут. Далее извлечения объединяют, отстаивают в течение 24 часов при температуре 2-8⁰С, фильтруют и направляют на стадию упаривания под вакуумом.

Материалы и методы

Схема, предложенная Давыдовой В.Н., была положена в основу собственных исследований, с внесением в неё модификаций: в том числе - использование не измельчённого сырья и использование такого технологического приема при экстракции, как циркуляция экстрагента.

В ходе отработки процесса экстракции, после 2 часовой экспозиции настаивания сырья при помощи экстрагента - воды очищенной (температура 50-55 ⁰С) в соотношении 1:10, сливали образовавшуюся концентрированную вытяжку объёмом 1/5 от общего объема извлечения, и проводили принудительную циркуляцию оставшегося экстрагента с помощью насоса.

Для начала было определено время, в течение которого должен был циркулировать экстрагент. Для этого проводили экстракцию методом 3-х кратной мацерации с циркуляцией экстрагента в течение различных промежутков времени, как измельчённого, так и цельного сырья. Полученные извлечения оценивали по содержанию аскорбиновой и хлорогеновой кислот, кверцетина и рутина разработанным в лаборатории биологически активных соединений методом градиентной ВЭЖХ. Полученные результаты приведены в таблице 1.

Затем было опробовано 4 варианта экстрагирования, из которых необходимо было выбрать наиболее эффективный. Первый - проводили в соответствии с методикой, предложенной Давыдовой В.Н. Второй метод являлся аналогичным, за исключением того, что использовали неизмельчённое сырьё. Третий метод повторял первый, но при этом, во время стадии мацерации, сливали концентрированное извлечение в количестве 1/5 от общего объёма, с последующей циркуляцией оставшегося извлечения. Четвёртый метод был аналогичен третьему, кроме того, что использовали неизмельчённые плоды. Время циркуляции экстрагента, оставшегося в сырье, составляло 30 мин.

Полученные извлечения оценивали по содержанию и хлорогеновой кислот, кверцетина и рутина методом градиентной ВЭЖХ. Результаты исследования по сравнению эффективности трёх методов экстракции представлены в таблице 2.

Обсуждение результатов

Как следует из данных таблицы 1, циркуляция оставшегося на сырье извлечения приводит к увеличению выхода биологически активных соединений на 25 %, а циркуляция в течение 40 минут не приводит к увеличению их выхода в сравнении с циркуляцией в течение 30 мин.

Результаты анализа полученных извлечений (таблица 2), свидетельствуют о том, что метод трёхкратной мацерации из измельчённых плодов шиповника с циркуляцией экстрагента, с точки зрения полноты извлечения действующих веществ, являлся наиболее предпочтительным, т.к. согласно полученным данным, в экстракте, полученном 3-м методом, содержится наибольшее количество биологически активных веществ. Так, например, содержание аскорбиновой кислоты и анализируемых флавоноидов преобладало в извлечении, полученном 3-м методом.

Технологическая схема получения жидкого экстракта из измельчённых плодов шиповника собачьего методом трёхкратной мацерации с циркуляцией экстрагента представлена на рисунке 1.

Рис.1. Технологическая схема получения сухого экстракта шиповника из измельчённого сырья методом 3-кратной мацерации с циркуляцией экстрагента

Таблица 1

Зависимость выхода биологически активных веществ от времени циркуляции экстрагента

Время циркуляции, мин.	Содержание аскорбиновой кислоты, мкг/мл		Содержание хлорогеновой кислоты, мкг/мл		Содержание кверцетина, мкг/мл		Содержание рутина, мкг/мл
	Измельчённые плоды	Неизмельчён-ные плоды	Измельчённые плоды	Неизмельчён-ные плоды	Измельчённые плоды	Неизмельчён-ные плоды	Измельчённые плоды	Неизмельчён-ные плоды
20	42,41±0,02	38,11±0,04	0,08±0,04	0,02±0,04	0,055±0,04	0,036±0,01	0,103±0,02	0,101±0,03
30	53,33±0,04*	50,19±0,03*	0,20±0,04*	0,18±0,01*	0,061±0,02*	0,056±0,01*	0,118±0,02*	0,116±0,02*
40	49,12±0,02*	47,17±0,02*	0,11±0,03*	0,14±0,03*	0,062±0,02*	0,044±0,02*	0,107±0,03*	0,110±0,02*

Примечание. Число наблюдений (n) = 5.

* - Достоверные различия с результатом экстрагирования с 20-минутной циркуляцией экстрагента (Р<0,05).

Таблица 2

Cодержание биологически активных веществ в извлечениях плодов шиповника

Метод экстракции	Содержание аскорбиновой кислоты, мкг/мл	Содержание хлорогеновой кислоты, мкг/мл	Содержание кверцетина, мкг/мл	Содержание рутина, мкг/мл
Метод 1	49,10±0,03	0,143±0,02	0,041±0,02	0,112±0,03
Метод 2	46,54±0,02*	0,134±0,02	0,050±0,02	0,117±0,04
Метод 3	54,92±0,03*	0,201±0,01	0,063±0,03	0,121±0,01
Метод 4	45,64±0,02*	0,161±0,01	0,051±0,04	0,119±0,04

Примечание. Число наблюдений (n) = 5.

* - Достоверные различия с результатом экстрагирования методом 1 (Р<0,05).

Полученные извлечения представляли собой жидкость тёмно-коричневого цвета со специфическим запахом, извлечения из неизмельчённых плодов обладали меньшей опалесценцией.

Выводы

Проанализировав 4 методики экстрагирования действующих веществ из плодов шиповника собачьего, было выявлено, что наиболее эффективным является получение извлечений из измельчённого сырья методом трёхкратной мацерацией с цикруляцией экстрагента, с помощью которого можно добиться увеличения выхода действующих веществ на 25 % по сравнению с применяемой в фармацевтическом производстве методикой.

Рецензенты:

Пятигорская Н.В., д.фарм.н., профессор, зав. учебной частью кафедры промышленной фармации фармацевтического факультета, зам. директора по научной работе НИИ фармации ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова, г. Москва;

Рудакова И.П., д.х.н., главный научный сотрудник лаборатории анализа и технологии НИИ фармации ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова, г. Москва.