В процесс формирования гомеостаза и физиологического развития человека значимое место наряду с генетикой [1, 2] занимает становление функционального состояния системы тромбоцитарного гемостаза [7]. Становится ясно, что нормальное развитие функциональных возможностей организма и морфологического развития органов и систем во многом обусловлено оптимальной функциональной активностью  тромбоцитов [5],  определяющей реологические свойства крови, оптимальный ее приток к тканям, адекватность сердечной деятельности, высокий  уровень резистентности к инфекционным заболеваниям и достаточную интенсивность обмена веществ [6].

При этом у здоровых людей, не имеющих вредных привычек и регулярно не тренирующихся, не до конца выяснены состояние перекисного окисления липидов (ПОЛ) тромбоцитов и активность их антиокислительных ферментов, во многом обусловливающих уровень функциональной способности тромбоцитарного гемостаза.  Остаются невыясненными у данного контингента лиц особенности агрегационной функции тромбоцитов под влиянием различных индукторов и их сочетаний, имеющихся в реальных условиях кровотока. Также не оценена у них степень морфологической активности тромбоцитов в просвете сосудов. Исходя из этого была сформулирована цель настоящего исследования: определить активность тромбоцитарных функций у здоровых молодых людей, не имеющих вредных привычек и регулярно не тренирующихся физически.

Материалы и методы

            В группу исследования включен 141 здоровый молодой человек, не тренирующийся физически (29 человек 18 лет, 26 человек 19 лет, 27 человек 20 лет, 28 человек 21 года и 31 человек в возрасте 22 лет). У обследованных оценивали внутритромбоцитарное ПОЛ по концентрации базального уровня малонового диальдегида (МДА) в реакции восстановления тиобарбитуровой кислотой и по уровню ацилгидроперекисей (АГП). Производили подсчет  количества тромбоцитов в капиллярной крови в камере Горяева.   Продукты лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов - активаторов свертывания (Ф3-тромбоцитов) оценивали по методу Е.Д. Еремина с вычислением индекса тромбоцитарной активности. Агрегация тромбоцитов (АТ) исследовалась визуальным микрометодом [4] с использованием в качестве индукторов АДФ (0,5´10-4 М.), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл.), ристомицина (0,8 мг/мл), адреналина (5´10-6 М), а также сочетания АДФ и адреналина, АДФ и коллагена, адреналина и коллагена для моделирования реальных условий кровотока. Внутрисосудистая активность тромбоцитов (ВАТ) определялась визуально с использованием фазово-контрастного микроскопа [4]. Статистическая обработка полученных результатов проведена с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты исследования

        Все взятые в исследование молодые люди находились под постоянным наблюдением. Перед каждым исследованием в течение всего периода наблюдения у них определяли основные физиологические параметры, проводили морфологический и биохимический анализы крови. Результаты этих исследований показали, что оцениваемые общие функциональные и биохимические величины (температура, ЧСС, частота дыхания, общие анализы крови и мочи, биохимические исследования крови) у обследуемых во все сроки наблюдения  находились в пределах физиологической нормы.

       Концентрация первичных продуктов ПОЛ-АГП в тромбоцитах здоровых 18-летних молодых людей, не тренирующихся физически, находилась на уровне 2,02±0,13 Д233/109тр., достоверно не меняясь к 19 годам, увеличиваясь (р<0,05) к 22 годам до 2,24±0,07 Д233/109тр. При этом уровень базального МДА в тромбоцитах - конечного продукта ПОЛ - в 18 лет у обследованных составил 0,52±0,12 нмоль/109тр., имея тенденцию к нарастанию к 19 годам жизни и затем нарастая достоверно к 22 годам жизни до 0,69±0,19 нмоль/109тр.

       Уровень активности каталазы и СОД в кровяных пластинках находившихся под наблюдением здоровых молодых людей не имели достоверной динамики к 19 годам, составляя к этому возрасту 9280,0±200,8 МЕ/109тр. и  1646,0±16,0 МЕ/109тр. соответственно. В последующие сроки наблюдения у обследованных отмечено небольшое, но достоверное   ослабление  каталазы и СОД (в 20 лет 9100,0±126,0 МЕ/109тр.,  1600,0±17,2 МЕ/109тр., 21 год - 9000,0±130,9 МЕ/109тр., 1540,0±11,5 МЕ/109тр., 22 года - 8910,0±166,4 МЕ/109тр., 1500,0±16,6 МЕ/109тр. соответственно).

        Показатель ИТА составлял в 18 лет у обследованных 20,9±0,14%, оставаясь на данном уровне к 19 годам. Это указывало на стабильность в данном возрастном периоде  в кровяных пластинках здоровых молодых людей, не тренирующихся физически, уровня продуктов лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов - активаторов свертывания крови. Оценка ИТА молодых людей, не испытывающих физических нагрузок, более старшего возраста показала не выраженное, но достоверное его нарастание - 20 лет 22,2±0,09%, 21 год - 23,2±0,08%, достигнув к 22 годам уровня 23,7±0,11%.

          У молодых людей в 18-летнем возрасте время развития АТ под влиянием коллагена составляло 33,9±0,27 с, находясь на таком же уровне и в 19-летнем возрасте. Аналогичная активность АТ у здоровых 18-летних нетренированных молодых людей отмечена под влиянием АДФ (44,6±0,06 с) и ристомицина (48,9±0,20 с). В более поздние сроки развивалась тромбиновая и адреналиновая АТ, составляя в 18 лет 56,7±0,14 с и 106,3±0,10 с соответственно, достоверно не меняясь в течение следующего года жизни. Установлено также отсутствие динамики АТ у не тренирующихся физически молодых людей к 19 годам при сочетанном применении индукторов:  для  АДФ+адреналин - 36,7±0,14 с, для АДФ+коллаген - 27,8±0,15 с.,  для адреналин+коллаген - 29,5±0,12 с. При этом уже с 20 лет отмечается достоверное ускорение АТ с изолированными индукторами и их сочетаниями, максимально выраженное в группе обследованных с 22-летнего возраста (см. таблицу).

Таблица 1

Агрегационная активность тромбоцитов у  здоровых молодых людей,

не тренирующихся физически

Условные обозначения:  р - достоверность различий оцениваемых показателей в различные возрастные периоды.

Таблица 2

Внутрисосудистая активность тромбоцитов у здоровых людей,

не тренирующихся физически

      Уровень дискоцитов в крови у здоровых нетренированных молодых людей в 18 и 19 лет жизни составил  85,6±0,15%, и   85,4±0,10% соответственно. Количество диско-эхиноцитов, сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов также оставалось стабильным в их кровотоке от 18 до 19 лет. Вследствие этого сумма активных форм тромбоцитов также не претерпела достоверных изменений, составляя к 19 годам 14,6±0,12%. В крови обследованных молодых людей, не тренирующихся физически,  уровни свободноциркулирующих малых и больших агрегатов тромбоцитов не имели достоверной динамики, составляя к 19 годам 3,0±0,11 и 0,07±0,009 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, достигнув к 22 годам 3,6±0,04 и 0,10±0,007 на 100 свободно лежащих тромбоцитов (р<0,05) соответственно. Количество тромбоцитов, вовлеченных в процесс агрегатообразования, у обследованных также не менялось между 18 до  19 годами, составляя к 19 годам  6,1±0,12%. Однако уже к 20 годам у здоровых нетренированных молодых людей отмечено небольшое достоверное  усиление показателей ВАТ, постепенно повышающееся к 22 годам жизни (сумма активных форм 20,0±0,09%).

      Таким образом, у не тренирующихся  физически молодых людей отмечается стабильность тромбоцитарной активности между 18 и 19 годами жизни с последующим ее усилением при условии сохраняющегося отсутствия физических нагрузок.

          Обсуждение

         Структуры и функции организма, обеспечивающие его местную и общую реактивность, во многом формируются под действием адекватного притока питательных веществ за счет необходимого уровня реологии крови, которая может изменяться в ходе онтогенеза под действием различных факторов среды, к которым, несомненно, относятся наличие или отсутствие регулярных адекватных физических тренировок [3].

          Бесспорно, что большую роль в динамике состояния микроциркуляции играют уровень ПОЛ тромбоцитов и активность кровяных пластинок.

          У здоровых молодых людей 18 и 19 лет, не тренирующихся физически, отмечается стабильность антиоксидантной активности тромбоцитов и уровня в них ПОЛ,  что обусловливает постоянство активности первичного гемостаза. Это  во многом способствует стабильно низкой  активности кровяных пластинок у молодых людей, не испытывающих физических нагрузок в этом возрасте.

          В ходе исследований у более старших нетренированных молодых людей было выявлено постепенное повышение функциональной активности тромбоцитов. Так, уже у 20-летних молодых людей АТ оказывается достоверно ускоренной, постепенно дополнительно усиливаясь по мере увеличения хронологического возраста. Очевидно, это связано с ростом чувствительности рецепторов тромбоцитов к экзогенным влияниям на тромбоциты, к которым относится и повышение концентрации в крови фактора Виллебранда - кофактора адгезии тромбоцитов с одновременным нарастанием числа рецепторов к нему - (GPI в) на поверхности кровяных пластинок. Рецепторные перестройки на мембранах кровяных пластинок, обусловленные реакцией системы гемостаза на особенности функциональной активности организма в целом, являются следствием сложных приспособительных реакций в организме обследованных и мембранных изменений тромбоцитов, обусловливающих в конечном счете адаптацию тромбоцитарного гемостаза к сложившимся условиям функционирования [8].

            Оценка АТ с целым рядом индукторов и их сочетаний у  молодых людей, не тренирующихся физически, подтвердила усиление агрегативной функции кровяных пластинок. При этом ускорение АТ при связывании (в том числе сильных агонистов агрегации - коллагена и тромбина) с рецепторами на мембране тромбоцитов может обусловливаться во многом активацией фосфолипазы С, стимулирующей фосфоинозитольный путь через диацилглицерол и протеинкиназу С с фосфолирированием белков сократительной системы. Образующийся при этом инозитолтрифосфат способствует более активному выходу Са2+ из внутритромбоцитарных депо. Усиление этих механизмов обусловливает выраженную интенсификацию сокращения актомиозина. Возможно, что роль в ускорении АТ также играет постепенное усиление активности ферментных систем тромбоцитов, в том числе тромбоксанообразования, обусловливающих более раннюю реакцию кровяных пластинок на стимул.

         Аналогичные реакции отмечены на слабые агонисты агрегации тромбоцитов - АДФ и адреналин, взаимодействующие с рецепторами их мембраны и вызывающими экспрессию фибриногеновых рецепторов (GPIIв-IIIа), стимулирующими фосфолипазу А2, регулирующую выход из фосфолипидов арахидоновой кислоты с усилением образования  тромбоксана А2 [10].

         Одновременная оценка АТ с применением нескольких индукторов показала их взаимопотенциирующее действие, подтвердив закономерности, выявленные при исследовании АТ с изолированными агонистами.

         Отмеченное увеличение ВАТ у молодых людей, не тренирующихся физически, после 19-летнего возраста косвенно указывает на повышение в крови физиологического уровня индукторов агрегации (тромбина, АДФ, адреналина) с ростом базального уровня чувствительности к ним тромбоцитов. При этом у здоровых молодых людей, не тренирующихся физически, уже с 20 лет в кровотоке начинает развиваться достоверное снижение количества интактных дискоидной формы тромбоцитов, что указывает на рост активности их рецепторов. Повышение уровня диско-эхиноцитов и других активных форм тромбоцитов совпадает с ростом гемостатической активности тромбоцитов, это связано в первую очередь с экспрессией на их мембране фибриногеновых рецепторов (GP IIв - IIIа) [9].       

         Таким образом, по мере взросления молодых людей, не тренирующихся физически, повышается активность тромбоцитов, увеличивая содержание их активных форм в кровяном русле, неизбежно приводя к повышению числа циркулирующих агрегатов различных размеров, что обусловливает, очевидно, в последующем повышение тромбогенной готовности в более зрелом возрасте в результате нарастания средовых воздействий на организм.

Смахтин М.Ю., д.б.н., профессор, профессор кафедры биохимии Курского государственного медицинского университета, г. Курск;

Громнацкий Н.И., д.м.н., профессор, профессор кафедры терапии № 2 Курского государственного медицинского университета, г. Курск.