Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

Материалы и методы исследования. Исследование выполнено на 130 нелинейных половозрелых морских свинках массой 300±50 г, которых содержали в стандартных условиях вивария, в соответствии с правилами гуманного отношения к животным, методическими рекомендациями по их выведению из опыта и эвтаназии. Морская свинка в отличие от других экспериментальных животных (крысы, мыши) по образу жизни и световосприятию является наиболее адекватным объектом для изучения свет-ассоциированных измененных состояний гомеостаза с экстраполированием на организм человека. Животные случайным образом были распределены на 2 группы. Группа 1 (n=66) - животные, находящиеся в условиях стандартного фиксированного (12 ч свет/12 ч темнота) освещения (СФО), генерируемого светодиодными носителями («Открытые инженерные системы», Россия), цветовая температура 4500 К (белый свет), мощность светового потока 0,03 Вт/м² при длине волны 360 нм, коэффициент пульсации светового потока 1 %, освещенность 400 лк. Группа 2 (n=64) - десинхроноз в условиях светодиодного освещения. Световой десинхроноз создавали искусственно путём содержания лабораторных животных при круглосуточном освещении [1]. Кровь у животных забирали путем пункции левого желудочка сердца на 10 сутки, 20 сутки, 30 сутки эксперимента. Количество лейкоцитов в крови определяли общепринятым меланжерным методом в камере Горяева. Лейкоцитарную формулу подсчитывали в мазках крови, окрашенных по Романовскому - Гимзе, количество клеток выражали в относительных (%) и в абсолютных (•10⁹/л) величинах. Оценку гуморального иммунного ответа проводили по количеству антителообразующих клеток (АОК) в селезенке крыс, иммунизированных аллогенными эритроцитами, в абсолютных величинах и в пересчете на ядросодержащие клетки (ЯСК) селезенки. Реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у крыс, иммунизированных аллогенными эритроцитами, оценивали по выраженности воспалительного отека стопы. Методом иммуноферментного анализа на аппарате «Иммулайт 2000» (США) определяли в сыворотке концентрацию интерлейкина - 4 (ИЛ-4), интерферона-гамма (ИФН-гамма) с помощью специфичных для морских свинок тест-систем «USCN Life Science Inc.» (Китай), концентрацию мелатонина, кортизола - с помощью тест-систем «Сusabio» (Китай). Статистический анализ проведен с использованием пакета прикладных программ Statistica for Windows v.10.0. Проверку статистических гипотез проводили с использованием критериев Краскела - Уоллиса, Манна - Уитни, Вальда - Вольфовитца, наличие связи между показателями исследовали с помощью коэффициента корреляции Спирмена.

Результаты исследования и их обсуждение. При экспериментальном десинхронозе в условиях светодиодного освещения отмечено снижение интенсивности реакции ГЗТ на 20 и 30 сутки эксперимента по сравнению с данными группы стандартного фиксированного светодиодного освещения (табл. 1). Кроме этого, наблюдается уменьшение абсолютного количества АОК в селезенке на 20 и 30 сутки. Снижение количества АОК в селезенке на 20 и 30 сутки сохраняется при пересчете на ядросодержащие клетки селезенки. Данные изменения косвенно указывают на угнетение Th1- и  Th2-зависимого иммунного ответа морских свинок при экспериментальном десинхронозе. При исследовании концентрации в периферической крови ИЛ-4 и ИФН-γ установлено, что у лабораторных животных при десинхронозе значимо при сравнении с группой стандартного фиксированного светодиодного освещения снижается концентрация ИЛ-4 на 20 сутки и  30 сутки эксперимента (табл. 2). Концентрация ИФН-γ снижается на 30 сутки по сравнению с группой контроля.

Установлено, что при десинхронозе в условиях светодиодного освещения концентрация мелатонина в крови снижается во все сроки наблюдения - на 10 сутки, 20 сутки и 30 сутки (табл. 2). Концентрация кортизола в периферической крови повышается на 10 сутки, 20 сутки и 30 сутки.

Итак, при экспериментальном десинхронозе в условиях светодиодного освещения наблюдается угнетение Th1- и Th2-зависимого иммунного ответа, снижение концентрации в периферической крови ИЛ-4 и ИФН-γ, мелатонина, повышение концентрации в периферической крови кортизола.

Механизм депрессии адаптивного иммунитета при десинхронозе является многофакторным. Во-первых, для реализации полноценного иммунного ответа необходимо достаточное количество в периферической крови его эффекторов - лимфоцитов. Нами при экспериментальном десинхронозе установлена лимфоцитопения.  Количество лимфоцитов в периферической крови  значимо снижается на 30 сутки наблюдения (3,46•10⁹/л±0,25•10⁹/л; в контрольной группе 4,09•10⁹/л±0,16•10⁹/л; р<0,05). С использованием корреляционного анализа на 30 сутки эксперимента установлено наличие прямой слабой связи между количеством лимфоцитов в периферической крови и показателями интенсивности реакции ГЗТ (коэффициент корреляции Спирмена R=0,98; p<0,05) и абсолютным количеством АОК в селезенке (R=0,96; p<0,05).

Во-вторых, при экспериментальном десинхронозе зафиксирована дизрегуляция иммунного ответа в связи с уменьшением концентрации в крови ИЛ-4 и ИФН-гамма. Снижение концентрации цитокинов в крови, с одной стороны, может быть связано угнетением их продукции лимфоцитами вследствие уменьшения их количества. С другой стороны, снижение концентрации мелатонина в крови приводит к снижению продукции цитокинов иммунокомпетентными клетками,  т.к. мелатонин, связываясь со специфичными к нему рецепторами на иммунокомпетентных клетках, участвует в регуляции продукции цитокинов [10]. Снижение концентрации в крови ИЛ-4 и ИФН-гамма имеет значение не только в угнетении адаптивного иммунитета, но и в снижении количества лимфоцитов. Снижение концентрации ИФН-γ и ИЛ-4 ассоциировано со снижением концентрации мелатонина, а угнетение Th1- и Th2-зависимого иммунного ответа прогрессирует по мере снижения уровня ИФН-γ и ИЛ-4 соответственно. Нами обнаружена обратная слабая связь между концентрацией мелатонина и концентрацией ИФН-γ в плазме (R=0,42; p<0,05). Зафиксированная при экспериментальном десинхронозе депрессия адаптивного иммунитета ассоциирована с изменением концентрации ИЛ-4 и ИФН-γ. При проведении корреляционного анализа на 30 сутки десинхроноза установлена прямая сильная связь между интенсивностью реакции ГЗТ и концентрацией ИФН-γ (R=0,93; p<0,05), прямая сильная связь между количеством АОК в селезенке и концентрацией ИЛ-4 (R=0,97; p<0,05).

В-третьих, изменения адаптивного иммунитета при десинхронозе обусловлены дефицитом эндогенного мелатонина в условиях функциональной пинеалэктомии. Имеются данные о наличии на лимфоцитах рецепторов к мелатонину, связываясь с которыми, мелатонин оказывает влияние на их функциональную активность [8]. Известно, что сами лимфоциты способны вырабатывать мелатонин, имеющий значение в ауто- и паракринной регуляции функциональной активности клеток. В связи со снижением количества лимфоцитов при десинхронозе, можно предположить, что участие  экстрапинеального мелатонина в регуляции функции лимфоцитов ограничено и вносит вклад в формирование дисфункции лимфоцитов. Нами на 20 и 30 сутки эксперимента установлена прямая средней силы связь между концентрацией мелатонина в крови и показателями интенсивности реакции ГЗТ (на 20 сутки R=0,75; p<0,05; на 30 сутки R=0,95; p<0,05) и абсолютным количеством АОК в селезенке (на 20 сутки R=0,50; p<0,05; на 30 сутки R=0,97; p<0,05).

В-четвертых, если десинхроноз рассматривается как стресс-реакция, то  сопровождающее ее повышение концентрации катехоламинов и кортизола в крови приводит к угнетению пролиферации и дифференцировки клеток лимфоидного ряда в тимусе и в селезенке. Как было указано выше, одним из проявлений экспериментального десинхроноза выступает повышение концентрации кортизола в крови - непременный атрибут стресс-реакции. С использованием корреляционного анализа на 30 сутки эксперимента установлено наличие обратной слабой связи между концентрацией кортизола в периферической крови и показателями интенсивности реакции ГЗТ (R=-0,23; p<0,05) и абсолютным количеством АОК в селезенке (R=-0,26; p<0,05).

Выводы

1. При экспериментальном десинхронозе в условиях светодиодного освещения установлена лимфоцитопения, депрессия Th1- и  Th2-зависимого адаптивного иммунитета, снижение концентрации интерлейкина-4, интерферона-гамма на 20 и 30 сутки наблюдения.

2. Экспериментальный десинхроноз в условиях светодиодного освещения сопровождается снижением концентрации мелатонина и повышением концентрации кортизола в периферической крови на 10, 20 и 30 сутки наблюдения.

3. Угнетение Th1- и  Th2-зависимого адаптивного иммунитета происходит по мере  снижения количества лимфоцитов в периферической крови, снижения концентрации интерлейкина-4, интерферона-гамма, мелатонина в крови и повышения концентрации кортизола в крови.

Таблица 1

Показатели адаптивного иммунитета при экспериментальном десинхронозе в условиях светодиодного освещения (M±m)

Примечание. Здесь и в табл. 2 * - статистически значимые (р<0,05) различия с группой 1.

Таблица 2

Концентрация цитокинов и гормонов в крови при экспериментальном десинхронозе в условиях светодиодного освещения (M±m)

Рецензенты:

Куренков Е.Л., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой анатомии человека ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Челябинск;

Савочкина А.Ю., д.м.н., профессор кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Челябинск.