Трициклический антидепрессант кломипрамин («Anafranil®») по механизму действия относится к группе ингибиторов нейронального захвата моноаминов и является препаратом со сбалансированным действием [4]. Применяется при лечении депрессивных заболеваний различной этиологии взрослых и детей с пяти лет, фобий, каталепсий, обсессивно-компульсивных синдромов, преждевременной эякуляции, энуреза у детей и подростков, хронической боли при наличии органического заболевания или без него. Препарат в сочетании с анальгетиками также применяется в качестве дополнительного средства (коанальгетика) при лечении болей, вызванных злокачественными опухолями, что позволяет повысить порог болевой чувствительности и добиться лучшего обезболивающего действия при той же дозе анальгетиков. Кроме того, препарату присущ дополнительный клинический эффект – антигистаминный, который при отсутствии противопоказаний можно использовать для лечения различных патологических состояний [1, 6, 8].
Нежелательные явления при приеме кломипрамина выражены слабо. Отмечают нарушения: психики (возбуждение, агрессивность, нарушение сна, мании и др.), со стороны нервной системы (головокружение, головная боль, нарушение внимания и памяти и др.), органов слуха и зрения (шум в ушах, нарушение аккомодации, нечеткость зрения и др.), со стороны крови и лимфатической, сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, кожи и подкожный тканей и др. Лечение антидепрессантом требует систематического контроля за формулой крови, во время длительного лечения необходимо каждые 2 недели проводить повторный клинический анализ крови, особенно если у больного во время приема препарата развилась острая инфекция [1, 3, 6].
Несмотря на то что передозировки антидепрессантами редко приводят к смертельным исходам, все же использование их в высоких дозах и немедицинских целях чревато негативными последствиями. Влияние антидепрессантов на организм не всегда одинаково. Побочные явления от их приема могут быть непредсказуемыми, помимо этого необоснованное применение данных препаратов через некоторое время может привести к формированию зависимости от них. Наркозависимые в моменты отказа от наркотиков могут принимать антидепрессанты для борьбы с симптомами депрессии. Таким образом, может происходить бесконтрольное использование этих лекарственных средств. Кроме того, необходимо с осторожность выписывать антидепрессанты пациентам, потенциально склонным к суицидальным действиям. Также описан синдром отмены при резком прекращении лечения после длительной терапии большими дозами трициклических антидепрессантов [6, 7].
В диагностике отравлений большое значение приобретают результаты химического исследования. Наиболее распространенным объектом для анализа на лекарственные и токсические соединения, наиболее простым (среди других) вследствие низкого содержания белковых компонентов является моча. Подготовка биологической жидкости (мочи) к анализу, обычно, включает стадии концентрирования, экстракцию подходящим растворителем, хроматографическое разделение или сорбцию на твердом сорбенте. Для изолирования из биологических сред чаще применяется жидкость – жидкостная экстракция, которая может использоваться для пробоподготовки образцов с целью дальнейшего анализирования методом высокоэффективной жидкостной хроматографии [2].
Кломипрамин преимущественно выводится с мочой в виде водорастворимых конъюгатов, в неизменном виде около 2 % дозы [1]. Биологическая жидкость (моча) пригодна в качестве объекта анализа на кломипрамин. Высокоэффективная жидкостная хроматография на сорбентах с привитой фазой позволяет эффективно разделить и достоверно определить токсикант в биологических средах.
Цель исследования. Разработка методики изолирования кломипрамина из биологической жидкости (мочи).
Материалы и методы. Объекты исследования: рабочий стандартный образец кломипрамина 1 мг/мл (РСО), модельные смеси биологической жидкости (мочи), которые готовили путем прибавления к 9 мл мочи 1 мл РСО кломипрамина. Изолирование вели в диапазоне значений рН от 2 до 12. Для создания необходимого pH раствора использовали универсальные буферные смеси [5]. Контроль pH осуществляли с помощью универсального иономера ЭВ-74. Полученные экстракты анализировали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на приборе «Милихром А-02» по следующим условиям: хроматографическая колонка диаметром 2 мм, длиной 75 мм; неподвижная фаза ProntoSIL-C18; подвижная фаза: ацетонитрил: буферный раствор [4,0 М LiClO4 – 0,1 M HClO4]: H2O = [5:95] (60:40); объем вводимой пробы – 4 мкл; длина волны детектирования – 210 нм; скорость потока элюента – 100 мкл/мин.; температура колонки – 35 °С; режим элюирования – изократический.
Результаты исследований. При выборе оптимальных условий изолирования кломипрамина необходимо учесть влияние нескольких факторов, существенными из которых являются рН раствора и природа экстрагента. В качестве экстрагентов по отношению к кломипрамину были изучены: хлороформ, метиленхлорид, н-гексан, эфир диэтиловый, хлороформ: н-бутанол (9:1). Проводили двухкратную экстракцию растворителем по 5 мл, объединенные экстракты фильтровали через слой натрия сульфата безводного. Сухие остатки, полученные после удаления соответствующего экстрагента, растворяли в 1 мл спирта этилового 95 % и анализировали. Результаты степени экстракции рассчитывали как среднее шести параллельных измерений.
На первом этапе изучали степень извлечения кломипрамина из водных растворов (рисунок 1), далее с учетом результатов, полученных в первом этапе, эксперименты продолжали с модельными смесями биологической жидкости (мочи) для учета влияния биологической матрицы (таблицы 1, 2). Испытания с модельными смесями проводили в интервалах рН, показавшие наилучшие результаты в предварительных опытах.
Рис. 1. Результаты экстракции кломипрамина из водных растворов органическими растворителями (n=6)
Таблица 1
Результаты экстракции кломипрамина из модельных смесей биологической жидкости (мочи) хлороформом, метиленхлоридом, н-гексаном (n=6)
|
рН модельной смеси |
Концентрация кломипрамина (%) и метрологические параметры (n=6, f=5) |
||
|
Хлороформ |
Метиленхлорид |
Н-гексан |
|
|
4 |
Xср= 66,66; S= 1,98; ΔXср=2,08; εср=±3,12% |
- |
- |
|
5 |
Xср= 67,89; S= 1,18; ΔXср=1,23;εср=±1,81% |
- |
- |
|
6 |
Xср= 91,06; S= 1,38; ΔXср=1,46; εср=±1,6% |
Xср= 82,24; S= 1,85; ΔXср=1,95; εср=±2,37% |
Xср= 69,89; S= 1,53; ΔXср=1,62; εср=±2,32% |
|
7 |
Xср= 92,32; S= 1,50; ΔXср=1,57;εср=±1,70% |
Xср= 87,77; S= 1,97; ΔXср=2,07; εср=±2,35% |
Xср= 72,54; S= 1,52; ΔXср=1,59;εср=±2,19% |
|
8 |
Xср= 90,42; S= 1,39; ΔXср=1,47; εср=±1,63% |
Xср= 89,79; S= 3,38; ΔXср=3,54; εср=±3,95% |
Xср= 70,49; S= 1,81; ΔXср=4,65; εср=±6,60% |
|
9 |
Xср= 91,64; S= 1,39; ΔXср=1,47; εср=±1,60% |
Xср= 89,06; S= 2,59; ΔXср=2,72; εср=±3,05% |
Xср= 64,73; S= 1,52; ΔXср=1,59; εср=±2,46% |
|
10 |
Xср= 88,26; S= 1,18; ΔXср=1,23; εср=±1,39% |
Xср= 86,96; S= 2,09; ΔXср=2,19; εср=±2,52% |
Xср= 56,52; S= 1,77; ΔXср=1,85; εср=±3,27% |
|
11 |
Xср= 87,72; S= 1,94; ΔXср=2.03; εср=±2,31% |
- |
- |
Таблица 2
Результаты экстракции кломипрамина из модельных смесей биологической жидкости (мочи) эфиром диэтиловым, смесью хлороформ: н-бутанол (9:1) (n=6)
|
рН модельной смеси |
Концентрация кломипрамина (%) и метрологические параметры (n=6, f=5) |
|
|
Эфир диэтиловый |
Хлороформ: н-бутанол (9:1) |
|
|
7 |
- |
Xср= 69,72; S= 1,81; ΔXср=1,90; εср=±2,72% |
|
8 |
Xср= 60,87; S= 1,22; ΔXср=1,28; εср=±2,10%; |
Xср= 71,70; S= 1,80; ΔXср=1,89; εср=±2,64 % |
|
9 |
Xср= 68,91; S= 1,62; ΔXср=1,70; εср=±2,47%; |
Xср= 80,99; S=2,23; ΔXср=2,34; εср=±2,89 % |
|
10 |
Xср= 73,00; S= 1,4629; ΔXср=1,54; εср=±2,11%; |
Xср= 81,82; S= 2,22; ΔXср=2,33; εср=±2,85 % |
|
11 |
Xср= 72,64; S= 1,02; ΔXср=1,08; εср=±1,49%; |
- |
Выводы:
1. Изучена степень извлечения кломипрамина из водных растворов в зависимости от рН раствора и природы органического растворителя. В результате проведенного эксперимента определено, что вещество из водных растворов максимально извлекается: хлороформом при рН 6-11 (96,75%; 97,78%; 93,45%; 95,75%; 89,58%; 92,36% соответственно), метиленхлоридом при рН 6-10 (91,84%; 95,22%; 96,48%; 96,63%; 95,30% соответственно), н-гексаном при рН 6-10 (74,37%; 78,38%; 68,95%; 70,66%; 54,36% соответственно), диэтиловым эфиром при рН 8-11 (68,44%; 69,36%; 79,77% 78,93%; соответственно), смесью хлороформ: н-бутанол (9:1) при pH 7-10 (86,96%; 83,33%; 92,00%; 89,62% соответственно).
2. Разработана методика изолирования кломипрамина из биологической жидкости (мочи). Наиболее оптимальными органическими растворителями для экстракции кломипрамина являются хлороформ и метиленхлорид, выход аналита при использовании предложенных растворителей в интервале рН от 7 до 9 достигает в среднем 89-92 %.
Рецензенты:Малкова Т.Л., д.фарм.н., заведующая кафедрой токсикологической химии ГБОУ ВПО ПГФА Минздрава России, г. Пермь;
Коркодинова Л.М., д.фарм.н., профессор, заведующая кафедрой фармацевтической химии ФОО, ГБОУ ВПО ПГФА Минздрава России, г. Пермь.