Сахарный диабет – распространенное заболевание [3]. Многие аспекты фармакотерапии этого сложного в патогенетическом отношении заболевания находятся на стадии разрешения. Ведущий синдром при сахарном диабете – хроническая гипергликемия, приводящая к нарушению обменов веществ, развитию сосудистых осложнений на фоне окислительного стресса [3,9]. Нарушения обмена глюкозы в условиях дефицита инсулина и инсулинорезистентности тканей, а также ишемия и гипоксия, характерные для сахарного диабета, являются факторами, способствующими повышенному образованию свободных радикалов и их метаболитов [1]. Антиоксидантная система организма, включающая множество компонентов, позволяет достаточно успешно противостоять бесконтрольному увеличению свободных радикалов. Как показывает клинический опыт и результаты исследований, применение антиоксидантов позволяет нормализовать процессы перекисного окисления липидов и блокировать цитотоксическое действие последних. Существует   четко выраженная взаимосвязь между показателями перекисного окисления липидов и системой гомеостаза, нарушения в которых способствуют развитию ангиопатий [1]. Расстройства микроциркуляции на фоне микро- и макроангиопатии, снижение местного иммунитета у больных с сахарным диабетом приводят к развитию тяжелых осложнений, таких как диабетическая стопа, нарушения репаративных процессов при повреждениях кожного покрова и слизистых [3]. Поэтому фармакотерапия раневого процесса у больных сахарным диабетом требует не только коррекции уровня сахара в крови, но и активного местного воздействия на раневой дефект с целью улучшения условий для заживления раны. Ранее проведенные исследования экстракта Пятилистника кустарникового позволили выявить значительную насыщенность данного растения биологически активными веществами, и прежде всего, флавоноидами, дубильными веществами, полисахаридами, витаминами, углеводами, аминокислотами, сапонинами тритерпеноидной группы и другими соединениями [5]. Наличие в составе экстракта указанных биологически активных веществ, являющихся природными антиоксидантами, а также сведения народной медицины об успешном применении побегов Пятилистника кустарникового при ранах [5] послужили основанием для разработки мягкой готовой формы из Пятилистника кустарникового для местного применения при лечении ран.

Цель исследования: оценить влияние линимента из экстракта побегов Пятилистника кустарникового, изготовленного на аппарате NanoDeBee30, на перекисное окисление липидов (ПОЛ) при раневом процессе у крыс с экспериментальным сахарным диабетом.

Методы исследования: эксперименты проводили на белых крысах-самцах линии Wistar с исходной массой 200-250 г., в соответствии с требованиями приказа №267 МЗ РФ от 19.06.2003 г. Протокол исследования одобрен комиссией по этике при институте общей и экспериментальной биологии СО РАН (заключение за №17 от 09.07.15 г.). Животные находились в стандартных условиях содержания и кормления в виварии (Приказ МЗ №1179 от 10.10.1983 г.). Опыты на животных осуществлялись в соответствии с «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей». Экспериментальный сахарный диабет вызывали однократным введением аллоксана, внутрибрюшинно, в дозе 100 мг/кг [5], а через 2 суток воспроизводилось повреждение кожи путем нанесения плоскостных ран размерами 2,0 х 2,0 см. На раны животных первой опытной группы 1 раз в сутки на протяжении 14 суток накладывались 100 мг 5 % линимента из побегов Пятилистника кустарникового, изготовленного на аппарате NanoDeBee 30. Во второй опытной группе использовали в указанной дозе и схеме препарат сравнения – линимент бальзамический (по Вишневскому), а в контрольной группе обработку ран производили глицерин-ланолиновой (2:3) мазью. На 7, 14 и 21 сутки эксперимента у крыс определяли концентрацию ТБК-активных продуктов в сыворотке крови [7,4] для оценки интенсивности процессов перекисного окисления липидов, а содержание в сыворотке крови восстановленного глутатиона и активности каталазы – для определения состояния антиоксидантного статуса [2]. В грануляционно-фибринозной ткани определяли содержание нуклеиновых кислот по Шмидту и Тангаузеру в модификации М.Р. Трудолюбовой [5]. Значимость различий по указанным параметрам между опытными и контрольной группами животных оценивали с помощью непараметрического U-критерия Манна – Уитни, различия считали значимыми при Р<0,05 [6].

Результаты и их обсуждение

Результаты исследований показали, что ежедневное нанесение на плоскостную рану линимента, изготовленного на аппарате NanoDeBee30, у крыс с сахарным диабетом позволяет снизить интенсивность ПОЛ и повысить показатели антиоксидантного статуса.  

Таблица 1

Влияние линимента из побегов Пятилистника кустарникового и линимента бальзамического на состояние свободнорадикальных процессов при раневом повреждении кожи у крыс с сахарным диабетом

Данные, представленные в таблице 1, демонстрируют, что на фоне применения линимента Пятилистника кустарникового уровень ТБК-активных продуктов на 7 сутки снижается на 39,93 % и составляет 9,08 мкмоль/л; на 14 сутки до 7,83 мкмоль/л, а на 21 сутки – на 36,34 %. Параллельно отмечается повышение показателей антиоксидантного статуса. Так активность каталазы в сыворотке крови крыс возрастает на фоне применения указанного средства. Уровни прироста указанного фермента составили – 11,71 % и 58,83 %. Содержание восстановленного глутатиона повысилось на 86,78 % на 14 сутки, а 21 сутки – на 215,44. Избыточное образование продуктов перекисного окисления липидов, характерное в первую фазу раневого процесса, на фоне применения линимента Пятилистника кустарникового эффективно сдерживается благодаря влиянию биологически активных веществ, в частности флавоноидов и других соединений, содержащихся в действующем веществе используемого средства, со значимым повышением активности каталазы и уровня восстановленного глутатиона. Эффекты препарата сравнения – линимента бальзамического были менее выражены, на порядок меньше. С этими данными согласуются и показатели антиоксидантного статуса в данной группе крыс: активность каталазы в сыворотке нарастает медленными темпами, содержание восстановленного глутатиона на фоне применения линимента по Вишневскому мало изменялось в наших опытах. Очевидно, что высокореактивные соединения, являющиеся продуктами ПОЛ, вызывают не только прямое цитотоксическое действие на поджелудочную железу, но и запускают механизмы повреждения сосудистой системы, что имеет прямой негативный эффект при заживлении ран у животных с сахарным диабетом. Существенная роль активации ПОЛ в патогенезе сахарного диабета подтверждается благоприятным эффектом антиоксидантных препаратов на процессы ранозаживления. Ускоренное заживление раневых дефектов на фоне линимента Пятилистника кустарникового обусловлена стимуляцией синтетической активности клеток и клеточной численности в зоне раневого повреждения (табл. 2). Так, на фоне применения указанных линиментов повышается синтетическая активность клеток и их численность, что свидетельствует о стимуляции ими регенерационных процессов на фоне ингибирования свободнорадикальных реакций при повреждении кожи.

Таблица 2

Влияние линимента Пятилистника кустарникового на синтетическую активность клеток при раневом повреждении кожи у крыс с сахарным диабетом (14 сутки) 

Из представленных данных следует, что на фоне применения линимента Пятилистника кустарникового значимо активируется синтетическая активность клеток в зоне повреждения. Очевидно, что благодаря такой высокой активности синтетических процессов ускоряются процессы ранозаживления у крыс с сахарным диабетом. Безусловно, малые размеры экстрактивных веществ и однородность, достигаемые при гомогенизации, повышают биодоступность биологически активных веществ и тем самым ускоряют репаративные процессы. Определенно, что этот биофармацевтический фактор играет весомую роль в достижении фармакотерапевтического эффекта.

Таким образом, при использовании мази Пятилистника кустарникового отмечается форсирование процесса ранозаживления у животных с экспериментальным сахарным диабетом, при этом благодаря достоверной интенсификации синтеза нуклеиновых кислот и повышению антиоксидантного статуса эффективно преодолеваются негативные последствия нарушений обмена веществ и торпидное течение раневого процесса на фоне сахарного диабета. В связи с этим дальнейшие разработки в этом направлении позволят развивать фармакотерапевтические стратегии с учетом «фармацевтических факторов» против цитотоксичности продуктов перекисного окисления липидов с обоснованием применения антиоксидантных средств местного действия, стимуляторов регенерации при раневых повреждениях кожи у больных сахарным диабетом. В связи с этим дальнейшие разработки в этом направлении позволят развивать фармакотерапевтические стратегии против цитотоксичности продуктов перекисного окисления липидов [8] с обоснованием перспективы применения антиоксидантных средств местного действия при раневых повреждениях кожи у больных сахарным диабетом.