Учитывая тот факт, что показатель летальности от закрытых травм печени в России и в других Европейских странах, в том числе в Дании, Германии, Швейцарии, составляет 31,6–46,8 %, вопрос об ускорении регенеративных способностей печени с каждым годом остается очень актуальным [5, 8].

Высокую смертность можно объяснить тяжестью состояния пострадавших, у которых чаще всего наблюдается шок и в анамнезе имеется большая кровопотеря и другие сочетанные повреждения [2].

Частота послеоперационных осложнений встречается у 20–80 % пациентов [1]. Среди осложнений наиболее часто отмечаются: интраоперационные кровотечения, расстройства кровоснабжения и желчеоттока в остающихся отделах паренхимы печени, гидроторакс, развитие гнойных осложнений, желчных перитонитов, острой печеночной недостаточности и другие осложнения, вызванные высокой ксенобиотической нагрузкой компонентов общего наркоза   [2].

Послеоперационные осложнения зависят также и от вида оперативного вмешательства [6].

Снижение послеоперационной летальности и восстановительного периода является приоритетным направлением для многих Российских медицинских центров.

Установлено, что регенеративный процесс очень энергозатратный. Известно, что синтез АТФ в клетках осуществляется в митохондриях при участии большого количества различных белков. Однако не всегда представляется изучить весь сектор белков. Именно благодаря исследованию показателя общего белка можно более правильно оценить состояние органа и, как следствие, в будущем правильно сбалансировать дальнейший лечебно-восстановительный процесс.

Цель работы: установить циркадианные колебания общего белка в гепатоцитах печени крыс на 3-е, 5-е и 7-е сутки после механической травмы органа.

Материалы и методы. Объектом исследования послужили 288 беспородных крыс средним весом 180±5 грамм, в возрасте 90 суток. Все животные содержались в стандартных условиях вивария. Выведение животного из эксперимента осуществлялось в первые минуты каждого часа.

Животные были разделены на 4 группы:

Контрольная группа – характеристика циркадианного ритма общего белка в гепатоцитах (72 крысы – самцы).

Экспериментальная группа № 1, 2, 3 – характеристика циркадианного ритма общего белка в гепатоцитах после механической травматизации органа на 3-е, 5-е, 7-е сутки, соответственно (по 72 крысы – самцы).

Каждое лабораторное животное помещали в специализированную камеру, вводили в медикаментозный сон с помощью эфирного наркоза в дозе 1 мл/180 гр, далее фиксировали на специализированном устройстве и приступали к эксперименту [7].

Протокол всей экспериментальной работы был составлен в соответствии с принципами биоэтики, с приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.2003, «Об утверждении правил лабораторной практики»; правилами лабораторной практики (GLP) и одобрен этическим комитетом [3; 4].

У всех животных после выведения их из эксперимента брали участок печени для изготовления микропрепаратов. После фиксации в жидкости Бродского заливали по стандартной методике. Срезы толщиной 3–5 мкм изготавливали с помощью микротома МС2 – ТУ 64-1-1628-72. Далее проводилась окраска срезов в красителях, необходимых для анализа – гематоксилин и эозин по ван Гизону и гистохимическая окраска прочным зеленым при pH 2,2.

Животным экспериментальных групп осуществлялась хирургическая манипуляция, направленная на травматизацию органа анатомическим методом резекции: срединная лапаротомия. Повреждение органа осуществлялось скальпелем. Разрез проводился в V сегменте печени длиной 10 мм, глубиной 4 мм. После травматизации на печень накладывались узловые швы и послойно зашивались ткани. Выводили животное из наркоза и помещали в виварий. На 3-е, 5-е и 7-е сутки после механической травмы проводилось полное выведение крыс из эксперимента.

С помощью комплекса «Морфолог» проводилось количественное определение общего белка в контрольной и экспериментальных группах. Концентрация белка определялась в 300 гепатоцитах в цитоплазме клетки.

Все полученные материалы обрабатывались на персональном компьютере с помощью программ "Microsoft Office Windows 2007", " Microsoft Office Excel 2007".

Результаты и обсуждения. В ходе данной работы выявлены следующие колебания общего белка (табл. 1).

Таблица 1

Уровень показателя белка в гепатоцитах

Проводя анализ данных таблицы 1, нельзя не обратить внимание на обратную зависимость между значениями показателей в группах. Min показатель белка в контрольной группе приходится на полдень и составляет 4222±11 усл. ед. В экспериментальных группах в это время наблюдается всплеск активации регенеративных показателей -max значение 7390±18, 7371±20 и 7325±08 усл. ед. В 23 часа в контрольной группе наблюдается max значение, оно составляет 4834±13 усл. ед., в экспериментальных группах наблюдается min в 24 часа – 6264±11, 6137±21 и 6004±14 усл. ед., соответственно, в группах № 1, № 2, № 3.

Установив этот факт, можно сделать вывод, что в дневные часы, когда наблюдается функциональный спад работы органа, регенеративные процессы у животных протекают медленнее, чем у крыс, получивших повреждение в часы активности.

Из данных также видно, что почти равные значения наблюдаются на 3-е сутки в 3 и 21 час и составляют 6499±13 усл. ед. и 6493±19 усл. ед, соответственно. Абсолютно равное значение соответствует 2 и 22 часам и составляет 6412 усл. ед.

Статистическая обработка данных о количественном колебании общего белка на 3-е сутки после механической травмы печени, согласно таблице 1, выявила, что средняя арифметическая величина – М составляет 6751 усл. ед., среднеквадратическое отклонение – σ составляет 316 усл. ед., а средняя ошибка средней арифметической величины – m равно 3,22. В интервале М±3σ находится 100 % всех вариант ряда. Данное процентное соотношение показывает абсолютную достоверность данных.

Среднее отличие между уровнем белка в двух группах составляет 2187 ус. ед. Max отличие приходится на 12 часов и составляет 3169 усл. ед., min 1463 усл. ед. зарегистрировано в 24 часа. Почти равные значения отклонений наблюдались в 10 и 14; 7 и 17 часов.

Замечено, что в среднем за один час в экспериментальной группе № 1 количество общего белка изменялось на 93 усл. ед., max значение наблюдается между 10 и 11 часами и составляет 260 усл. ед., min значение соответствует промежутку времени между 23 и 24 часами и составляет 39 усл. ед. Также высокий скачок колебания общего белка наблюдается между 8 и 9 часами и составляет 153 усл. ед., между 13 и 14 часами – 175 усл. ед. и между 12 и 13 часами 126 усл. ед. Абсолютное равное изменение значений наблюдается между 15 и 16, 19 и 20 часами, и соответствует 77 усл. ед.

Изучая колебания общего белка в гепатоцитах печени на 5-е сутки после оперативного вмешательства, видно, что среднее значение показателя разницы каждого часа на 5-е сутки после операции составляет 103 усл. ед., минимальное изменение зафиксировано между 5 и 6 часами и составляло 44 усл. ед., максимальное значение зафиксировано с 10 до 11 и составляет 270 усл. ед. Высокое значение разницы зафиксировано также в интервале времени между 13 и 14 часами, оно составляет 253 усл. ед. Абсолютное равное изменение значений наблюдается между 2 и 3, 14 и 15 часами, и соответствует 71 усл. ед., а также между 4 и 5, 21 и 15 часами, составило 94 усл. ед.

Приблизительные равные средние показатели общего белка в контрольной группе наблюдаются в 4 и 18 часов и составляют 4602±10 и 4604±17 усл. ед., соответственно, а также в 7 и 15 часов – 4493±15 и 4499±10 усл. ед., соответственно.

Проведя анализ на достоверность данных по критерию правила «трех сигм», выяснено, что средняя арифметическая величина – М составляет 6689 усл. ед., среднеквадратическое отклонение – σ составляет 335 усл. ед., а средняя ошибка средней арифметической величины – m равно 3,42. В интервале М±3σ находится 100 % всех вариант ряда. Исходя из этих данных, можно сделать вывод, что данное процентное соотношение показывает абсолютную достоверность данных.

Средняя арифметическая величина – М в экспериментальной группе №3 составляет 6611 усл. ед., среднеквадратическое отклонение – σ составляет 355 усл. ед., а средняя ошибка средней арифметической величины – m равно 3,31. В интервале М±3σ находится 100 % всех вариант ряда. Данное процентное соотношение показывает абсолютную достоверность данных.

Рис. 1. Показатель разницы снижения колебаний общего белка

Анализируя рис. 1, видно, что самый медленный восстановительный процесс наблюдается в интервале времени между 10 и 12 часами, в частности, в 12 часов разница между количеством общего белка составила всего 9 и 22 усл. ед., между 3 и 5; 5 и 7 сутками, соответственно.

Рис. 2. Общий показатель разницы снижения колебаний общего белка

Изучая рис. 2, заметно, что самый интенсивный восстановительный процесс наблюдается в 23 часа, когда количество общего белка составило 260 усл. ед. Интенсивность восстановления также наблюдается в 21, 22, 1,2 и 8 часа и составляют 199, 176, 193, 195 усл. ед., соответственно. Также заметно, что в период с 15 до 23 идет тенденция к росту показателя противовоспалительного эффекта. Min приходится на 10 и 12 часов, 50 и 31 усл. ед., соответственно.

Выводы:

1. Активность работы гепатоцитов в норме у крыс наблюдается к 23 часам.
2. После полудня начинается постепенная активация синтетических процессов в гепатоцитах, максимальный уровень содержания общего белка достигается в 23 часа.
3. Механическая травматизация, как один из мощнейших стрессовых факторов, вызывает смещение циркадианных колебаний общего белка в гепатоцитах.
4. Регенеративные процессы активируются более быстрее, если травматизация органа происходила в момент его гиперактивности.
5. В период с 10 до 12 утра наблюдается самый неблагоприятный промежуток времени для восстановительного процесса в печени.
6. Выбор времени проведения оперативного вмешательства на печени может способствовать ускорению восстановительного процесса и, как следствие, снижению количества койка-дней пребывания в стационаре.