Поражение печени при острых экзогенных интоксикациях является распространенной патологией, которая, по клиническим данным, встречается более чем у 30% больных [5].

Из-за ухудшения экологической обстановки различные промышленные и сельскохозяйственные яды попадают в организм человека как через воздух, так и вместе с пищей, тем самым вызывая интоксикацию организма. Токсическое поражение печени вызывают как различные химические вещества, в том числе и лекарственные, при их случайном попадании или введении в организм, так и промышленные яды при нарушении техники безопасности.

Четыреххлористый углерод широко используется в промышленности как растворитель масел, жиров, каучука и т.д., для экстрагирования жиров и алкалоидов, для очистки и обезжиривания одежды в быту и в производственных условиях. Метаболические превращения CCI4 являются основой его гепатотоксического действия [4]. Поэтому для исследования в качестве гепатотропного яда нами был выбран CCI4.

При токсическом и инфекционном поражении печени наблюдается изменение пигментного, углеводного, белкового обмена и т.д.

Недостаточная эффективность современных лекарственных средств, рекомендованных для лечения поражений печени, определяет необходимость поиска новых препаратов, в том числе среди природных соединений [6].

За последние 20 лет выявлены гепатопротекторные свойства препаратов многих лекарственных растений, таких как арника горная, арника облиственная, ромашка аптечная и т.д. [8; 11]. Встречаются литературные данные о том, что экстракт портулака огородного (Portulaca Oleracea) используется в тибетской медицине для лечения гепатита [2]. Широкий спектр действия веществ, входящих в состав портулака огородного (флавоноиды, коричные кислоты, слизистые и смолистые вещества, органические кислоты, витамины С, РР, Е и т.д.), способствовал нашему выбору этого растения в качестве модели протекторного вещества при токсическом поражении печени.

Цель и задачи исследования

Целью нашего эксперимента явилось исследование влияния водного экстракта портулака огородного (Portulaca olepacca) на содержание билирубиновых фракций при экспериментальном токсическом гепатите, с последующим сравнительным анализом результатов, полученных после стандартного метода лечения.

Научная новизна

Сравнительный анализ содержания билирубиновых фракций в сыворотке крови кроликов при использовании водного экстракта портулака огородного и стандартного метода лечения при остром токсическом гепатите проведен впервые.

В качестве объекта исследования были взяты кролики породы шиншилла, которые широко используются в длительных экспериментах из-за удобства многократного взятия крови.

В эксперименте были использованы половозрелые самцы в возрасте 5-6 месяцев и массой 2,5-3 кг. У них вызывали токсический гепатит однократным подкожным введением четыреххлористого углерода в дозе 0,2 мл на 1 кг массы тела. В указанной дозе четыреххлористый углерод вызывает токсический гепатит у кроликов [1].

Постановка эксперимента

Животные были разбиты на 4 группы:

1-я группа – интактные животные (контроль), которых после интоксикации СС14 не лечили;

2-я группа – животные, которые через 3 часа после введения ССI4 получали водный экстракт портулака огородного (ЭПО) 3 раза в день перорально через зонд, в дозе 2 мл на 1 кг массы тела;

3-я группа – животные, которые через 3 часа после введения ССI4 проходили курс лечения витаминами (В1, В2, В6, В12, РР, Е, С) ежедневно в одно и то же время;

4-я группа – животные, которые через 3 часа после введения ССI4 проходили курс витаминотерапии в комплексе с водным экстрактом портулака огородного.

Кровь брали ежедневно из краевой вены уха кролика по методу, описанному у Западнюка [1], для определения в ней содержания билирубиновых фракций. Сыворотку получали без использования противосвертывающих средств.

Для этого кровь держали в холодильнике в течение 20 мин и центрифугировали в течение 15 минут при 3000 об/мин. Сыворотку хранили в холодильнике.

Ежедневно животным внутримышечно вводили витамины в терапевтических дозах по методике Западнюка И.О. [1]. Дозы: В1 – 0,1 мл 5% раствора на 1 кг массы (5 мг/кг); В2 – 0,2 мл 1% р-ра на 1 кг массы (2 мг/кг); В6 – 0,1 мл 5% р-ра на 1 кг массы (5 мг/кг); В12 – 0,1 мл (2 мг/кг); РР – 0,2 мл 1% р-ра на 1 кг массы (3 мг/кг); С – 0,2 мл 5% р-ра на 1 кг массы (10 мг/кг).

По схеме витамины В1, В12 и С – назначают с утра в 9 ч, а витамины В2, В6, РР – назначают после 15 ч.

Биохимические методы исследования

Определение содержания билирубина тест-методом «Лахема».

Принцип метода

Билирубин вступает в реакцию азосочетания с диазтированной сульфаниловой кислотой с образованием раствора азокрасителя, который фотометрируют.

Определение общего (неконъюгированного и прямого) билирубина проводят в растворе акцелератора, определение прямого (конъюгированного) билирубина – без акцелератора.

Статистическую обработку проводили по t-критерию Стьюдента, методом малой выборки [3]. Резко отклоняющиеся наблюдения отбрасывали с использованием критерия Шовенэ. Различия считали достоверными при значениях Р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Токсическое поражение печени, вызванное однократным введением ССI4, приводит к изменению интенсивности желчеобразования и химического состава желчи, что сопровождалось глубоким нарушением пигментного обмена, о чем свидетельствовало повышение содержания билирубиновых фракций в сыворотке крови кроликов. Однако это повышение не однозначно для общего и прямого билирубина.

Из полученных данных видно, что содержание общего билирубина относительно контроля (интактных животных) уже через 3 часа после введения ССI4 во всех исследуемых группах достоверно повышается в среднем на 50%, а содержание прямого билирубина - более чем на 280%. Таким образом, отмечается повышение концентрации общего билирубина в крови, преимущественно за счет прямого [12].

Повышение уровня конъюгированного билирубина в крови указывает на нарушение выделения клеткой билирубина в желчные ходы и затруднение оттока желчи по внутрипеченочным протокам [9]. Через 24 часа после введения ССI4 содержание общего билирубина в 1-й контрольной группе без лечения, во 2-й группе с применением водного экстракта портулака огородного, в 3-й с витаминотерапией и в 4-й с комбинированным вариантом в среднем достоверно превышало норму в 1,8 раза, а содержание прямого билирубина в 3 раза (Р<0,001) (таблица; рис. 1 и 2).

На 2-й день эксперимента, независимо от терапии, во всех группах кроликов содержание общего и прямого билирубина достоверно повысилось относительно контроля примерно на 180 и 460% соответственно, а относительно предыдущего дня в среднем оба показателя выше на 50%. На 3-й день исследования во всех 4 группах кроликов содержание общего и прямого билирубина продолжает достоверно повышаться (Р<0,001) в среднем на 100 и 80% относительно 2-го дня и на 370 и 1000% относительно показателей интактных животных. Следует отметить, что на третьи сутки во 2, 3 и 4-й группах кроликов наблюдается наивысшее содержание концентрации билирубиновых фракций с момента введения ССI4. На 4-й день исследования в 1-й контрольной группе кроликов, без терапии, отмечается наиболее высокий уровень концентрации билирубиновых фракций, превышая норму соответственно в 6 и 12 раз. При статистическом анализе полученных данных на 4-й день исследования и сравнении результатов в группах между собой по концентрации общего и прямого билирубина видно, что достоверно отличаются только показатели 1-й группы от остальных (Р<0,05). Между 2, 3 и 4-й группами достоверных различий не наблюдается, значения общего и прямого билирубина по-прежнему стойко держатся на прежнем уровне. Переломный этап наступает после 5-го дня исследования. В дальнейшем от 5-го до 10-го дня наблюдается во всех четырёх группах постепенное снижение билирубиновых фракций (рис. 1 и 2). С 5-го по 10-й дни исследования показатели билирубиновых фракций крови кроликов во 2, 3 и 4-й группах достоверно (Р<0,05) ниже показателей 1-й группы без терапии.

Содержание общего и прямого билирубина в сыворотке крови (в мкмоль/л) кроликов при экспериментальном токсическом поражении печени (М ± m : n = 6)

Контроль (интактные животные): общий билирубин - 5,1±0,98 прямой билирубин - 2,14±0

* - Р >0,05 - относительно контроля (интактных животных)

Рис. 1. Динамика содержания общего билирубина в сыворотке крови кроликов при токсическом поражении печени при различных вариантах исследования

Рис. 2. Динамика содержания прямого билирубина в сыворотке крови кроликов при токсическом поражении печени при различных вариантах исследования

Следует отметить, что содержание общего билирубина во 2-й группе с применением портулака и в 4-й группе с комбинацией экстракта портулка + витаминотерапия уже на 9-й день исследования снижается до нормальных значений интактных животных. На 10-е сутки нашего исследования в 1-й группе животных общий билирубин ещё превышает норму на 235%, а прямой на 600%.

А показатели 2, 3 и 4-й групп по содержанию общего и прямого билирубина находятся примерно на одинаковом уровне, достоверно не отличаясь между собой. Общий билирубин на 10-й день при всех вариантах исследования варьирует уже в пределах нормы, а прямой снизился от максимального его значения на 440% и выше нормальных значений ещё примерно на 90%.

Конечно, полученные значения прямого билирубина еще далеки от нормальных. Но уже наблюдаемое снижение билирубиновых фракций в 3 группах с терапией относительно 1-й контрольной группы без терапии указывает на эффективное воздействие водного экстракта портулака огородного и витаминов на концентрацию билирубиновых фракций при экспериментальном токсическом гепатите.

Из полученных данных видно, что водный экстракт портулака огородного, в отличие от инъекций витаминов, использованных в терапии токсического поражения печени, обладает более выраженным гепатопротекторным действием [9; 12-14].

На это указывает показатель общего билирубина, который на 9-й день исследования, в 3-й группе с витаминотерапией находится на достоверно высоком уровне относительно нормальных значений, в то время как вариант с экстрактом портулака самостоятельно во 2-й группе, так и в комплексе с витаминами способствует достоверному снижению общего билирубина до нормальных значений.

Комбинированное использование витаминов и портулака в дозе 2 мл на 1 кг массы тела не оказывает достоверного изменения в концентрации исследуемых фракций билирубина относительно витаминотерапии. По рис. 1 и 2 на 10-й день исследования видно, что каждый из вариантов терапии для восстановления уровня билирубиновых фракций можно использовать как самостоятельный метод.

В виду проявленной высокой активности, возможно, целесообразно кратное увеличение дозировки применяемого водного экстракта портулака огородного для дальнейшего исследования его действия на билирубиновые фракции крови при токсическом гепатите.

Выводы:

1. Однократное введение подкожно четыреххлористого углерода в дозе 0,2 мл на 1 кг массы тела вызывает токсический гепатит, вызывающий достоверное повышение билирубиновых фракций в сыворотке крови.

2. Как совместное использование витаминотерапии и водного экстракта портулака огородного, так и их монотерапия при экспериментальном токсическом поражении печени достоверно снижает уровень билирубиновых фракций в одинаковой степени.

3. В течение 10 исследуемых дней в сравниваемых 2, 3 и 4-й группах кроликов с применяемой терапией достоверной разницы в уровне концентрации билирубиновых фракций не обнаружено.

4. На 10-й день исследования наблюдается достоверная разница (Р<0,05) в концентрации билирубиновых фракций 1-й контрольной группы без терапии и 2, 3 и 4-й групп кроликов с применяемой терапией.

5. На 10-й день исследования во 2, 3 и 4-й группах кроликов, в отличие от 1-й контрольной группы без терапии, наблюдается достоверное (Р<0,05) снижение общего билирубина до уровня нормальных значений.