Сифилис – одно из самых распространенных венерических заболеваний на планете. По данным Всемирной Организации Здравоохранения ежегодно в мире регистрируется не менее 12–15 миллионов новых случаев сифилитической инфекции [1]. В последние десятилетия отмечается структурное перераспределение клинических форм заболевания с распространением эпидемиологически неблагоприятных ранних скрытых форм сифилиса, а также поздних скрытых форм с развитием висцерального и нейросифилиса [2, 3]. Несмотря на успехи современной венерологии, у 2–20 % больных после лечения наблюдается развитие серорезистентности [2, 3, 4].

За последние три десятилетия появились доказательства определяющей роли врожденного и адаптивного иммунитета в развитии сифилиса [5-9]. Показано, что характерной чертой персистирующего течения заболевания является формирование динамического равновесия между бледной трепонемой и иммунной системой «хозяина», изменения в котором могут привести к диссеминации T. Pallidum с формированием вторичных форм и серорезистентности [8, 9].

Цель исследования: анализ показателей иммунофенотипирования клеток крови и сывороточных иммуноглобулинов у пациентов с серорезистентным, ранним и поздним скрытым сифилисом.

Материал и методы исследования. В работе представлены данные, полученные при иммунологическом обследовании 100 больных сифилитической инфекцией, находившихся под наблюдением в Краевом клиническом кожно-венерологическом диспансере. В группу I вошли 35 пациентов с ранним скрытым сифилисом, в группу II – 24 пациента с поздним скрытым сифилисом, в группу III – 41 пациент с серорезистентным сифилисом. Контрольную группу составили 50 здоровых респондентов, сопоставимых по возрасту и полу.

Для обеспечения репрезентативности полученных результатов из исследования были исключены ВИЧ-инфицированные пациенты, больные сахарным диабетом, аутоиммунными, аллергическими и онкологическими заболеваниями.

Иммунофенотипирование лимфоцитов осуществляли методом проточной цитометрии с использованием одно- и двухпараметрических реагентов линии IQTest: CD19-PC5, HLA-DR-PC5, CD3-FITC/CD4-PЕ, CD8-PC5, CD3-FITC/CD (16+56)-PЕ, CD45-ECD фирмы Beckman Coulter, США на лазерном проточном цитометре Cytomicx FC 500 фирмы Beckman Coulter, США.

Общее количество лейкоцитов, относительное и абсолютное содержание субпопуляций лимфоцитов определяли с использованием одноплатформенной технологии с помощью гетерогенного гейтирования по панлейкоцитарному маркеру CD45+ и показателям светорассеяния с применением калибровочных частиц Flow-Count Fluorоspheres фирмы Beckman Coulter, США.

Определение иммуноглобулинов A, G, M в сыворотке крови выполняли методом количественной иммунотурбодиметрии с помощью биохимического анализатора AU 680 500 фирмы Beckman Coulter, США. Для анализа использовали реактивы фирмы Beckman Coulter, США. Оценку внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофилов крови проводили с помощью НСТ-теста в модификации А.Н. Маянского и М.Е. Виксмана (1979). Фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов крови исследовали на модели поглощения частиц латекса (Фрейдлин И.С., 1986).

Для статистического анализа данных использовали пакет программ «Primer of Biostat 4,0», Attestat 10.5.1.». Количественные значения с распределением, отличным от нормального, представляли в виде медианы и интерквантильного (25 и 75 процентили) размаха (Me (Q1-Q)).

Для оценки межгрупповых различий применяли однофакторный дисперсионный анализ, критерии Ньюмена – Кейлса, Данна. Достоверными считали различия при p<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение. Показатели фагоцитоза и оксидазной активности нейтрофильных гранулоцитов у пациентов с сифилисом не отличались от здоровых респондентов (таблица).

Показатели иммунного статуса у пациентов с сифилисом

Примечание:*-p<0,05 – по сравнению с контрольной группой, pI-II,pI-III,pII-III – достоверность межгрупповых различий (критерий Ньюмена – Кейлса, критерий Данна), n – число пациентов.

У больных всех клинических групп отмечалось снижение относительного содержания лимфоцитов, что согласуется с данными, представленными в литературе.

Содержание Т-лимфоцитов и Т-хелперов при раннем и позднем скрытом сифилисе не отличалось от аналогичных показателей у здоровых доноров (таблица).

У пациентов всех групп установлено увеличение средних показателей HLADR+ Т-лимфоцитов (таблица, рис.1a, 1б).

а)HLADR⁺,%    б)HLADR⁺, abs

Рис. 1. Содержание HLADR⁺-лимфоцитов у пациентов с сифилисом

Примечание: p – достоверные отличия по сравнению с контрольной группой; К – контрольная группа, I – ранний скрытый сифилис II – поздний скрытый сифилис, III – серорезистентный сифилис (критерий Ньюмена – Кейлса, критерий Данна).

В группе с серорезистентным сифилисом определялось снижение абсолютного содержания CD3+- и CD4+-клеток по сравнению со здоровыми людьми. Установлены достоверные различия абсолютных показателей CD4+-лимфоцитов при серорезистентном сифилисе по сравнению с ранним и поздним скрытым сифилисом (таблица, рис. 2б).

а) CD4⁺, %      б) CD4⁺, abs

Рис. 2. Содержание CD4⁺-лимфоцитов у пациентов с сифилисом

Примечание: p – достоверные отличия по сравнению с контрольной группой; К – контрольная группа, I – ранний скрытый сифилис II – поздний скрытый сифилис, III –  серорезистентный сифилис (критерий Ньюмена-Кейлса, критерий Данна).

Примечание: p – достоверные отличия по сравнению с контрольной группой; К – контрольная группа, I – ранний скрытый сифилис II – поздний скрытый сифилис, III – серорезистентный сифилис (критерий Ньюмена-Кейлса, критерий Данна).

Развитие серорезистентности при сифилисе нередко связано с изменением баланса CD4⁺/CD8⁺-лимфоцитов [6]. Низкие показатели CD3⁺- и CD4⁺-лимфоцитов у пациентов с серорезистентностью подтверждаются ранее проведенными исследованиями  [7, 10]. Содержание и функциональная активность Т-хелперов (CD4⁺) имеет ключевое значение в развитии реакций гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и может рассматриваться в качестве одного из факторов, способствующих формированию серорезистентности [6]. Известно, что отсутствие негативации комплекса серологических реакций с высокой частотой отмечается у ВИЧ-инфицированных и иммунокомпрометированных больных сифилисом, что сопровождается ухудшением течения заболевания и отрицательно влияет на результаты лечения [8]. Вероятно, снижение количества CD4⁺-лимфоцитов у пациентов с серорезистентным сифилисом может быть связано с недостаточным синтезом IL2 и IL12 мононуклеарами периферической крови [6]. 

Существует мнение, что дефицит Th1 при вторичном сифилисе обусловлен высоким уровнем апоптоза периферических лимфоцитов посредством активации Fas-опосредованного пути, что затрудняет санацию организма и создает предпосылки для хронизации инфекции [7].  Кроме того, установлено снижение функциональных показателей Th1 по сравнению со здоровыми респондентами [6]. 

При оценке субпопуляций Т-лимфоцитов нами выявлено увеличение относительного содержания CD8⁺-лимфоцитов у пациентов всех групп (таблица, рис.3а).

а) CD8⁺, %        б) CD8⁺, abs

Рис. 3. Содержание CD8⁺-лимфоцитов у пациентов с сифилисом

Примечание: p – достоверные отличия по сравнению с контрольной группой (критерий Ньюмена – Кейлса, критерий Данна); К – контрольная группа, I – ранний скрытый сифилис, II – поздний скрытый сифилис, III –  серорезистентный сифилис.

Примечание: p – достоверные отличия по сравнению с контрольной группой (критерий Ньюмена – Кейлса, критерий Данна); К – контрольная группа, I – ранний скрытый сифилис, II – поздний скрытый сифилис, III – серорезистентный сифилис.

Роль Т-цитотоксических/эффекторов в клиренсе бледных трепонем до конца не определена. По мнению ряда авторов их увеличение может отражать динамику иммунного ответа, направленного на элиминацию внутриклеточного патогена и имеет компенсаторный характер [6, 11, 12].  

В случае экспериментальной инфекции ранее было показано, что появление CD8⁺ - клеток в месте внедрения T. Pallidum регистрируется уже на 11–18 день после заражения, при этом их преобладание над CD4⁺-клетками отмечается в период разрешения процесса между 25 и 39 днем [13]. Установлено, что сифилитические инфильтраты при твердом шанкре у пациентов с сифилисом содержат преимущественно Т-хелперы, в то время как Т-цитотоксические/эффекторы преобладают при вторичных сифилитических поражениях [13].  Вероятно, активированные CD8⁺-лимфоциты могут вносить свой вклад в увеличение IFɤ, необходимого для активации макрофагов и реализации ГЗТ или лизировать эпителиальные клетки, инфицированные T. Pallidum, что подтверждается присутствием матричной РНК перфорина и гранзима [9].  

Вместе с тем существует мнение, что активация CD8⁺-лимфоцитов при сифилисе подавляет реакцию ГЗТ и синтез опсонизирующих антител [9], имеющих определяющее значение в клиренсе T. Pallidum.

При иммунофенотипировании клеток крови у пациентов с серорезистентным сифилисом нами выявлено статистически достоверное уменьшение количества NK-клеток (таблица).

Известно, что NK-клетки играют основную роль в иммунном ответе на внутриклеточные патогены, способствуя синтезу IFNɤ, поляризации Т-лимфоцитов и созреванию дендритных клеток. Натуральные киллеры являются основным источником IFNɤ при стимуляции мононуклеаров периферической крови липопротеинами T. Pallidum [11],  что согласуется с существующими в литературе сведениями об уменьшении активности NK-клеток при развитии сифилиса [9, 12]. 

В исследованиях последних лет у пациентов с вторичной сифилитической инфекцией выявлено появление нетипичной популяции циркулирующих NK (CD56^-CD16⁺) с низким потенциалом секреции IFɤ и других интерлейкинов [9].    

При оценке сывороточных иммуноглобулинов нами зарегистрировано увеличение уровня IgM  у пациентов с поздним скрытым сифилисом и повышение значений IgA у больных всех групп без достоверных межгрупповых различий. Высокие концентрация сывороточных иммуноглобулинов при сифилисе получены в ряде исследований ранее и, вероятно, обусловлены  продолжительной антигенной симуляцией в условиях активной персистенции T. Pallidum [9, 14].

Таким образом, при иммунофенотипировании клеток крови у пациентов с серорезистентным, ранним и поздним скрытым сифилисом отмечается перераспределение состава иммунокомпетентных клеток с увеличением количества Т-цитотоксических/эффекторов. Увеличение количества активированных лимфоцитов свидетельствует об активации иммунного ответа  в условиях персистенции T. Pallidum.

Признаки дефицита Т-клеточного звена иммунитета определяются преимущественно у пациентов с серорезистентным сифилисом в виде уменьшения количества Т-хелперов, NK-клеток. Полученные данные целесообразно использовать  при интерпретации результатов серологических исследований у пациентов с сифилисом и для прогнозирования различных форм заболевания.