Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

Известно, что индивиды с недостаточным количеством дофаминовых рецепторов чаще склонны к пагубным привычкам, в том числе к чрезмерному употреблению пищи. Предполагается, что это связано с дефицитом положительных эмоций и необходимостью его восполнения любыми доступными способами [1, 2].

Дофамин – это нейромедиатор, относящийся к «системе вознаграждения» головного мозга, передающий сигналы от одного нейрона к другому, способный вызывать чувство наслаждения или удовлетворения. Вырабатывается дофамин во время положительного, по субъективному представлению человека, опыта. Нейробиологические эксперименты показали, что даже воспоминания о поощрении могут увеличить уровень дофамина [3, 4].

Синтезированный нейроном дофамин накапливается в дофаминовых везикулах, называемых синаптическими пузырьками, посредством протон-сопряженного транспорта. В везикулу с помощью протон-зависимой АТФ-азы закачиваются ионы H+. При выходе протонов по градиенту концентрации в везикулу поступают молекулы дофамина с последующим выведением дофамина в синаптическую щель. При этом часть дофамина участвует в передаче нервного импульса, воздействуя на клеточные D-рецепторы постсинаптической мембраны из группы трансмембральных дофаминовых рецепторов семейства GPCR (G-protein-coupled receptors), выполняющих функцию активаторов внутриклеточных путей передачи сигнала и приводящих к клеточному ответу. Другая часть возвращается в пресинаптический нейрон с помощью обратного захвата посредством белка – транспортера дофамина. Вернувшийся в клетку медиатор расщепляется с помощью моноаминооксидазы (МАО), альдегиддегидрогеназы и катехол-О-метил-трансферазы до гомованилиновой кислоты. Рецепторы GPCR вовлечены в такие физиологические процессы, как зрение, обоняние, участвуют в регуляции поведения и настроения, активности иммунной системы и воспаления, а также в функционировании вегетативной нервной системы. Нарушение работы данных рецепторов приводит к возникновению множества разнообразных заболеваний.

Недостаточное количество дофаминовых рецепторов является не единственной причиной развития патологических состояний. Немаловажная роль принадлежит белку – переносчику дофамина, осуществляющему трансмембранный перенос дофамина из синаптической щели обратно в нейроны для повторного использования. Именно его активность определяет количество и длительность пребывания дофамина в синаптической щели, что в свою очередь делает данный белок важнейшим регулятором передачи сигналов дофамина в мозге. Работа переносчика дофамина кодируется геном дофаминтранспортного белка SLC6A3/DAT1. У человека ген переносчика дофамина SLC6A3/DAT1 локализован на хромосоме 5 в области р15.3, содержит 12 экзонов и имеет длину 4,2 тысяч п.о. [5, 6].

Целью настоящего исследования явился поиск ассоциации полиморфного варианта rs27072 гена дофаминтранспортного белка SLC6A3/DAT1 с риском развития избыточной массы тела в якутской популяции.

Материалы и методы исследования

В исследовании приняли участие индивиды, не являющиеся родственниками, подписавшие информированное согласие на участие в данном исследовании.

Для каждого участника была заполнена индивидуальная генетическая карта с данными антропометрических, клинико-функциональных и лабораторных показателей, а также результатами опроса по соблюдению режима и объема питания, отношения к пище как источнику удовольствия. Уровень индекса массы тела (ИМТ) рассчитывали по формуле: ИМТ = вес (кг)/рост (м)2. Для оценки ожирения использовали критерии Western Pacific Region (WPRO) для жителей Азии [7]. При ИМТ < 18,5 массу тела считали недостаточной, в пределах 18,5–22,9 – нормальной, в пределах 23,0–24,9 – избыточной. При ИМТ в интервале 25,0–29,9 диагностировали ожирение I степени, ИМТ ≥ 30,0 кг/м2 – ожирение II степени.

Лабораторная часть работ по генотипированию полиморфизма rs27072 гена SLC6A3/DAT1 проводилась в лаборатории наследственной патологии отдела молекулярной генетики Якутского научного центра комплексных медицинских проблем (ЯНЦ КМП).

Для исследования использовались образцы ДНК из коллекции биоматериала ЯНЦ КМП с использованием УНУ «Геном Якутии» (рег. № USU_507512). Всего в исследование был включен 301 индивид, из которых 222 (73,75%) человека женского пола и 79 (26,25 %) – мужского. Средний возраст участников исследования составил 44,59±17,99 года, средний возраст лиц мужского пола – 44,29±17,92 года (от 20 до 84 лет), женского пола – 44,71±18,04 года (от 20 до 81 года). Этническая принадлежность учитывалась до третьего поколения, все участники исследования были якутами.

Параметры амплификации оптимизировались на общий объем реакционной смеси – 25 мкл. ПЦР проводили в соответствии с инструкциями изготовителя (LumiProb) в термоциклере MJ Mini Gradient Thermal Cycler (BioRad) (табл. 1).

Таблица 1

Температурная программа амплификации

Анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов проводили с использованием Эндонуклеаза рестрикции MspI (СибЭнзим) согласно инструкции (табл. 2).

Таблица 2

Характеристика длины рестрикционных фрагментов rs27072 гена SLC6A3/DAT1

Результаты амплификации фракционировали в 2%-ном агарозном геле с бромистым этидием при напряжении 120–300 В в течение 30–45 минут. Документирование и визуализацию ПЦР-амплификата проводили посредством фотографирования в UV-свете с помощью гель-документирующего прибора VilbеrLourmat (рис.). Оценка бэндов проводилась с помощью ДНК маркер «Pus19» (Thermo Fisher Scientific, USA).

Электрофореграмма продукта амплификации rs27072 гена SLC6A3/DAT1 в 2%-ном агарозном геле. Примечание: пн – пар нуклеотидов. 1 – АА генотип (217 п.н.);

2 – АG генотип (217, 137, 80 п.н.); 3, 4, 5 – GG генотип (137, 80 п.н.).

Внутренний контроль: 6 – ДНК маркер «Puc19»

Статистическую обработку данных проводили при помощи программы Statistica 13 for Windows. Распределение генотипов проверяли на соответствие равновесию Харди–Вайнберга с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий χ2 с поправкой Йетса на непрерывность. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Анализ опроса по соблюдению режима питания продемонстрировал, что только 16% индивидов старались придерживаться правильного режима питания. На вопрос об объемах употребляемой в течение суток пищи 23% индивидов ответили, что стараются придерживаться рекомендуемых врачами-диетологами норм, остальные участники ответили, что не ограничивают себя в количестве употребляемой пищи, что зависит от таких факторов, как наличие продуктов, время, в течение которого происходит прием пищи, а также настроение в момент приема пищи. Порядка 58% опрошенных ответили положительно на вопрос: «Испытываете ли вы удовольствие от приема пищи?», и 64% отметили, что при стрессовой ситуации или плохом настроении прибегают к дополнительному приему пищи, предпочитают в этот момент мясные блюда или кондитерские изделия.

Анализ распределения показателей ИМТ в зависимости от пола определил, что 67,77% всей выборки составили индивиды с избыточной массой тела. Анализ распределения показателей ИМТ между группами в зависимости от половой принадлежности продемонстрировал достоверные различия (р=0,006). Установлено, что мужчины с избыточной массой составили 79,75% от общего числа мужчин, тогда как женщины с избыточной массой тела – лишь 63,51% от числа всех женщин. Также было установлено, что среди лиц мужского пола полностью отсутствовали индивиды с низкими показателями ИМТ (табл. 3).

Таблица 3

Распределение показателей ИМТ в зависимости от пола

Примечание: р – уровень достоверности

Количественная характеристика исследованной выборки в зависимости от пола и показателей ИМТ представлена в таблице 4. Анализ возрастных показателей индивидов в зависимости от пола и уровня ИМТ не выявил достоверных различий. Средний возраст индивидов, имеющих показатели ИМТ ниже или в пределах нормы, составил 44,31±18,16 и 43,97±18,04 года соответственно, для индивидов с показателями ИМТ выше нормы средний возраст составил 44,19 ±17,95 года.

Таблица 4

Характеристика исследованной выборки в зависимости от показателей ИМТ

Примечание: SD – стандартное отклонение

Анализ распределения индивидов из группы с повышенным уровнем ИМТ в зависимости от пола и степени ожирения представлен в таблице 5.

Наибольшее число индивидов –105 (51,72%) человек – составили группу с ожирением 2-й степени, в которой, так же как и для лиц с низкими или нормальными показателями ИМТ, отмечалось преобладание лиц женского пола – 55,32% (р=0,046). Анализ распределения индивидов с различной степенью ожирения в зависимости от возраста не продемонстрировал значимых различий.

Таблица 5

Характеристика исследованной выборки в зависимости от степени ожирения

Примечание: SD – стандартное отклонение

Результаты сравнительного анализа распределения генотипов и аллелей исследуемого полиморфизма в группах с различным уровнем ИМТ представлены в таблице 6. Анализ показал, что значимые различия в распределении частоты генотипов и аллелей были установлены при сравнении показателей группы с недостаточным уровнем ИМТ и группой с избыточным уровнем ИМТ. Так, группа с низким уровнем ИМТ характеризовалась преобладанием гомозиготного генотипа АА (16,67%) по сравнению с группой с избыточным уровнем ИМТ, в которой данный генотип встречался лишь в 0,98% случаев (р=0,000). Распределение аллелей характеризовалось преобладанием аллеля G, который встречался с высокой частотой как в группе с низкими, так и в группе с высокими показателями ИМТ (77,78% и 89,95% соответственно). Так как значимых различий по частоте аллеля А между группами с низким и нормальным уровнем ИМТ выявлено не было, было принято решение об объединении показателей данных групп с последующим сравнением полученных показателей с показателями группы с высокими уровнем ИМТ. Установлено, что аллель А в группе с низким и нормальным уровнем ИМТ встречался в 2 раза чаще (22,22%) по сравнению с группой с высокими показателями ИМТ (10,05%). Анализ распределения генотипов и аллелей в зависимости от пола и уровня ИМТ не выявил достоверных различий.

Таблица 6

Распределение генотипов и аллелей полиморфизма rs27072 гена SLC6A3/DAT1 в зависимости от показателей ИМТ

Заключение

Таким образом, в результате впервые проведенного в якутской популяции исследования ассоциации полиморфизма rs27072 гена SLC6A3/DAT1 с показателями массы тела нами установлено, что популяционная выборка характеризовалась преобладанием индивидов с избыточной массой тела как среди лиц мужского, так и женского пола. Лица с показателями ИМТ ниже нормы встречались только среди женщин. Анализ возрастных показателей и показателей ИМТ в зависимости от пола не выявил достоверных различий как между группами мужчин и женщин, так и для каждой из них. Также установлено, что большинство участников исследования не соблюдают режим питания и рекомендуемые объемы пищи. Более половины опрошенных испытывают удовольствие от приема пищи и прибегают к дополнительному приему пищи при стрессовой ситуации или плохом настроении, предпочитая высококалорийную пищу.

Молекулярно-генетический анализ полиморфизма rs27072 гена SLC6A3/DAT1 продемонстрировал следующие особенности изученной популяции: популяция якутов характеризуется значительным преобладанием носителей аллеля G вне зависимости от пола и показателей ИМТ. Достоверное преобладание носителей аллеля А получено для группы с низким и нормальным уровнем ИМТ по сравнению с частотой данного аллеля в группе с избыточной массой тела. Таким образом, можно предположить, что носительство аллеля А полиморфизма rs27072 гена SLC6A3/DAT1 выполняет протективную функцию в отношении развития избыточной массы тела в популяции якутов.

Исследование было проведено в рамках НИР «Изучение генетической структуры и груза наследственной патологии популяций Республики Саха (Якутия)».