В ранее опубликованных работах [3; 4] представлены данные, характеризующие активность применяемых в медицине и впервые синтезированных производных ксантина. Эти результаты являются продолжением исследования данных производных ксантина с целью определения широты их антитромботического или гемостатического потенциала для создания на их основе высокоэффективных лекарственных препаратов.
Цель
Оценить влияние 7 синтезированных производных ксантина на систему гемостаза in vitro и сравнить с применяемыми в медицине лекарственными препаратами.
Объекты исследования - лекарственные препараты: пентоксифиллин, кофеин бензоат натрия, эуфиллин, этамзилат, а также производные ксантина, впервые синтезированные на кафедре фармацевтической химии Башкирского государственного медицинского университета [4; 5].
Методы исследования
Исследование влияния на функциональную активность тромбоцитов проводили in vitro по методу Born на агрегометре «Thromlite-1006A» на донорской крови человека [8]. Метод основан на регистрации изменения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы до и после введения индуктора агрегации тромбоцитов. В качестве индуктора агрегации использовали коллаген в концентрации 5 мкг/мл, производства «Технология-Стандарт», г. Барнаул (рис. 1А). Определение активности исследуемых производных проводили в концентрации 2×10-3 М/л. При анализе агрегатограмм обращали внимание на спонтанную агрегацию тромбоцитов, вызванную введением исследуемого вещества в плазму, рассчитывали степень подавления или усиления агрегации под действием производных ксантина, оценивали дезагрегационный эффект соединений [6].
Исследование антикоагуляционной активности проводили in vitro стандартными коагуляционными методами на турбометрическом гемокоагулометре Solar CGL 2110 на донорской крови человека. Проводилось определение активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ), протромбинового времени (ПВ) и концентрации фибриногена по A. Clauss [7]. Определение антикоагуляционной активности исследуемых производных проводили в конечной концентрации 10-3 г/мл.
Препараты сравнения: в качестве антикоагулянта использовали «Гепарин натрия» (производство ОАО «Синтез», Россия), в качестве проагреганта - этамзилат (ООО «Опытный завод «ГНЦЛС», Украина), в качестве антиагрегантов - пентоксифиллин, кофеин-бензоат натрия, эуфиллин (ОАО «Дальхимфарм», Россия). Определение влияния на функциональную активность тромбоцитов и плазменный компонент гемостаза проводили на 6 пробах крови разных доноров для каждого соединения. Данные показателей статистически обрабатывали с применением t-критерия Стьюдента.
Обсуждение результатов
Результаты исследования влияния производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Влияние производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов
|
№ п\п |
Шифр |
Коллаген-индуцированная агрегация тромбоцитов в присутствии соединения (% к контролю) |
|
|
Р-14 |
73,9±2,2 |
|
|
Р-15 |
81,4±2,4 |
|
|
Р-16 |
98,9±1,2 |
|
|
Р-18 |
97,4±2,3 |
|
|
С-58 |
104,3±1,9 |
|
|
С-41 |
106,5±2,3 |
|
|
С-53 |
102,3±1,7 |
|
|
Кофеин-бензоат натрия |
94,7±1,2 |
|
|
Эуфиллин |
97,5±1,3 |
|
|
Трентал |
100,0±0,0 |
|
|
Этамзилат |
103,2±1,4 |
|
Примечание: данные достоверны (р<0,05).
Из данных таблицы 1 видно, что все производные ксантина в данной концентрации оказывают различное влияние на функциональную активность тромбоцитов. Среди препаратов сравнения наибольшую активность оказал кофеин-бензоат натрия. При предварительной инкубации кофеин-бензоата натрия в обогащенной тромбоцитами плазме в течение 3 минут происходило снижение агрегации в среднем на 5,3% относительно контроля (рис. 1Б). Пентоксифиллин, подавляющий в данной концентрации АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов на 50,0% [4], на коллаген-индуцированную агрегацию влияния не оказывал.
А. Б.
Рисунок 1. Агрегация тромбоцитов: А - индуцированная коллагеном (контроль); Б - в присутствии кофеин-бензоата натрия.
Среди впервые синтезированных производных ксантина наибольшую антиагрегационную активность проявило соединение Р-14 и Р-15. Введение 2×10-3 М/л вещества в кювету агрегометра за 3 мин до индуктора приводит к подавлению агрегации тромбоцитов в среднем на 26,1% и 18,6% относительно контроля (рис. 2А и 2Б). Это превышает показатели антиагрегационной активности препаратов сравнения.
А. Б.
Рисунок 2. Агрегация тромбоцитов: А - в присутствии Р-14; Б - в присутствии Р-15.
Среди новых производных ксантина ряд соединений проявил выраженное проагрегантное действие. При предварительной инкубации С-58 и С-41 в обогащенной тромбоцитами плазме в течение 3 минут коллаген-индуцированная агрегации усиливалась в среднем на 4,3% и 6,5% относительно контроля (рис. 3А и 3Б). Это превышает показатели препарата сравнения этамзилата.
А. Б.
Рисунок 3. Агрегация тромбоцитов: А - в присутствии С-58; Б - в присутствии С-41.
Результаты исследования влияния соединений на плазменный компонент гемостаза представлены в таблице 2.
Таблица 2 - Влияние производных ксантина на плазменный компонент гемостаза
|
№ |
Шифры соединений |
АПТВ, % к контролю |
ПВ, % к контролю |
Фибриноген, % к контролю |
| 1. |
С-41 |
102,7±1,0 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
| 2. |
С-53 |
101,4±1,2 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
| 3. |
С-58 |
102,4±0,7 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
4. |
Р-14 |
110,3±1,5 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
5. |
Р-15 |
107,1±1,5 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
6. |
Р-16 |
102,8±0,9 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
7. |
Р-18 |
103,1±1,3 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
8. |
Гепарин |
154,7±3,7 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
Примечание: данные достоверны (р<0,05).
Соединения показали различное влияние на плазменный компонент гемостаза, проявляющееся изменением показателя внутреннего пути свертывания крови - АПТВ. На показатели ПВ и концентрацию фибриногена в данной концентрации значимого влияния соединений не регистрировалось.
Среди впервые синтезированных производных ксантина найдены соединения, превосходящие по антиагрегационной активности и проагрегантному эффекту ряд применяемых в настоящее время препаратов. Кроме этого, соединения оказывают влияние и на плазменный компонент гемостаза. Полученные результаты свидетельствуют о более широком антитромботическом и гемостатическом потенциале новых производных ксантина, что в очередной раз убеждает в необходимости и актуальности дальнейших исследований среди производных ксантина.
Рецензенты:
- Фазлыев М.М., д.м.н., профессор, начальник госпиталя ФГУ здравоохранения «Медико-санитарная часть Министерства внутренних дел по Республике Башкортостан», г. Уфа.
- Никитина И.Л., д.м.н., профессор, директор филиала ФГУ «Консультативно-методический центр лицензирования» Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития по Республике Башкортостан, г. Уфа.
Работа получена 23.11.2011