Развитие стресса сопровождается интенсификацией образования продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), снижением антиоксидантного резерва организма, а, следовательно, и нарушением баланса в этой важнейшей гомеостатической системе. Усиление процессов ПОЛ вызывает повреждение на клеточном и субклеточном уровнях, что приводит к структурным и функциональным нарушениям различных органов и тканей, получившим название окислительный стресс  [2].

В настоящее время эндогенная опиоидная система (ЭОС) рассматривается как ведущий компонент антистрессорной системы организма [9]. В частности, опиоидные пептиды (ОП) подавляют выработку АКТГ, глюкокортикоидов и катехоламинов при стрессе, уменьшают тяжесть постстрессорных нарушений в различных органах и тканях [5]. Показано существование, по крайней мере, трех основных типов опиоидных рецепторов (ОР), для которых установлены селективные агонисты. Роль отдельных компонентов ЭОС в регуляции проксидатно-антиоксидантного баланса остается малоизученной.

Цель работы - сравнительный анализ влияния селективных агонистов ОР различных типов на состояние процессов ПОЛ в различные периоды после стрессорного воздействия.

Материал и методы исследования

Работа выполнена на 104 крысах-самцах линии Вистар. Животные были разделены на 13 групп по 8 крыс в каждой. 8 животных оставались интактными. Остальным моделировали 6-часовой иммобилизационный стресс путем фиксации животного на спине на специальном столике. Животных выводили из эксперимента спустя 39 часов, 4 и 7 суток после окончания иммобилизации. Выбор указанных сроков обусловлен данными литературы о том, что максимальные повреждения внутренних органов развиваются в конце стадии тревоги (39 часов после стресса), а в начале стадии резистентности (на 4 сутки) и через 7 суток после окончания иммобилизации наглядно проявляются компенсаторные процессы в поврежденных органах [1].

Исследования проводили с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986).

О состоянии процессов ПОЛ судили по содержанию в плазме крови промежуточных и конечных продуктов этих реакций: ацилгидроперекисей (АГП) и малонового диальдегида (МДА), а также активности ферментов антиоксидантной системы: супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы, которую оценивали традиционными методами [3, 4, 7].

В работе использованы селективные агонисты ОР в эквимолярных дозах: DAGO (агонист мю-рецепторов) в дозе 6,3 мкг/кг , DSLET (агонист дельта-рецепторов) в дозе 10 мкг/кг, динорфин А (1-13) (агонист каппа-рецепторов) в дозе 20,1 мкг/кг [5]. Пептиды вводили внутрибрюшинно ежедневно 1 раз в сутки в течение 5 дней после проведения иммобилизации в объеме 0,2 мл. Животные, которых выводили из эксперимента через 39 часов после воздействия, получали 2 инъекции исследуемых пептидов, а крысы, которых выводили из эксперимента на 4 сутки, - 4 инъекции. Контрольным животным аналогично вводили физраствор.

Статистическую значимость различий средних величин вычисляли по t-критерию Стьюдента после проверки нормальности распределения изучаемых параметров.    

Результаты исследования и их обсуждение

Установлено, что 6-часовой иммобилизационный стресс сопровождается усилением процессов ПОЛ, что проявляется повышением концентрации в плазме крови промежуточных и конечных продуктов: АГП и МДА, через 39 часов и 4 суток. Также отмечается снижение активности каталазы на протяжении всего эксперимента (таблица 1).

Таблица №1  Влияние опиоидных пептидов на содержание малонового диальдегида и ацилгидроперекисей, активность ферментов антиоксидантной системы в плазме крови крыс в разные сроки после иммобилизации

Показатель Исследуемая группа	Срок после иммобилизации	Содержание малонового диальдегида,мкмоль/л,(M±m)	Содержание ацилгидроперекисей, условные единицы, (M±m)	Активность каталазы, мкат/л,(M±m)	Активность супероксиддисмутазы, условные единицы/мл,(M±m)
Интактная группа		2,25±0,35***	0,28±0,03***	14,29±0,23***	1,39±0,04*
Контрольная группа	39 ч.	5,98±0,35	0,77±0,04	11,01±0,55	1,55±0,05
	4 суток	4,56±0,30	0,45±0,03	10,86±0,25	1,47±0,05
	7 суток	2,91±0,36	0,35±0,03	11,59±0,29	1,36±0,03
Группа, получавшая DAGO в дозе 6,3 мкг/кг	39 ч.	4,36±0,21**	0,43±0,04***	13,68±0,48**	1,75±0,04**
	4 суток	4,12±0,14	0,32±0,03***	14,18±0,31***	1,72±0,05**
	7 суток	2,68±0,16	0,31±0,03	12,08±0,34	1,52±0,03**
Группа, получавшая DSLET в дозе 10 мкг/кг	39 ч.	4,79±0,31***	0,56±0,03***	15,04±0,34***	1,79±0,06**
	4 суток	2,87±0,12***	0,30±0,03***	14,90±0,35***	1,72±0,06*
	7 суток	2,69±0,23	0,24±0,04***	17,55±0,44***	1,44±0,07
Группа, получавшая динорфин А (1-13) в дозе 20,1 мкг/кг	39 ч.	5,57±0,31	0,68±0,03	11,63±0,44	1,59±0,05
	4 суток	4,14±0,17	0,32±0,02**	12,71±0,54	1,56±0,02
	7 суток	2,66±0,19	0,30±0,03	16,00±0,31***	1,28±0,04

Примечание: * - p<0,05 по сравнению с контрольной группой;

 **- p<0,01 по сравнению с контрольной группой;  *** p<0,001 по сравнению с контрольной группой.  (Интактная группа сравнивалась с контрольной - 39 часов).

 

Применение ОП снижало степень активации ПОЛ и предупреждало падение активности каталазы. Наиболее выраженным стресс-лимитирующим действием обладал агонист опиоидных дельта-рецепторов DSLET, что проявлялось нормализацией содержания АГП и МДА уже на 4 сутки эксперимента. Также этот пептид предупреждал падение активности каталазы.

Влияние агониста опиоидных мю-рецепторов DAGO было наиболее выражено через 39 часов после моделирования стресса. Именно в этот период пептид вызывал наиболее выраженное по сравнению с другими ОП снижение содержания АГП и МДА.

Минимальное стресс-лимитирующее действие проявлял селективный агонист опиоидных каппа-рецепторов динорфин А (1-13). Он вызывал уменьшение концентрации АГП через 4 суток после окончания стрессирующего воздействия и повышение активности каталазы на 7 сутки эксперимента.

Использованные в работе пептиды являются селективными агонистами трех основных классов ОР. В настоящее время установлено, что эффект ОП зависит от их способности проникать через гемато-энцефалический барьер (ГЭБ). На основании литературных данных [6] можно утверждать, что в использованных нами дозах изучаемые пептиды не проникают через ГЭБ, а, значит, их эффекты объясняются взаимодействием с периферическими рецепторами. В нашей работе продемонстрировано выраженное антиоксидантное действие селективных мю- и дельта-агонистов. При этом выявлены особенности такого влияния. Если эффект DAGO более выражен в начальном периоде стресса, то действие DSLET носит более пролонгированный характер. Возможно, эти различия связаны с устойчивостью исследованных пептидов к специфическим и неспецифическим пептидазам [8].  Полученные нами результаты позволяют говорить о высокой эффективности использования агонистов мю- и дельта-ОР для подавления постстрессорной активации ПОЛ.

Выводы

1. ОП DSLET и DAGO снижают содержание продуктов ПОЛ и повышают активность каталазы в плазме крови при иммобилизационном стрессе.
2. ОП динорфин А (1-13) оказывает незначительное влияние на интенсивность ПОЛ в плазме крови при иммобилизационном стрессе.

Рецензенты:

• Бобынцев И.И., д.м.н., профессор, профессор кафедры патофизиологии Курского государственного медицинского университета, г. Курск.
• Смахтин М.Ю., д.б.н., профессор, профессор кафедры биологической химии Курского государственного медицинского университета, г. Курск.