Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,931

THE APOPTOSIS ACTIVITY CELL CYTOKINE COMPLEX OF POSTMENOPAUSAL AGES WOMEN WITH THE CLIMACTERIC SYNDROME

Коршукова О.А., Мотавкина Н.С.
У 110 женщин постменопаузального периода исследована состояния готовности к реакции апоптоза на основе учета клеток – участников CD16 (NK), CD25 – ИЛ2, CD95 (FAS-апоптоз) и основных цитокинов ИЛ-1β, ИФНγ, ФНОα в зависимости от временных параметров (возраста и продолжительности ПМП), наличия соматической и инфекционной патологии установлены колебания клеток в диапазоне нормы и преобладания многократного превышения уровня цитокинов, особенно выраженное у ФНОα.
Among 110 women in their postmenopausal period there have been studied the ability to apoptosis according to the amount of the active cells CD16 (NK), CD25 – IL2, CD95 (FAS- apoptosis). There were established the cell changes in the normal conditions and in the cytokines level prevalence (in particular TNFα) the main cytokines IL-1β, IFNγ, TNFα and their dependent from the temporality (ages and PMP length), during the somatic and infection pathology.

Апоптоз, по образному выражению А.Н. Маянского с соавт. (1995) является началом будущего, то есть прогнозирует предстоящие события в здоровье человека и, прежде всего, в его иммунной системе.

Апоптоз представляет собой весьма сложную комплексную систему, в процессе функциональной реализации которой, принимают участие многие клеточные факторы и механизмы (Ярилин А.А., 1997). Среди них наиболее важное значение имеют разные кластерные варианты лимфоцитов с их распознающими механизмами (NK или CD16), активационным назначением (CD25 и CD8) и сигнальной системы (CD95-FAS). Вспомогательную, а в ряде случаев основную роль играют некоторые цитокины ИЛ-1, ИЛ-2, ФНОα, ИНФγ.

Инициирующую функцию за счет распознания клеток-мишеней и их подготовки к апоптотическому финалу с помощью секретируемых ими порфиринов и энзимов с последующей активацией ферментов типа каспаз выполняют естественные или натуральные киллеры (NK или CD16). Сигнальная функция на всем протяжении апоптотической реакции и, особенно, на ее заключительном этапе принадлежит CD95 (FAS-апоптоз) лимфоцитам.

Совокупность перечисленных клеток и цитокинов ответственна за рост и дифференцировку клеток организма, распознавание и уничтожение трансформированных и отживших клеток. Иными словами, апоптоз-одна из важнейших иммунологических реакций, ведущих к изъятию ненужных клеточных элементов и обновлению тканевого ресурса. Состояние последнего для стареющего увядающего организма женщин, в котором одна за другой выходят из строя различные реактивные системы (гормональная, иммунная и др.) имеет важное не только медицинское, но и социально-экономическое значение, поскольку женщина ПМП продолжает трудиться и на производстве, и в быту, а в силу большей на 10-15 лет, продолжительности жизни по сравнению с мужчинами является одной из главных состовляющих производственных трудовых ресурсов.

Цель сообщения заключается в анализе и оценке состояния участников апоптозного клеточного и цитокинового комплекса у женщин постменопаузального возраста с климактерическим синдромом.

Материалы и методы: Под нашим наблюдением находилось 110 женщин в возрасте от 40 до 65 лет, страдающих климактерическим синдромом (КС). У 51 из них постменопаузальный период продолжался 1-5 лет, у 33-6-10 лет, особую группу составили 26 женщин с хирургической менопаузой. Контрольная группа состояла из 20 здоровых женщин от 38 до 50 лет, без КС.

В клиническом аспекте у больных чаще отмечалась гипертензия и гипертоническая болезнь (29%), несколько реже- (20%) нейро-циркуляторная дистония (НЦД), еще реже хронический панкреатит (15%), язвенная болезнь желудка (11:%) и ИБС (11%), несколько чаще (13%) стенокардия. Сахарный диабет выявлен у 6% обследованных. В 38,8% у женщин с КС обнаружены урогенитальные инфекции группы ИППП.

Тяжесть клинического течения КС была неоднозначной: в 48% она была тяжелой, в 36% - средней тяжести, в 16% - легкой.

В качестве материала для исследования служила кровь женщин постменопаузального возраста. Из полученного отцентрифугированного субстрата готовили мазки в 2х экземплярах и после фиксации одни из них окрашивали по Романовскому - Гимза, второй - обрабатывали флюоресцированной моноклональной иммунной сывороткой к CD- рецепторам лимфоцитов производства ООО «Препарат» (Н. Новгород), после чего подвергали простому микроскопическому и иммуно-флюоресцентному анализу. Общее количество лимфоцитов определяли традиционно, цитокины в сыворотках крови - методом твердофазного ИФА с набором диагностических систем «Веста» производства СПб и Новосибирска.

В материале (лимфоциты, сыворотки крови) определяли клетки, причастные к апоптозу - CD16 (NK), CD25, CD95 (FAS апоптоз), CD8. Из цитокинов были избраны ИЛ-1β, ИНФ-γ, ФНОα. При этом все данные анализировались с учетом возраста, продолжительности ПМП, тяжести КС, клинической формы заболеваний, при инфекционных дополнительно-вид возбудителей болезни. Этиология последних устанавливалась в специализированных лабораториях ПКДЦ и «Асклепий» методами ИФА и ПЦР.

Результаты и их обсуждение

Проводимый анализ первоначально включал временные параметры - возраст обследуемых и продолжительность климактерического синдрома. Особое положение занимала хирургическая менопауза, которая устанавливалась оперативно и полностью исключала адаптивные периоды. Результаты исследования влияния фактора времени на клеточное обеспечение апоптоза и общая кластерная характеристика лимфоцитов, участвующих в нем либо опосредовано как источник цитокинов, либо в виде исполнителей, представленных в табл. 1

Так, уровень инициаторов апоптотических реакций-клеток CD16 (NK) были во все возрастные периоды ближе к нижнему пределу нормы за исключением самого старшего возраста, в 60 и более лет, а так же в 50-55 лет. Этот контингент имел их в предельно низкой концентрации, правда, не выходящей за ее границу. Однако, в промежуток 55-60 лет этот показатель был довольно высоким, но верхней границы нормы не достигал.

Уровни клеток CD25, активированные ИЛ-2, в возрасте 45-60 лет колебались в пределах нормы, а в самой старшей группе резко снизились, (9,8±4,0%), даже не достиг нижней границы нормы.

Наибольшее благополучие было отмечено в концентрации CD95 (FAS-апоптоз). Она ни разу не опустилась ниже нормы, а у лиц 55-60 лет лишь несколько отставала от нее.

Подобная направленность в изменении уровня участников апоптоза, реализующих апоптозную реакцию организма, но с меньшей выраженностью обнаружены и при разной продолжительности ПМП. Однако этого следовало ожидать, так как временные параметры сдвигаются синхронно.

Более существенные сдвиги отмечены в зависимости от формы патологии - соматической и инфекционной. Это отражено в табл. 2.

Таблица 1. Клеточный спектр обеспечения общего иммунитета лимфоцитами - участниками апоптоза у женщин в ПМП с учетом временных параметров - возраста и длительности КС

Показатели

Апоптоз

СД16

СД25

СД95

Возраст в годах

45 - 50

15,3±5,0*

17,8±3,7***

24,4±5,0

50 - 55

14,4±4,5

14,7±7,0

18,5±7,2

55 - 60

18,2±3,7

14,5±7,0

36±3,7

60 и более

13±4,2

9,8±7,0

14,2±4,2

Средний уровень

15,2±4,3

14,2±6,2

23,2±5,0

Длительность ПМП в годах

1-5

14,8±4,9

15,4±5,0

23,7±5,9

6-10

11,8±4,5**

6,2±4,1

21,3±7,1

Хирургическая менопауза

16,2±7,2

16,6±7,3

20,2±7,8

Средний уровень

14,3±5,5

12,7±5,5

21,7±6,9

Норма

10-23

10-28

10-45

Разница с нормой: *-р<0,05;**-р<0,01, ***р<0,05

Таблица 2. Клеточный спектр общего иммунитета и участников апоптоза у женщин в ПМП с разными видами патологии.

Показатели

Апоптоз

СД16

СД25

СД95

Соматическая патология

Гипертоническая болезнь

12,8±5,9

11,5±5,6

18,8±6,9

Нейро-циркуляторная дистония

8,5±5,4*

7,8±5,2*

8,8±5,5*

Хрон. панкреатит

14,6±7,4

12,4±7,0

25,4±9,3

Сахарный диабет

18,5±15,9

16,0±15,0

39,7±5,5

Язвенная болезнь желудка

11,4±9,1

9,9±8,6*

13,6±3,6

ИБС (стенокардия)

10,2±8,7

7,7±7,7*

18,9±1,0

Средний уровень

12,7±3,1

10,8±3,1

20,8±8,9

Инфекционная патология

 

Уреаплазмоз

16,2±4,5

12,7±8,1

16,4±8,2

Хламидиоз

14,4±7,5

14,0±7,4

16,0±7,8

Гарднереллез

13,0±12,7

10,4±9,2

19,2±14,8

Кандидоз

19,0±15,0

14,6±2,65

26±16,5

Герпес

19,6±18,6

19,3±18,7

30,5±23,0

Средний уровень

16,4±11,7

14,2±9,2

16,4±14,0

Норма

10-23

10-28

10-45

         

Разница с нормой: *-р<0,05;**-р<0,01

При соматической патологии в отношении CD4-хелперов, уровень CD16 лимфоцитов был в основном ближе к нижней границе нормы, а при нейро-циркуляторной дистонии - ниже ее. То же выявлено по отношению к уровню CD25, но здесь добавился низкий уровень клеток этого типа при язвенной болезни. В отношении клеток CD95 выявлено сравнительное благополучие, за исключением группы с НЦД и чуть лучше-с язвенной болезнью желудка.

При инфекционной патологии, передающийся половым путем, во всех случаях показатели содержания участников апоптоза за пределы нормы не выходили. Однако, уровень CD16 предпочитал более высокое содержание при кандидозе и герпесе, CD25 - только при герпесе и предельно низкий при гарднерелезе, CD95 - высокий при герпесе, кандидозе, гарднерелезе.

Таким образом, обеспечение клеточным составов главных участников апоптоза было у обследованных женщин весьма благоприятным, что вселяет надежду и на своевременность очищения их организма от трансформированных и нежизнеспособных клеточных отходов, и на обновление клеточно-тканевого состава с его хорошей дифференцировкой.

Вместе с тем, как уже говорилось, апоптотический эффект зависит не только от самих исполнителей, но и от медиаторов межклеточного взаимодействия, в частности, цитокинов. В их числе нами были изучены ИЛ-1β, ИФНγ, ФНОα. Результаты исследования отражены в табл. 3.

Таблица 3. Уровень цитокинов-участников апоптоза у женщин разного возраста в ПМП с учетом временных параметров - возраста и длительности КС.

Показатели

Уровень цитокинов в нг/мл

ИЛ-1β

ИФН-γ

ФНО-α

Возраст в годах

45 - 49

50,71±5,6*

51,0±5,6**..

33,1±5,2***...

50 - 55

33,6±5,3

34,76±5,2

41,2±5,5***...

56 - 60

39,0±5,4

34,76±4,9

41,2±5,6***...

61 и >

9,15±3,1**

43,3±5,1**.

40,303±5,5***...

Средний уровень

33,2±4,85**

40,955±5,2

38,95±5,45***...

Длительность ПМП

1-5 лет

29,2±5,4

32,9±5,6

20,91 ±4,0**

6-10 лет

23,0±5,4

52,6±5,9

31,66±5,8**

>10 лет

13,8±4,0*

48,7±6,0**

36,8±0,9**

хирургическая

менопауза

27,2±5,3

44,0±5,2**

41,7±5,0***

Средний уровень

24,6±5,1**

44,4±5,5*

23,5±4,3

Норма

11,67±1,9

32,64±3,51

6,89±0,25

Различия с нормой: *р<0,05, **р<0,01

Анализ проведенных наблюдений с учетом временных параметров (табл. 3) показал значительное превышение уровня нормы цитокина ИЛ- 1β, причем, как в разных возрастных группах, так и при неодинаковой продолжительности ПМП. Исключением явилось самая старшая, более 61 года, где их уровень составил всего 9,15±3,1 нг/мл против 11,67±1,9 нг/мл в норме, и больные с длительностью КС >10 лет (всего 13,8±5,4 нг/мг).

Интерферон ИФНγ по своему содержанию мало отличался от средней возрастной величины во все периоды КС, кроме начального (45-49 лет) и самого старшего (61 год и старше), когда оно было наибольшим при продолжительности более 10 лет (44,4±5,5 нг/мл против 32,64±3,51 нг/мл).

Наиболее выраженными оказались преобразования ФНОα. Во всех обследованных группах этот цитокин-фактор некроза опухолей - превышал норму в 6-7 раз.

Таблица 4. Панорамный уровень цитокинов у женщин разного возраста в ПМП с разными видами патологии

Показатели

Уровень цитокинов в нг/мл

ИЛ-1β

ИФН-γ

ФНО-α

Соматическая патология

Гипертон. болезнь, гипертензия

30,01±1,8

23,5±3,7

34,37±6,5

Нейро-циркуляторная дистония

26,7±2,1

43,6±3,5

33,93±6,5

Узловатый зоб, тиреотоксикоз

49,1±4,0

35,7±2,9

44,4±6,9

Хронический панкреатит

32,3±1,7

41,7±3,5

25,7±3,5

Сахарный диабет

39,5±2,4

61,3±6,8

31,1±6,5

ИБС

9,15±1,3

55,7±8,0

39,2±6,6

Средний уровень

23,3±5,4

85,9±13,0

62,0±9,0

Хламидиоз

21,2±4,7

30,6±6,8

28,8±6,4

Кандидоз

19,2±4,2

23,6±5,2

39,4±5,2

Уреаплазмоз

24,3±5,4

49,9±11,1

14,4±3,4

Герпес

30,5±6,8

45,0±10,0

29,2±6,5

Средний уровень

23,8±5,32

37,2±8,3

28,2±6,3

Норма

11,7±1,9

32,64±3,5

6,89±0,25

Особенности концентрации цитокиноа при соматической и инфекционной патологии у женщин в ПМП повторили тенденции, представленные выше. Их уровни были намного, но не однозначно выше нормы.

Так, уровень ИЛ-1β при разных инфекциях оказался больше нормы, зарегистрированной у здоровых от 2 до 3 раз, при соматических болезнях - до 4-5 раз (соответственно при сахарном диабете и узловом зобе).

Уровень ИФНγ был также больше нормы, но превышал ее в меньшей степени.

Особенно высоким оказался уровень ФНОα. Он был выше от 2 до 6 раз.

Таким образом, из отмеченных закономерностей следует подчеркнуть наибольшее участие в апоптозе последнего вида цитокина - фактора некроза опухолей, ФНОα. Второе место следует отдать ИЛ-1β и третье - ИФНγ. Но при этом следует отметить, что при некоторых нозоформах болезней эти закономерности меняются. Например, при общем повышенном уровне ИЛ-1β у больных ИБС имело место заметное понижение этого цитокина. Очевидно, в определенной степени уровень цитокинов зависит от общей реактивности организма и от особенностей патогенеза их патологии.

Заключение

Для постменопаузального периода, сопровождающего климактерическим синдром, весьма характерна хорошая подготовленность организма женщин к удалению нежизнеспособных клеток, так и их обновлению, замене, дифференцировке в процессе апоптотической реакции. Последняя хорошо обеспечена клетками-участниками CD16 (NK), CD25 - ИЛ2, CD95 и необходимыми цитокинами ИЛ-1β, ИФНγ, ФНОα.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

  1. Маянский А.Н. Апоптоз. Начало будущего. // А.Н. Маянский, Н.А. Маянский, М.А. Абаджидн, М.И. Заславская/ Ж. микробиология, 1997, №2, с.88-94.
  2. Ярилин А.А. Апоптоз и его место в иммунном процессе.// А.А. Ярилин./ Ж. иммунология, 1996, №6, с. 10-20.
  3. Ярилин А.А. Основы иммунологии. - Москва, «Медицина», с. 308-315.