Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,931

RESEARCH INTO ACUTE TOXICITY OF PHYTOCARDIN

Goncharov N.F. 1 Avidzba Yu.N. 2 Mikhaylov I.V. 1
1 Kursk State Medical University, Kursk
2 National University of Pharmacy, Kharkov
Продолжая исследования комплексного препарата Фитокардин, в состав которого входят субстанции эналаприла гидрохлорида, индапамида, настойки пустырника, боярышника и шишек хмеля, изучена токсичность в острых опытах на трех видах животных: крысах, мышах и кроликах при внутрижелудочном пути введения и мышах – при внутрибрюшинном пути введения. Установлено, что при однократном внутрижелудочном введении препарат не оказывает общетоксических эффектов и относится к практически не токсичным веществам; при внутрибрюшинном пути введения – высокотоксичным веществам. Исследования проведены с использованием визуального, инструментального и лабораторного контроля за состоянием животных, современных гематологических, биохимических и морфологических методов оценки действия препаратов.
Continuing researches of a complex preparation Fitokardin which structure includes substances Enalapryl hydrochloride, Indapamyd, tinctures Leonuri, a hawthorn and hop cones, toxicity in sharp experiences on three kinds of animals is studied: rats, mice and rabbits at an intragastric way of introduction and mice – at introduction in a peritoneum. It is established that at unitary intragastric introduction the preparation doesn´t render toxic effects and concerns to almost not to toxic substances; at introduction in a peritoneum – to highly toxic substances. Researches are spent with use of visual, tool and laboratory control over a condition animal, modern hematological, biochemical and morphological methods of an estimation of action of preparations.
preclinical pharmacological trial
low-dose combined medication
acute toxicity
hypertensive effect.
В настоящее время создан мощный арсенал гипотензивных средств, но дозы некоторых из них достаточно велики. Сочетание препаратов различных групп дает возможность значительно снизить дозировку каждого из них при тождественном эффекте монопрепаратов [2, 4]. Фитокордин включает в себя, помимо синтетических производных, извлечения из ряда растений, обладающих кардиотонической направленностью, что расширяет спектр его терапевтического действия и определенно влияет на уменьшение дозировки индопамида и эналоприла гидрохлорида [1, 3].

Цель работы

Определение острой токсичности комплексного низкодозового препарата, обладающего гипотензивным эффектом, в сочетании с умеренным антиаритмическим.

Материалы и методы

Продолжая исследование комплексного препарата Фитокардин, в состав которого входят субстанции эналаприла гидрохлорида, индапамида, настойки пустырника, боярышника и шишек хмеля, нами изучена токсичность препарата Фитокардин (раствора для перорального применения) в острых опытах на трех видах животных: крысах, мышах и кроликах при внутрижелудочном пути введения и мышах - при внутрибрюшинном пути введения [5].

Опыты проводили на нелинейных беспородных белых крысах массой тела: самцы 305-330 г, самки 245-255 г; на нелинейных беспородных белых мышах массой 20-24 г и кроликах породы «Шиншилла»  массой 3,0-3,7 кг. В каждой экспериментальной группе при внутрижелудочном введении насчитывалось по 5 самок и 5 самцов (крысы и мыши), кроликов - по 2 самки и 2 самца. При внутрибрюшинном введении по 6 мышей в каждой группе. Всего в эксперименте использовано: 10 крыс, 40 мышей и 4 кролика.

Фитокардин вводили в максимально допустимых объемах для каждого вида животных. При внутрижелудочном введении исследуемый препарат вводили крысам в дозе 10,0 мл/кг, мышам - 5,0 мл/кг и кроликам - 2,0 мл/кг. Внутрибрюшинно токсичность препарата в опытах на мышах оценивали в диапазоне доз от 0,063 мл/кг до 0,35 мл/кг.

Оценку токсического воздействия исследуемого препарата на организм экспериментальных животных проводили по клинической картине интоксикации и выживаемости животных. При внутрижелудочном введении препарата регистрировали в динамике массу тела у крыс - 0, 3, 7 и 14 сутки, у мышей - 0, 7 и 14 сутки, кроликов - 0 и 14 сутки. Биохимические показатели сыворотки крови, характеризующие функциональное состояние печени крыс: содержание общего белка, альбумина и показатель тимоловой пробы определяли до начала опыта и на 14 сутки. Содержание общего белка определяли биуретовым методом; альбумин - по реакции с бромкрезоловым зеленым (диагностические наборы «Филисит Диагностика», Украина, сер. 10704 и 20604); показатель тимоловой пробы - по диагностическим наборам «Филисит Диагностика», Украина, сер. 20604.

Наблюдение за животными проводили в течение 14-ти суток. На 14-й день крыс и мышей забивали методом щадящей декапитации, вскрывали по F. Rое, оценивали макроскопическое состояние внутренних органов и систем. В группе крыс и мышей, которым исследуемый препарат вводили внутрижелудочно, определяли абсолютную и относительную массу внутренних органов. Полученные цифровые данные обрабатывали статистически с использованием t- критерия Стьюдента.

Результаты и их обсуждение

Внутрижелудочное введение крысам препарата Фитокардин в дозе 10 мл/кг вызвало следующую картину клинической интоксикации: через 3-5 минут после введения препарата дыхание у животных учащенное, они сидят неподвижно, нахохлившись. Спустя 20-30 минут дыхание становится более глубоким, крысы находятся в заторможенном состоянии, глаза у всех животных закрыты. Воздействие тактильных и звуковых раздражителей вызывает слабую ответную реакцию. Через 40-50 минут после введения препарата состояние животных не изменилось и сохранялось в течение 3,5-4,5 часов. Из данного состояния животные выходят постепенно: перемещения по клетке редки и замедленны, на раздражители реагируют. Спустя 5,5-6 часов после введения препарата крысы активно умываются, пьют воду и принимают пищу.

Подобные симптомы картины клинической интоксикации отмечались при введении исследуемого препарата мышам в дозе 5,0 мл/кг. В отличие от крыс, снижение двигательной активности у мышей наступило через 10-15 минут, а период неподвижности - через 60-70 минут и длился в течение 4-4,5 часов. Спустя 5 часов состояние животных удовлетворительное, охотно поедали корм и пили воду.

Введение препарата кроликам в дозе - 2,0 мл/кг подействовало на животных успокаивающе. Животные в течение дня вели себя очень спокойно, слабо реагировали на тактильные и звуковые раздражения.

При внутрибрюшинном введении препарата мышам в дозе 0,063 мл/кг через 30-40 минут у животных наблюдалось состояние возбуждения, дыхание учащенное. Спустя 1 час животные находились в заторможенном состоянии, передвижения по клетке ограничены. У части животных регистрировалась шаткая походка и слабая реакция на внешние раздражители. Отмеченные симптомы сохранялись в течение 3-4 часов.

Внутрибрюшинное введение препарата мышам в дозе 0,1 мл/кг через 10-15 минут вызвало у животных состояние возбуждения, которое через 20-30 минут сменилось состоянием покоя и заторможенности. Животные вяло передвигаются по клетке, слабо реагируют на тактильные и звуковые раздражители. Спустя 45-50 минут все животные лежат на животе, дыхание глубокое, на раздражители не реагируют. Данное состояние отмечалось в течение 5-6 часов. Затем, животные начали слабо реагировать на раздражители, медленно передвигаются по клетке, пытаются пить воду. На третьи сутки погибла одна мышь.

Последующее наблюдение за животными всех групп не выявило изменений в общем состоянии опытных животных: состояние шерстного покрова, слизистых глаз, поведение животных, потребление пищи и воды не имело отличий от интактных животных.

Внутрибрюшинное введение препарата в более высоких дозах вызывало более выраженную картину интоксикации, которая имела дозозависимый характер. Так, при введении препарата в дозе 0,16 мл/кг клинические признаки интоксикации проявлялись через 10-15 минут. Гибель животных отмечалась на 2-е сутки.

При введении животным препарата в дозах 0,25 мл/кг и 0,35 мл/кг стадия возбуждения наступала через 1-5 минут. У мышей отмечались судороги, парез задних конечностей. В течение первых суток от дозы 0,25 мл/кг отмечалась гибель 4 мышей, от дозы 0,35 мл/кг погибли все животные.

Влияние Фитокардина на массу животных представлено в таблицах 1-3.

Таблица 1 Изменение массы тела мышей при однократном введении препарата Фитокардин в дозе 5,0 мл/кг

Периоды наблюдения, сут.

Путь введения

Масса мышей, г

 

внутрижелудочно

Самцы

Самки

0

-"-

22,36 ± 0,22

18,82 ± 0,11

5

-"-

22,48 ± 0,41

19,38 ± 0,19

14

-"-

24,54 ± 0,421

21,54 ± 0,291

Примечание: 1 - р ≤ 0,05 относительно исходных данных

Таблица 2 Изменение массы тела крыс при однократном внутрижелудочном введении препарата Фитокардин в дозе 10,0 мл/кг

Периоды наблюдения, сут.

Путь введения

Масса крыс, г

 

 

внутрижелудочно

Самцы

Самки

0

-"-

279,00 ± 3,32

266,00 ± 4,00

3

-"-

284,00 ± 4,30

277,00 ± 6,04

7

-"-

289,00 ± 4,30

274,00 ± 3,32

14

-"-

301,00 ± 6,20

281,00 ± 5,341

Примечание: 1 - р ≤0,05 относительно исходных данных

Введение препарата крысам в дозе 10,0 мл/кг, мышам в дозе 5,0 мл/кг и кроликам в дозе 2,0 мл/кг не оказало существенного влияния на массу тела животных. Из данных наблюдений следует, что в течение периода наблюдения животные прибавили в массе по сравнению с исходными данными (таблица 3).

Таблица 3 Коэффициенты массы внутренних органов животных после однократного внутрижелудочного воздействия Фитокардин

Показатели

 

Самцы

Самки

Крысы, доза 10 мл/кг

Сердце

0,33 ± 0,012

0,35 ± 0,015

Легкие

0,73 ± 0,034

0,73 ± 0,015

Печень

2,91 ± 0,110

3,25 ± 0,040

Надпочечники

0,022 ± 0,0004

0,025 ± 0,0002

Селезенка

0,42 ± 0,060

0,30 ± 0,010

Почка: левая

0,30 ± 0,008

0,32 ± 0,012

правая

0,30 ± 0,008

0,32 ± 0,015

Яичко левое

0,40 ± 0,036

 

правое

0,48 ± 0,030

 

Тимус

0,082 ± 0,004

0,077 ± 0,007

Мыши, доза 5,0 мл/кг

Сердце

0,49 ± 0,023

0,43 ± 0,024

Легкие

0,93 ± 0,050

0,87 ± 0,052

Печень

6,53 ± 0,480

5,53 ± 0,380

Селезенка

0,82 ± 0,110

0,71 ± 0,090

Почка: левая

0,73 ± 0,015

0,68 ± 0,015

правая

0,71 ± 0,017

0,69 ± 0,015

Яичко левое

0,35 ± 0,017

-

правое

0,31 ± 0,012

-

Тимус

0,18 ± 0,012

0,17 ± 0,011

Содержание общего белка, концентрации альбумина и показатель тимоловой пробы в сыворотке крови крыс практически не изменяются по сравнению с исходными данными (таблица 4).

Таблица 4 Биохимические показатели сыворотки крови крыс при однократном внутрижелудочном введении препарата Фитокардин в дозе 10,0 мл/кг

Показатели

Пол животных

Самцы

Самки

Исходные данные

Общий белок, г/л

88,74 ± 3,44

88,57 ± 4,16

Альбумин, г/л

38,39 ± 1,05

39,11 ± 1,01

Тимоловая проба, ед.

0,46 ± 0,06

0,31 ± 0,08

14 сут.

Общий белок, г/л

76,95 ± 4,63

85,61 ± 1,72

Альбумин, г/л

35,25 ± 2,71

35,75 ± 0,821

Тимоловая проба, ед.

0,20 ± 0,021

0,20 ± 0,03

Примечание: 1 - р ≤ 0,05 относительно исходных данных

Макроскопическое исследование трупов животных не выявило изменений в их внешнем виде: состояние кожных и шерстных покровов обычное. При вскрытии внутренние органы в торакальной и абдоминальной полостях были обычными по цвету, консистенции, анатомо-топографическим параметрам. Относительная масса внутренних органов крыс и мышей, которым вводили исследуемый препарат, не выходила за пределы физиологической нормы.

Результаты проведенных исследований показали, что Фитокардин, при внутрижелудочном пути введения, относится к практически нетоксичным веществам, а при внутрибрюшинном - высокотоксичным веществам.

Выводы

  1. Результаты изучения острой токсичности показали, что внутрижелудочное введение препарата Фитокардин крысам, мышам и кроликам в дозах 10,0, 5,0 и 2,0 мл/кг соответственно гибели животных не вызывало.
  2. Внутрибрюшинное введение исследуемого препарата мышам в дозах от 0,063 мл/кг до 0,35 мл/кг позволило установить ЛД50 на уровне 0,2 мл/кг.
  3. Внутрижелудочное введение препарата Фитокардин не оказывает токсического влияния на функциональное состояние печени крыс, а также на абсолютную и относительную массу внутренних органов животных, не вызывает общетоксических эффектов и относится к практически не токсичным веществам.
  4. Препарат Фитокардин при внутрибрюшинном пути введения относится к высокотоксичным веществам.

Рецензенты:

  • Покровский М. В., д.м.н., зав. кафедрой фармакологии и фармдисциплин ИМПО, руководитель центра доклинических и клинических исследований НИИ «БелГУ», ФГАОУ ВПО Министерства науки  и образования РФ, г. Белгород. 
  • Новиков О. О., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармацевтической химии и фармакогнозии ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», фармацевтический факультет, г. Белгород.