Цель работы
Определение острой токсичности комплексного низкодозового препарата, обладающего гипотензивным эффектом, в сочетании с умеренным антиаритмическим.
Материалы и методы
Продолжая исследование комплексного препарата Фитокардин, в состав которого входят субстанции эналаприла гидрохлорида, индапамида, настойки пустырника, боярышника и шишек хмеля, нами изучена токсичность препарата Фитокардин (раствора для перорального применения) в острых опытах на трех видах животных: крысах, мышах и кроликах при внутрижелудочном пути введения и мышах - при внутрибрюшинном пути введения [5].
Опыты проводили на нелинейных беспородных белых крысах массой тела: самцы 305-330 г, самки 245-255 г; на нелинейных беспородных белых мышах массой 20-24 г и кроликах породы «Шиншилла» массой 3,0-3,7 кг. В каждой экспериментальной группе при внутрижелудочном введении насчитывалось по 5 самок и 5 самцов (крысы и мыши), кроликов - по 2 самки и 2 самца. При внутрибрюшинном введении по 6 мышей в каждой группе. Всего в эксперименте использовано: 10 крыс, 40 мышей и 4 кролика.
Фитокардин вводили в максимально допустимых объемах для каждого вида животных. При внутрижелудочном введении исследуемый препарат вводили крысам в дозе 10,0 мл/кг, мышам - 5,0 мл/кг и кроликам - 2,0 мл/кг. Внутрибрюшинно токсичность препарата в опытах на мышах оценивали в диапазоне доз от 0,063 мл/кг до 0,35 мл/кг.
Оценку токсического воздействия исследуемого препарата на организм экспериментальных животных проводили по клинической картине интоксикации и выживаемости животных. При внутрижелудочном введении препарата регистрировали в динамике массу тела у крыс - 0, 3, 7 и 14 сутки, у мышей - 0, 7 и 14 сутки, кроликов - 0 и 14 сутки. Биохимические показатели сыворотки крови, характеризующие функциональное состояние печени крыс: содержание общего белка, альбумина и показатель тимоловой пробы определяли до начала опыта и на 14 сутки. Содержание общего белка определяли биуретовым методом; альбумин - по реакции с бромкрезоловым зеленым (диагностические наборы «Филисит Диагностика», Украина, сер. 10704 и 20604); показатель тимоловой пробы - по диагностическим наборам «Филисит Диагностика», Украина, сер. 20604.
Наблюдение за животными проводили в течение 14-ти суток. На 14-й день крыс и мышей забивали методом щадящей декапитации, вскрывали по F. Rое, оценивали макроскопическое состояние внутренних органов и систем. В группе крыс и мышей, которым исследуемый препарат вводили внутрижелудочно, определяли абсолютную и относительную массу внутренних органов. Полученные цифровые данные обрабатывали статистически с использованием t- критерия Стьюдента.
Результаты и их обсуждение
Внутрижелудочное введение крысам препарата Фитокардин в дозе 10 мл/кг вызвало следующую картину клинической интоксикации: через 3-5 минут после введения препарата дыхание у животных учащенное, они сидят неподвижно, нахохлившись. Спустя 20-30 минут дыхание становится более глубоким, крысы находятся в заторможенном состоянии, глаза у всех животных закрыты. Воздействие тактильных и звуковых раздражителей вызывает слабую ответную реакцию. Через 40-50 минут после введения препарата состояние животных не изменилось и сохранялось в течение 3,5-4,5 часов. Из данного состояния животные выходят постепенно: перемещения по клетке редки и замедленны, на раздражители реагируют. Спустя 5,5-6 часов после введения препарата крысы активно умываются, пьют воду и принимают пищу.
Подобные симптомы картины клинической интоксикации отмечались при введении исследуемого препарата мышам в дозе 5,0 мл/кг. В отличие от крыс, снижение двигательной активности у мышей наступило через 10-15 минут, а период неподвижности - через 60-70 минут и длился в течение 4-4,5 часов. Спустя 5 часов состояние животных удовлетворительное, охотно поедали корм и пили воду.
Введение препарата кроликам в дозе - 2,0 мл/кг подействовало на животных успокаивающе. Животные в течение дня вели себя очень спокойно, слабо реагировали на тактильные и звуковые раздражения.
При внутрибрюшинном введении препарата мышам в дозе 0,063 мл/кг через 30-40 минут у животных наблюдалось состояние возбуждения, дыхание учащенное. Спустя 1 час животные находились в заторможенном состоянии, передвижения по клетке ограничены. У части животных регистрировалась шаткая походка и слабая реакция на внешние раздражители. Отмеченные симптомы сохранялись в течение 3-4 часов.
Внутрибрюшинное введение препарата мышам в дозе 0,1 мл/кг через 10-15 минут вызвало у животных состояние возбуждения, которое через 20-30 минут сменилось состоянием покоя и заторможенности. Животные вяло передвигаются по клетке, слабо реагируют на тактильные и звуковые раздражители. Спустя 45-50 минут все животные лежат на животе, дыхание глубокое, на раздражители не реагируют. Данное состояние отмечалось в течение 5-6 часов. Затем, животные начали слабо реагировать на раздражители, медленно передвигаются по клетке, пытаются пить воду. На третьи сутки погибла одна мышь.
Последующее наблюдение за животными всех групп не выявило изменений в общем состоянии опытных животных: состояние шерстного покрова, слизистых глаз, поведение животных, потребление пищи и воды не имело отличий от интактных животных.
Внутрибрюшинное введение препарата в более высоких дозах вызывало более выраженную картину интоксикации, которая имела дозозависимый характер. Так, при введении препарата в дозе 0,16 мл/кг клинические признаки интоксикации проявлялись через 10-15 минут. Гибель животных отмечалась на 2-е сутки.
При введении животным препарата в дозах 0,25 мл/кг и 0,35 мл/кг стадия возбуждения наступала через 1-5 минут. У мышей отмечались судороги, парез задних конечностей. В течение первых суток от дозы 0,25 мл/кг отмечалась гибель 4 мышей, от дозы 0,35 мл/кг погибли все животные.
Влияние Фитокардина на массу животных представлено в таблицах 1-3.
Таблица 1 Изменение массы тела мышей при однократном введении препарата Фитокардин в дозе 5,0 мл/кг
|
Периоды наблюдения, сут. |
Путь введения |
Масса мышей, г |
|
|
|
внутрижелудочно |
Самцы |
Самки |
|
0 |
-"- |
22,36 ± 0,22 |
18,82 ± 0,11 |
|
5 |
-"- |
22,48 ± 0,41 |
19,38 ± 0,19 |
|
14 |
-"- |
24,54 ± 0,421 |
21,54 ± 0,291 |
Примечание: 1 - р ≤ 0,05 относительно исходных данных
Таблица 2 Изменение массы тела крыс при однократном внутрижелудочном введении препарата Фитокардин в дозе 10,0 мл/кг
|
Периоды наблюдения, сут. |
Путь введения |
Масса крыс, г
|
|
|
|
внутрижелудочно |
Самцы |
Самки |
|
0 |
-"- |
279,00 ± 3,32 |
266,00 ± 4,00 |
|
3 |
-"- |
284,00 ± 4,30 |
277,00 ± 6,04 |
|
7 |
-"- |
289,00 ± 4,30 |
274,00 ± 3,32 |
|
14 |
-"- |
301,00 ± 6,20 |
281,00 ± 5,341 |
Примечание: 1 - р ≤0,05 относительно исходных данных
Введение препарата крысам в дозе 10,0 мл/кг, мышам в дозе 5,0 мл/кг и кроликам в дозе 2,0 мл/кг не оказало существенного влияния на массу тела животных. Из данных наблюдений следует, что в течение периода наблюдения животные прибавили в массе по сравнению с исходными данными (таблица 3).
Таблица 3 Коэффициенты массы внутренних органов животных после однократного внутрижелудочного воздействия Фитокардин
|
Показатели
|
Самцы |
Самки |
|
Крысы, доза 10 мл/кг |
||
|
Сердце |
0,33 ± 0,012 |
0,35 ± 0,015 |
|
Легкие |
0,73 ± 0,034 |
0,73 ± 0,015 |
|
Печень |
2,91 ± 0,110 |
3,25 ± 0,040 |
|
Надпочечники |
0,022 ± 0,0004 |
0,025 ± 0,0002 |
|
Селезенка |
0,42 ± 0,060 |
0,30 ± 0,010 |
|
Почка: левая |
0,30 ± 0,008 |
0,32 ± 0,012 |
|
правая |
0,30 ± 0,008 |
0,32 ± 0,015 |
|
Яичко левое |
0,40 ± 0,036 |
|
|
правое |
0,48 ± 0,030 |
|
|
Тимус |
0,082 ± 0,004 |
0,077 ± 0,007 |
|
Мыши, доза 5,0 мл/кг |
||
|
Сердце |
0,49 ± 0,023 |
0,43 ± 0,024 |
|
Легкие |
0,93 ± 0,050 |
0,87 ± 0,052 |
|
Печень |
6,53 ± 0,480 |
5,53 ± 0,380 |
|
Селезенка |
0,82 ± 0,110 |
0,71 ± 0,090 |
|
Почка: левая |
0,73 ± 0,015 |
0,68 ± 0,015 |
|
правая |
0,71 ± 0,017 |
0,69 ± 0,015 |
|
Яичко левое |
0,35 ± 0,017 |
- |
|
правое |
0,31 ± 0,012 |
- |
|
Тимус |
0,18 ± 0,012 |
0,17 ± 0,011 |
Содержание общего белка, концентрации альбумина и показатель тимоловой пробы в сыворотке крови крыс практически не изменяются по сравнению с исходными данными (таблица 4).
Таблица 4 Биохимические показатели сыворотки крови крыс при однократном внутрижелудочном введении препарата Фитокардин в дозе 10,0 мл/кг
|
Показатели |
Пол животных |
|
|
Самцы |
Самки |
|
|
Исходные данные |
||
|
Общий белок, г/л |
88,74 ± 3,44 |
88,57 ± 4,16 |
|
Альбумин, г/л |
38,39 ± 1,05 |
39,11 ± 1,01 |
|
Тимоловая проба, ед. |
0,46 ± 0,06 |
0,31 ± 0,08 |
|
14 сут. |
||
|
Общий белок, г/л |
76,95 ± 4,63 |
85,61 ± 1,72 |
|
Альбумин, г/л |
35,25 ± 2,71 |
35,75 ± 0,821 |
|
Тимоловая проба, ед. |
0,20 ± 0,021 |
0,20 ± 0,03 |
Примечание: 1 - р ≤ 0,05 относительно исходных данных
Макроскопическое исследование трупов животных не выявило изменений в их внешнем виде: состояние кожных и шерстных покровов обычное. При вскрытии внутренние органы в торакальной и абдоминальной полостях были обычными по цвету, консистенции, анатомо-топографическим параметрам. Относительная масса внутренних органов крыс и мышей, которым вводили исследуемый препарат, не выходила за пределы физиологической нормы.
Результаты проведенных исследований показали, что Фитокардин, при внутрижелудочном пути введения, относится к практически нетоксичным веществам, а при внутрибрюшинном - высокотоксичным веществам.
Выводы
- Результаты изучения острой токсичности показали, что внутрижелудочное введение препарата Фитокардин крысам, мышам и кроликам в дозах 10,0, 5,0 и 2,0 мл/кг соответственно гибели животных не вызывало.
- Внутрибрюшинное введение исследуемого препарата мышам в дозах от 0,063 мл/кг до 0,35 мл/кг позволило установить ЛД50 на уровне 0,2 мл/кг.
- Внутрижелудочное введение препарата Фитокардин не оказывает токсического влияния на функциональное состояние печени крыс, а также на абсолютную и относительную массу внутренних органов животных, не вызывает общетоксических эффектов и относится к практически не токсичным веществам.
- Препарат Фитокардин при внутрибрюшинном пути введения относится к высокотоксичным веществам.
Рецензенты:
- Покровский М. В., д.м.н., зав. кафедрой фармакологии и фармдисциплин ИМПО, руководитель центра доклинических и клинических исследований НИИ «БелГУ», ФГАОУ ВПО Министерства науки и образования РФ, г. Белгород.
- Новиков О. О., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармацевтической химии и фармакогнозии ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», фармацевтический факультет, г. Белгород.