Исследование липофильных свойств биологически активных веществ играет важную роль в изучении связи структура – активность [5]. Липофильность влияет на проникновение биологически активных веществ через клеточные мембраны и является одним из ключевых детерминантов фармакокинетических свойств, значения которого позволяют предсказывать биологическую активность веществ. Характеристика распределения органических веществ в двухфазной системе октанол/вода – липофильность (log P) является физико-химическим параметром, который характеризует способность транспорта лекарственных веществ через клеточные мембраны [6, 8], определяя их абсорбцию и распределение в различных системах организма [3].

Цель данной работы заключается в установлении количественной зависимости между экспериментально определенными константами липофильности (logPэксп) и величиной противовоспалительной активности (ПВА). Объектом исследования являются производные антраниловой кислоты, при атоме азота которых содержатся ацильные или бензильный заместители, под общим названием N–арилзамещенные производные антраниловой кислоты (7 соединений).

X=H, R1=OH, R2= CH2C6H5 (I); X=Br, R1=NH2, R2= COC6H4 (2-COOH) (II); X= I, R1= NHCH2C6H5, R2= COCH2C6H5 (III); X= I, R1= NHCH2CH2OH, R2= COCH2C6H5 (IV); X=I, R1= NHCH2CH2OH, R2= COC6H5 (V); X=I, R1= NHCH3, R2= COC6H5 (VI); X=I, R1= NHCH2CH2OH, R2= CO(2-фурил) (VII).

Для изучения количественной зависимости фармакологического действия от физико-химических свойств соединений экспериментально определены величины коэффициента распределения октанол–вода (log Pэксп) спектрофотометрическим методом [4, 7]. Полученные результаты и их метрологические характеристики (S – стандартное отклонение среднего результата, ±∆ logP средний и – значение относительной погрешности среднего результата при уровне значимости (α=0,05)) для 7 соединений этого ряда (I – VII), приведены в таблице 1. Значения log Pэксп лежат в интервале от 1,81 до 2,85.

Для исследования связи структура – противовоспалительная активность использовали значения ПВАэксп (%) определенные через 4 часа, а для соединений ПВАэксп которых определено через 3 и 5 часов, среднее значение (таблица 1).

Таблица 1

Противовоспалительная активность и константы липофильности N– арилзамещенных производных антраниловой кислоты (I – VII)

С целью установления корреляционной зависимости между константой липофильности и ПВАэксп был проведен регрессионный анализ с использованием программы Statistica 6. В результате составлены три уравнения линейной, логарифмической и полиномиальной регрессии (таблица 2). На основании вычисленного значения р (при α=0,05) и критериев Фишера и Стьюдента значимыми являются уравнения 1 и 2.

Таблица 2

Корреляционные уравнения взаимосвязи констант липофильности с ПВАэксп

Для того чтобы проверить прогнозирующую способность составленных регрессионных уравнений, определены значения logPэксп трёх новых соединений из ряда N- арилзамещенных производных антраниловой кислоты (VIII – X) (таблица 3), которые были использованы для расчёта ПВА с помощью уравнений 1 и 2.

X=Br, R1=NH2, R2= COC6H5 (VIII); X=Br, R1=NH2, R2= COC6H4(4-NO2) (IX); X=H, R1=OH, R2= COC6H4(2, 4–Cl2) (X).

Таблица 3

Константы липофильности N-арилзамещенных производных антраниловой кислоты

(VIII – X)

Полученные результаты ПВАрассч и доверительные интервалы среднего предсказанного значения (Δ ПВАрассч) приведены в таблице 4. Доверительный интервал среднего предсказанного значения рассчитывали по формуле 1 [1]:

Δ ПВАрассч = t0,05 (n-k) × S × (1)

где, t0,05 – коэффициент Стьюдента при уровне значимости (α=0,05);

n – число наблюдений в уравнении (n=7);

k – число оцениваемых параметров регрессионной модели (k=2);

m – независимая переменная, используемая в уравнении регрессии (logP);

S – среднее квадратичное отклонение ошибок наблюдений;

– значение независимой переменной (log P), используемой в расчётах;

– среднее значение независимой переменной (log P), входящей в расчётную модель;

– сумма квадратов отклонений независимой переменной (log P), используемой в расчётной модели.

Теоретически рассчитанные величины ПВА соединений (VIII–X) подтверждены экспериментальными данными, которые приведены в таблице 4.

Таблица 4

Теоретически рассчитанные и экспериментальные значения ПВА N-арилзамещенных производных антраниловой кислоты (VIII–X)

По расчётам процент торможения каррегинового отёка составил свыше 30 %. Экспериментально определенные значения ПВА для соединений VIII–X находятся в интервале 38,75 – 52,20 %.

Таким образом, можно сделать вывод, что рассчитанные уравнения могут быть использованы в дальнейших исследованиях для поиска активных соединений с противовоспалительным действием в ряду N-арилзамещенных производных антраниловой кислоты.

Экспериментальная часть

Экспериментальное определение величин констант липофильности N-арилзамещенных производных антраниловой кислоты проводилось спектрофотометрическим методом в системе октанол – вода [4, 7]. Полученные результаты и их метрологические характеристики (S – стандартное отклонение среднего результата, ±∆ logP средний и – значение относительной погрешности среднего результата при уровне значимости (α=0,05)) для 10 соединения этого ряда (I–X), приведены в таблицах 1 и 3.

Противовоспалительное действие соединений (I–X) (таблицы 1 и 4) исследовали на белых нелинейных крысах массой 200–220 г на модели каррагенинового отёка. Изучаемые вещества вводили внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг в виде водной суспензии, стабилизированной твином–80, за 1 ч до инъекции флогогена. Крысам контрольной серии вводили эквивалентное количество раствора твина. В качестве препарата сравнения использовали ортофен, который вводили из расчёта 10 мг/кг в условиях, аналогичных описанным для тестируемых соединений. Объем лап животных измеряли онкометрически до и через 3, 4 и 5 ч после инициации воспаления [2]. Эффект оценивали по уменьшению прироста отека лап в сравнении с контрольной группой крыс.

Рецензенты:

Михайловский А. Г., д-р фармац. наук, профессор, зав. кафедрой неорганической химии, ГБОУ ВПО ПГФА Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Пермь.

Ярыгина Татьяна Ивановна, д-р фармац. наук, профессор кафедры фармацевтической химии очного факультета ГБОУ ВПО ПГФА Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Пермь.

Степанова Элеонора Федоровна, д-р фармац. наук, профессор кафедры ГОУ ВПО Пятигорской фармацевтической академии, Росздраватехнологии лекарств, г. Пятигорск.