Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,931

ДОСТИЖЕНИЕ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОГО И МОЛЕКУЛЯРНОГО ОТВЕТОВ У БОЛЬНЫХ ХМЛ: ПРОГНОЗИРОВАНИЕ С ПОМОЩЬЮ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ БЕЛКА Р53

Лунёв Д.А. 1 Овсянникова Е.Г. 1 Заклякова Л.В. 1 Левитан Б.Н. 1
1 Государственное бюджетное образовательное учреждение "Астраханская государственная медицинская академия" Минздравсоцразвития России
В работе изучена концентрация индуктора апоптоза белка р53 в сыворотке крови больных хроническим миелолейкозом (ХМЛ), получавших терапию гливеком более 24 месяцев. Повышение концентрации белка р53 в сыворотке крови у больных ХМЛ с отсутствием полного цитогенетического и большого/полного молекулярного ответов на всех сроках терапии гливеком направлено на поддержку программы апоптоза для удаления патологического клона. Концентрация р53, в сыворотке крови больных ХМЛ отражает прогноз заболевания, его патогенез (наличие или элиминацию Ph+ клона) и может быть использована в качестве дополнительного метода прогноза ХМЛ.
р53.
апоптоз
гливек
хронический миелолейкоз (ХМЛ)
1. Барышников А.Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин. - М. : Эдиториал УРСС, 2002. - 320 с.
2. Волкова М.А. Хронический миелолейкоз // Клиническая онкогематология / под ред. М.А. Волковой. - М. : Медицина, 2007. - С. 552-585.
3. Долгосрочные результаты применения иматиниба (Гливек) в лечении больных хроническим миелолейкозом в фазе акселерации / Л.А. Антипова [и др.] // Онкогематология. - 2009. - № 1. - С. 14-20.
4. Желтухин А.О. Повседневные и индуцируемые функции гена р53 / А.О. Желтухин, П.М. Чумаков // Успехи биологической химии. - 2010. - Т. 50. - С. 447-454.
5. Копнин Б.П. Многоликий р53: разнообразие форм, функций, опухольсупрессирующих и онкогенных активностей / Б.П. Копнин, П.Б. Копнин, Н.В. Хромова и др. // Клиническая онкогематология. - 2008. - Т. 1. - № 1. - С. 2-9.
6. Отдаленные результаты выживаемости больных в поздней хронической фазе Ph+ хронического миелолейкоза при лечении иматиниб мезилатом (Гливек®) / Стахина О.В., Туркина А.Г., Гусарова Г.А. и др. // Вестник гематологии. - 2009. - Т. 5. - № 2. -С. 42.
7. Резистентность при терапии гливеком у больных хроническим миелолейкозом в фазе акселерации / С.С. Круглов, А.Г. Туркина, Н.Д. Хорошко и др. // Гематология и трансфузиология. - 2007. - Т. 52. - № 2. - С. 17-25.
8. Результаты многоцентрового исследования терапии гливеком больных хроническим миелолейкозом в хронической фазе / Зарицкий А.Ю., Ломаиа Е.Г., Виноградова О.Ю. и др. // Гематология и трансфузиология. - 2007. - Т. 52. - № 2. - С. 13-17.
9. Чумаков П.М. Белок р53 и его универсальные функции в многоклеточном организме // Успехи биологической химии. - 2007. - Т. 47. - С. 3-52.
10. Baccarani M., Cortes J., Pane F. et al. / Chronic myeloid leukemia: an update of concepts and management recommendations of European LeukemiaNet. // J Clin Oncol 2009. - 27 (35) : 6041 - 51.
Исследование молекулярных механизмов запрограммированной гибели клетки стало в последние годы одной из актуальных проблем в клинике внутренних болезней, и в гематологии в частности [1].

В патогенезе хронического миелолейкоза (ХМЛ) определяющую роль играет патологическая Ph-хромосома и её молекулярный эквивалент - химерный ген BCR-ABL, обладающий тирозинкиназной активностью. Основными патологическими эффектами этого гена являются: нарушение межклеточных взаимодействий, усиленная пролиферация и подавление апоптоза [2]. Одним из центральных звеньев в регуляции клеточного цикла и процесса апоптоза является ген р53 и его продукт - белок р53 [4; 5; 9].

Прогноз больных хроническим миелолейкозом до применения гливека был всегда пессимистичным [2]. Анализ применения ингибитора тирозинкиназ I поколения - гливека продемонстрировал возможности современной таргетной терапии [6; 8]. Однако, несмотря на «целевой» характер терапии, у части больных ХМЛ не удается достичь плановых генетических и молекулярных ответов, заболевание прогрессирует до стадий акселерации и бластного криза [3; 7]. Это обстоятельство указывает на особый интерес и значимость поиска дополнительных прогностических критериев исхода ХМЛ.

Цель исследования: изучить взаимосвязь развития цитогенетических и молекулярных ответов у больных хроническим миелолейкозом и концентрации в сыворотке крови маркера индукции апоптоза белка р53.

Материалы и методы: исследование проводилось на основе собственных наблюдений и данных медицинской документации. Были изучены 72 амбулаторные карты больных ХМЛ. Длительность лечения гливеком составила от 18 до 36 месяцев. Продолжительность заболевания до начала терапии гливеком была от 0 до 87 месяцев. Наблюдение за больными ХМЛ было проведено в гематологическом отделении консультативной поликлиники Государственного учреждения здравоохранения «Александро-Мариинская областная клиническая больница» г. Астрахани и в поликлинике Государственного учреждения здравоохранения «Волгоградский областной клинический онкологический диспансер № 1» в период с 2007 по 2010 г.

На каждого больного заполнялась индивидуальная карта обследования, включающая паспортную часть, развернутый клинический диагноз, результаты первичного осмотра, данные анамнеза, статус на момент диагностики и начала лечения гливеком, а также в динамике, данные лабораторных исследований на момент диагностики заболевания и в динамике. Все больные имели клинико-морфологическое и цитогенетическое подтверждение диагноза хронического миелолейкоза. Характер ответа на лечение определялся согласно критериям Европейского общества по изучению хронического миелолейкоза European Leukemia Net (ELN-2009) [10].

В группу наблюдения включены 60 больных ХМЛ (23 мужчины и 37 женщин). Средний возраст составил 52,57 ± 1,59 лет. Критерии включения больных в исследование: хроническая фаза хронического миелолейкоза (определялась согласно критериям ELN 2009) [10]; терапия ингибитором тирозинкиназ первого поколения - иматинибом мезилатом (гливек). Критерии исключения: больные ХМЛ, имеющие сопутствующую патологию, при которой возможно изменение концентрации белка р53 (сахарный диабет, ишемическая болезнь сердца, хронические заболевания желудочно-кишечного тракта, хронические заболеваниями органов дыхательной системы, перенесенный инсульт, трансплантация костного мозга).

В контрольную группу были отобраны здоровые доноры - 25 человек (10 мужчин и 15 женщин). Средний возраст доноров составил 49,20 ± 1,27 лет, сопоставимый с основной группой.

В процессе работы проводились молекулярно-генетические исследования крови методом ПЦР в реальном времени (количественная оценка экспрессии химерного гена BCR-ABL типа р210), исследования костного мозга: цитологические (миелограмма), цитогенетические - определение транслокации t(9;22)(q34;q11), молекулярно-цитогенетические - флуоресцентная in situ гибридизация хромосом (FISH) с ДНК зондом к слитному гену BCR- ABL.

Иммуноферментное исследование сыворотки крови проводилось с использованием наборов для количественного определения белка р53. Были использованы тест-системы фирмы Bender MedSystems (Австрия).

При статистической обработке полученных нами данных была использована статистическая программа SPSS Statistics (Version 17.0). Анализ данных включал в себя среднее значение, ошибку средней арифметической. Для определения достоверности показателей использовали двусторонний критерий Student. Если t был больше соответствующих значений по таблице Стьюдента, различия между показателями сравниваемых величин считали достоверными. Проверка выборки на нормальность распределения проводилась по критериям Колмогорова-Смирнова с поправкой по Лилли-Фору.

Результаты исследования и их обсуждение: концентрация индуктора апоптоза - белка р53 в сыворотке крови в контрольной группе здоровых лиц составила 1,16 ± 0,18 Е/мл. Полученные нами показатели уровня концентрации р53 оказались сопоставимыми с приведенными данными сопроводительной аннотации к набору реагентов.

Нами определена концентрация р53 у больных ХМЛ, начиная с 18 месяцев терапии, затем в динамике каждые полгода - на 24, 30, 36 месяцев лечения гливеком.

Все больные ХМЛ были распределены по следующим критериям: наличие и отсутствие полного цитогенетического, молекулярного ответов - через 18-36 месяцев от начала терапии гливеком (таблица 1).

Таблица 1 - Средние значения концентрации р53 у больных ХМЛ с наличием и отсутствием полного цитогенетического ответа (m)

 

Средние значения концентрации р53 (Е/мл)

Сроки терапии

гливеком (мес.)

 

Контрольная

группа

Пациенты с полным цитогенетическим ответом

 

Пациенты

с отсутствием полного цитогенетического ответа

18

1,16 ± 0,18

(n = 25)

 

1,19 ± 0,06

(n = 36)

(p>0,05)

 

1,81 ± 0,14

(n = 24)

(p<0,005)

(p1<0,005)

 

24

 

 

1,16 ± 0,18

(n = 25)

1,44 ± 0,08

(n = 29)

(p>0,05)

 

1,72 ± 0,17

(n = 31)

(p<0,05)

(p1>0,05)

 

30

 

 

 

1,16 ± 0,18

(n = 25)

 

 

 

2,42 ± 0,20

(n = 36)

(p<0,001)

 

1,54 ± 0,13

(n = 23)

(p>0,05)

(p1<0,001)

 

36

 

 

 

1,16 ± 0,18

(n = 25)

2,54 ± 0,18

(n = 37)

(p<0,001)

1,70 ± 0,13

(n = 20)

(p<0,05)

(p1<0,001)

P - достоверность различия показателей по сравнению с контрольной группой.

Р1 - достоверность между группами по изучаемому показателю.

Из представленной таблицы следует, что у больных ХМЛ с ПЦО на 18 и 24 месяца от начала терапии гливеком концентрация р53 практически равна концентрации р53 контрольной группы. К 30 и 36 месяцам данный показатель повышен вдвое, при этом отмечается достоверность различий по отношению к контрольной группе.

У пациентов с отсутствием ПЦО с 18 до 36 месяцев лечения гливеком наблюдается умеренное повышение концентрации р53. Результаты на 18, 24, 36 месяцев достоверно различны по отношению к контрольной группе и к группе больных с наличием ПЦО.

У больных ХМЛ с наличием полного молекулярного, большого молекулярного ответов (ПМО/БМО) и отсутствием ПМО/БМО наблюдается аналогичное распределение средних значений концентрации р53 (таблица 2), как и у пациентов с наличием и отсутствием ПЦО.

Таблица 2 - Средние значения концентрации р53 у больных ХМЛ с наличием ПМО/БМО и отсутствием молекулярного ответа (m)

 

Средние значения концентрации р53 (Е/мл)

Сроки терапии гливеком (мес.)

Контрольная

группа

Пациенты

с наличием

ПМО/БМО

Пациенты

с отсутствием ПМО/БМО

18

 

 

1,16 ± 0,18

(n = 25)

 

 

1,32 ± 0,09

(n = 21)

(p>0,05)

 

1,51 ± 0,09

(n = 39)

(p>0,05)

(p1>0,05)

24

 

 

1,16 ± 0,18

(n = 25)

 

 

1,29 ± 0,08

(n = 25)

(p>0,05)

 

1,78 ± 0,15

(n = 35)

(p<0,01)

(p1<0,005)

30

 

 

1,16 ± 0,18

(n = 25)

 

 

2,61 ± 0,24

(n = 30)

(p<0,001)

 

1,58 ± 0,11

(n = 29)

(p>0,05)

(p1<0,001)

36

 

 

1,16 ± 0,18

(n = 25)

 

 

2,81 ± 0,21

(n = 30)

(p<0,001)

 

1,55 ± 0,10

(n = 27)

(p>0,05)

(p1<0,001)

P - достоверность различия показателей по сравнению с контрольной группой.

Р1 - достоверность между группами по изучаемому показателю.

Повышение концентрации р53 в сыворотке крови у больных ХМЛ с отсутствием ПЦО и МО на всех сроках терапии гливеком направлено на поддержку программы апоптоза через индуктор апоптоза р53 для удаления патологического клона.

Среднестатистические показатели концентрации р53 у пациентов, достигших ПЦО, ПМО/БМО на 18 и 24 месяца терапии гливеком близки к цифрам контрольной группы и подтверждают элиминацию патологических клеток. Однако через 30 и 36 месяцев терапии значения р53 повышены. Увеличение концентрации р53 связано с тем, что количество пациентов на 30 и 36 месяцев терапии гливеком с ПЦО 36 и 37 соответственно, но при этом больных с ПМО/БМО к данному сроку 30, т.е. 6 и 7 больных через 30 и соответственно 36 месяцев терапии гливеком не имеют ПМО/БМО. С другой стороны, данный факт может расцениваться как присутствие в организме больного ХМЛ минимального количества Ph-позитивных клеток, не определяемых при цитогенетических и молекулярных исследованиях.

Заключение: определение концентрации р53 в сыворотке крови больных ХМЛ может быть использовано в качестве дополнительного метода прогнозирования исхода ХМЛ. Определение концентрации р53 необходимо проводить в динамике каждые 6 месяцев терапии гливеком.

Рецензенты:

  • Ларина Н.Н., д.м.н., заместитель главного врача по медицинской части ГУЗ «Александро-Мариинская областная клиническая больница», г. Астрахань.
  • Эсаулова Т.А., д.м.н., профессор, заведующая терапевтической службой НУЗ «Медико-санитарная часть», г. Астрахань.

Библиографическая ссылка

Лунёв Д.А., Овсянникова Е.Г., Заклякова Л.В., Левитан Б.Н. ДОСТИЖЕНИЕ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОГО И МОЛЕКУЛЯРНОГО ОТВЕТОВ У БОЛЬНЫХ ХМЛ: ПРОГНОЗИРОВАНИЕ С ПОМОЩЬЮ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ БЕЛКА Р53 // Современные проблемы науки и образования. – 2011. – № 6.;
URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=5199 (дата обращения: 29.07.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074